Продуцент протеолитическихферментов

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Советских Социалистических РеспубликЗаявлено 21.1.1969 ( 1302445/28-1с присоединением заявкиПриоритет МПК С 12 т 13/10С 121 1/02УДК 576.8.094(08 Комитет по делам изобретений и открыти при Совете Министров СССРуоликовано 26 Х,1970. Бюллетень18та опубликования описания 27 Х 11.1970 Авторыизобретения И, Д. Касаткина и Е. Т, ЖелтоваИнститут микробиологии АН СССР аявитель ШТАММ АЯРЕК 61.ЛЯ ТЕт,РСО.АИНМИ Н- ПРОДУЦЕНТ ПРОТЕОЛИТИЧЕСФЕРМЕНТОВ Предлагаемое изооретение предназначено для использования в ферментной промышленности, а именно для получения протеолитических ферментных препаратов, обладающих фибринолитическими и тромболитическпмп 5 свойствами.Известен штамм Азрего 11 пз 1 егпсоа, продуцирующий протеолитические ферменты, обладающие фибринолитическими свойствами.Ппедлагаемый штамм Азрегр 11 цз 1 егпсо 1 а 10 ИНМИ Нпозволяет получать ферменты более высокой активности. Он получен путем ультрафиолетового облучения конидий исходного штамма Аврегр 1 цв 1 егг 1 со 1 а ИНМИ5 при дозе 12 Х 10 эрг/лсме и последующего от бора колоний.Предлагаемый штамм по сравнению с исходным продуцирует протеолитические ферменты более высокой активности. Фибринолитическая активность его в среднем на 70% 20 выше, чем исходного штамма, Высокая фибринолитическая активность получена при выращивании мутанта на простой сахарозноминеральной среде (без дополнительного внесения органических источников азота), что 25 имеет важное значение прп очистке и выделении фермента в кристаллическом состоянии,Морфология гриба (при выращивании на агаре Чапека с сахарозой). Гифы прямые или слегк 6 извитые, шириною 5 - 8 лск, Конидие носцы прямые, обильные, бесцветные, септированные, достигающие 750 - 1400 мк длины и более, от 8 до 15 мк ширины. Верхушечный пузырь почти круглый, 24 - 65 мк в диаметре. Встречспотся мелкие, конидиальные головки диаметром 150 мк и крупные - диаметром 220 - 300 мкСтеригмы однорядные 12 - 17 Х 5 - 7 лск. Иногда встречаются уродливые стеригмы, короткие и тонкие 10,5 Х 4,0 мк или более длинные 18 Х 4,8 лск. Конидип полпморфны, круглые, реже овальные с шероховатой оболочкой, Наиболее часто встречаются круглые конидии 6,9 - 7,0 мк в диаметре.Органическая среда. На сусло-агаре колонии круглые, темно-коричневые, пушистые, рыхлой структуры. Диаметр восьмпсуточной гигантской колонии равен 90 мм.На разбавленном сусло-агаре (3,5 Блг) конидиеобразованпе обильное. Край колонии белый, пушистый, не погруженныи в агар. Колония с нижней поверхности серовато-кремовая, слабоскладчатая. Штамм образует склероции, особенно в старых культурах.Синтетическая среда. На агаризованной среде Чапека с сахарозой колонии слабо- складчатые, бархатистые, рыхлой структуры. На восьмыс сутки роста при 32 С диаметр колонии равен 85 - 87 мм, а у исходного штамма 65 - 80 мм, цвет верхней поверхности271471 Составитель ПолянскаяРедактор О. Кузнецова Тсхрсд Д. В. Куклина 1 Горректор И. С. Хлыстова Заказ 2317/13 Тираж 480 Подписпос ЦН 1111 ПИ Когяитста по дслаги изобретений и открытий при Советс Министров СССР Москва, Ж.35, Раушская паб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 колонии изменяется с возрастом от желтого до бурого п темно-коричневого. Конпдиеобразованпе обильпое. Отличается от псходпого штамма более темным цветом конидий. Край колонии серовато-белый, пушистый, Контуры колонии неровные. Цвет нижней поверхности колонии изменяется с возрастом от серого, оранжевого до коричневого с фиолетовым оттенком, На поверхности колонии образуются склероцпп черного цвета.