Способ выделения ферментов

ъ.ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК ПАТЕНТУ ЗБ 366 Союз Советских Социалистических Республикаявлено 16,Х.1968 (Эй 1272233/28-13)Приоритет 02.11.1968,ВП 6 а/129971, ГДР С 120 13/10 С 07 д 7/02 Комитет по делам обретений и открытий при Совете Министров СССРУДК 577,15.07(08 Опубликовано 21.1 Х.19 ллетеньДата опубликования описания 02.Х 1.1971 Авторыизобретен ИностранцыКлаус Пише и Герхард Шефер Демократическая Республика) странное предприятиеБ АрцнаимиттельверкДемократическая Республика) орст Тепфер (ГерманскаяИн ФЕ Германская явите ПОСОБ ВЬ 1 ДЕЛЕН РМЕНТОВ лу- фером,Зависимый от патентаИзобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам выделения ферментов.При известном способе выделения ферментов из фильтрата культуральной жидкости, полученной при выращивании их продуцентов, путем введения в фильтрат танина с последующим его удалением ацетонам, недостаточно полно выделяются ферменты.С целью более полного выделения ферментов в фильтрат наряду с танином вводят органическое вещество, а именно казеиновый и мясной пептон, желатин, сухое цельное молоко, обезжиренное молоко, сыворотку, замочную кукурузную воду, причем устанавливают рН фильтрата 5,0 - 6,0.Желательно вводит танин в виде раствора, содержащего 3 - 5 г танина, в количестве 30 мл на 1 л фильтрата; молоко или сыворотку - в количестве 50 - 200 мл на 1 л фильтрата, замочную кукурузную воду - в количестве 10 - 100 мл на 1 л фильтрата, содержащую 3% суммарного азота.Способ заключается в следующем.Фильтрат культуральной жидкости, по ченный при выращивании продуцентов ментов, смешивают с растворимым белк способным осаждаться танином.,В зависимости от величины добавки белка изменяется специфическая активность ферментных препаратов прп почти неизменномвыходе.При производстве ферментов, применяющихся для фармацевтических препаратов плдля повышения качества пищевых продуктов,в качестве добавок используют казеин, молоко, сухое молоко, сыворотку, желатин, оксижелатин, пептон и растительные белки, например замочную кукурзную воду,О Для производства ферментов в техническоммасштабе используют замочную кукурузнуюводу.Перед введением танина устанавливают рНфильтрата ,культуральной жидкости 5,0 - 6,015 введением кислоты или щелочи,При прибавлении танина образуется нерастворимый комплекс белка с танином, каторьш содержит большое количество ферментов и О может быть отделен ат х.идкой фазы известным способом после выдерх(ивания в течение 2 - 24 час.Из выделенного осадка танин извлекаютпри помощи многократного перемешпвания с 5 ацетоном.Танин вводят в виде раствора, содержащего 3 - 5 г танина, в количестве 30 лил на 1 л фильтрата, молоко пли сыворотку вводят в количестве 50 - 200 мл на 1 л фильтрата, и О замочную кукурузную воду - в количестве315366 4 Составитель В. ДуньеРедактор Г, Бялобжеская Техред 3. Н. Тараненко Корректор Т. А. Миронова Заказ 3154/16 Изд.1325 Тираж 473 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2 10 - 100 мл на 1 л фильтрата, содержащую 3% суммарного азота,П р и м е р 1, 5 л фильтрата культуральной жидкости, полученной при выращивании штамма Азрегрцэ ос 1 гасецз, соединяют при перемешивании со 100 мл жидкости, которая содержится в кукурузе. Полученный раствор доводят до рН 5,5 добавление 1 Х едкого патра. Непосредственно за этим, для осаждения ферментов, медленно прибавляют при легком перемешивании раствор 20 г танина в 150 мл воды.При этом образуется осадок, который выделяют после выдерживания в течение 2 чав при комнатной температуре с помощью центрифугирования.Полученный влажный осадок трижды перемешивают с 250 мл ацетона в течение 10 мин для удаления танина из комплекса фермента с танином.Промытый ацетоном концентрат фермента сушат под вакуумом при комнатной температуре и получают 8,65 г сухого вещества со специфической активностью 0,81 СЕ/мг. Это соответствует выходу 1400 СЕ на л ферментационного раствора. П р и и е р 2. 300 мл культу рального фильтрата штамма Азрегр 1 цз ос 1 гасецз, доведенного до р 1-1 5,5 добавление 1 М едкого натра, смешивают с 600 мг казинового пептона, растворенного в ,5 мл воды. Для осаждения протеазы при легком перемешивании добавляют 9 мл раствора танина, в котором содержится 1,2 г танина, в результате образуется осадок в виде хлопьев, представляющий собой комплекс танина с ферментами,Полученный осадок отделяют от растворацентрифугированием под воздействием силыв 5000 г и непосредственно за этим четыре раза перемешивают с ацетоном для отделения5 танина,Полученный продукт сушат в вакуум-эксикаторе,По окончании сушки получают 520 мг протеазы со специфической активностью, равной10 0,58 СЕ(мг,Это соответствует выходу 1005 СЕ на лкультурального фильтра га. Предмет изобретения15 1. Способ выделения ферментов из фильтрата культуральной жидкости, полученной при выращивании их продуцентов, путем введения в фильтрат танина с последующим его удалением ацетоном, отличающийся тем, что, 20 с целью более полного выделения ферментов,в фильтрат наряду с танином вводят органическое вещество, а именно казеиновый и мясной пептон, желатин, сухое цельное молоко, обезжиренное молоко, сыворотку, замочную 25 кукурузную воду, причем рН фильтрата устанавливают равным 5,0 - 6,0.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтотанин вводят в виде раствора, содержащего 3 - 5 г танина, в количестве 30 мл на 1 л 30 фильтрата.3. Способ по п, 1, отличающийся тем, чтомолоко или сыворотку вводят в количестве 50 - 200 мл на 1 л фильтрата.4. Способ по п, 1, отличающийся тем, что 35 замочную кукурзную воду вводят в количестве 10 - 100 мл на 1 л фильтрата, содержащую 3% суммарного азота.