Мясо-пептонная желатина (МПЖ). При выращивании на желатине образует складчатую пленку, мицелий белый, желатину разжижает полностью.На молоке - рост в виде пленки, мицелий белый с кремовым оттенком, молоко свертывает и пентонизирует. Пигмента в молоко не выделяет.На ломтиках картофеля - рост бархатистый, коричневый, более темный, чем у исходного штамма, Конидиеобразование обильное.Окраску субстрата не изменяет.На жидкой сахарозо-минеральной среде желтого пигмента не образует в отличие от исходного штамма. Мицелий и культуральпая жидкость гриба серого цвета.Грибы выращивали глубинным методом на сахарозо-минеральной среде следующего состава, о/о: сахарозы 0,72; глюкозы 0,36; КХОа 0,2; МдЬО 4 0,123; КНРО 1,36; микроэлементы (РеЯО ХпЯО МпЯО,) следы, рН среды 6,8. Фибринолитическую активность культуральной жидкости определяли двумя методами: на пластинках фибрина по методу Лз(гпр и М 01 ег 1 к (1952) и на экспериментально полученных тромбах крови человека в опытах 1 п 11 го. Фпбринолитическая активность штамма Нсоставляет в среднем 855 ед/лл, а активность исходного штамма в тех же условиях равна 496 ед/лл, т. е. активность штамма Нна 70% выше, чем у исходного.Растворение тромба крови под действием культуральной жидкости исходного штамма происходит за 4 - 5 час, а у штамма Ноно наступает через 3 час. Таким образом, предлагаемый штамм Лзрегр 11 пз 1 егг 1 со 1 а Нобладает более активнь;м комплексом протеолитических ферментов, действующих па фибрин и растворяющих тромбы крови, по сравнению с исходной культурой.Ферментггивные свойства штамма Н стойко сохраняются при пересевах и хране нпп. культуры на 3,5 Ьлг сусло-агаре в течение двух лет. Предмет изобретенияШтамм Лзрегр 1 пз 1 егг 1 со 1 а ИНМИ 1-1-20 -продуцент протеолитических ферментов,Морфология. Гифы прямые или слегка пзвитые, шириною 5 - 8 лк. Конидиеносцы прямые, обильные, бесцветные, септированные,длина их достигает 750 в 14 лк, ширина8 - :15 лк.Верхушечный пузырь круг.пый диаметром24 - 65 лк. Встречаются мелкие конидиальныеголовки диаметром 150 лк и крупные -220 - 300 лк,Стеригмы однорядные 12 - 17 Х 5 - 7 лк.Конидии круглые, реже овальные с шероховатой оболочкой, диаметром 5 - 8 лк.Синтетическая среда. На среде Чапека ссахарозой колонии бархатистые, слабоскладчатые, рыхлые, цвет верхней поверхности колоний изменяется с возрастом от желтого добурого и темно-коричневого. Край колониисеровато-белый, пушистый, Контуры колонийнеровные. Цвет нижней поверхности изме 30 няется от серого, оранжевого до коричневогос фиолетовым оттенком. Штамм образуетсклероции черного цвета. Диаметр колониина восьмые сутки роста достигает 85 - 87 лю.Органическая среда. На сусло-агаре коло.35 нии круглые, темно-коричневые, пушистые,рыхлой структуры, Край колоний белый, пушистый, не погруженный в агар. Обратнаясторона колонии серовато-кремовая,Мясо-пептонный желатин образует складча 40 тую пленку, мицелий белый, желатин разжижает.На молоке - рост в виде пленки, мицелийбелый с кремовым оттенком, молоко свертывает и пептонизирует, Пигмента в молоко не45 выделяет.На ломтиках картофеля - рост бархатистый, коричневый. Конидиеобразование обильное. Окраску субстрата не изменяет.