Способ выделения ферментного препарата липазы

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз Соеетскик Социалистическкк Республик.ЧПК С 07 д 710 иорите Комитет по делам зо 0 ретений и открытий ори Сосете Мииистрое СССР577.15.85(088 Опубликовано 26 Х.1970, Бюллетень Ъо 18 Дата опубли ния описания 27 Л 111.1970 Авторызобретени. Полонская, Н. Д. Попова и В. Н. Цыганкова союзный научно-исследовательский институт мясно промышленности явите СПОСОБ ВЪДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ЛИПАЗЬ выхода фермется на первой ст вменять рН средь от 9,0 до 6,0. О аммония цсвиде. Очистку нтного преупени высавначале от саждающцй пользуют в чипазы осуИзобретение относится к ферментной промышленности и представляет собой способ выделения ферментных препаратов, например липазы, из сырья животного происхождения. Препарат может быть использован как реактив для исследовательских работ.Уже известен способ получения препарата липазы из сухой, обезжиренной и измельченной поджелудочной железы свиней.Липазу получают экстрагированием измельценной обезжиренной и высушенной ацетоном железы с последующим удалением балластных белков и осаждением липазы путем многократного высаливания сульфатом аммония и дальнейшей сушкой липазы.Большие объемы реакционных смесей, получающихся в результате применения насыщенного раствора сульфата аммония в качестве осаждающего реагента, а также нали.чие большого количества слизистых и балластных веществ затрудняет фильтрацию раствора. Это значительно усложняет процесс производства липазы и увеличивает его трудоемкость.Для повышенияпарата предлагаеливания резко из6,0 до 9,0 и вновьреа гент - сульфат1кристаллическом ществляют дцализом против 0,02 и. ацетатцого буфера прц рН, равном 5,0.Предлагаемый способ осуществляют по следуюцей технолопш.Сухую измельченную ц обезжиренную поджелудочную железу свиней экстрагцруют водой в соотношении 1: 10, затем при перемешиванцц отделяют жмых. После этого высаливают балластные белки и осаждают липазу 10 путем многократного высалцвания сульфатомаммония.Прц первоц ступени высаливанце балласт.ных белков из экстракта кристаллическим сульфатом аммония осуществляют до степени 15 насыщения 0,2, прц этом резко изменяют рНсреды от 6,0 до 9,0 и от 9,0 до 6,0.После фильтрации лппазу высалцвают цзфцльтрата крцсталлическцм сульфатом аммония до степени насыщения 0,5, затем опять 20 фильтруют и растворяют осадок лцпазы вводе в соотношении 1: 4 к весу осадка.Высаливание балластных белков кристаллическим сульфатом аммония до степени насыщения 0,2 осуществляют на следующей сту пени и фильтруютЗатем лппазу высалцвают цз фильтратакристаллическим сульфатом аммония до степени насыщения 0,45, фильтруют ц растворяют осадок лцпазы в воде в обьеме 1: 4 с З 0 добавлением 1 Л раствора сульфата аммония27147,2 Предмет изобретения Составитель 11. СеливерстоваРедактор С. Лазарева Техред Л. В. Куклина Корректор И. С. Хлыстова Заказ 2317/4 Тираж 480 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прп Совете Министров СССРМосква, )К, Раугнскан наб., д. 415 Типография, пр. Сапунова, 2 в соотношении 1: 0,4 соответственно к весу осадка.После этого лнпазу осаждают ацетоном прн - 12 С до концентрации 46 о , отстаивают нри температуре - 12 С, фильтруют и растворяют осадок липазы в воде в соотношении 1: 10 к весу осадка при рН 7,6.Затем осуществляют днализ раствора лппазы против 0,02 н. ацетатного буфера прн р 1-1 5,0 в течение 48 чггс и лиофильную сушку лип азы.П р и и е р. 50 г сухой, измельченной и обезкиренной поджелудочной железы свиней экстрагируют в 500 лчл воды в течение 2 час при перемешивании и отделяют жмых. Затем измеряют объем полученного экстракта и высаливают балластные белки до степени насыщения 0,2 кристаллическим сульфатом аммония, Для коагуляции балластных белков производят быструю смену рН раствора, увеличивая его от 6,0 до 9,0 добавлением аммиака и затем резко снижая от 9,0 до 6,0 подкислением 50 о -ным раствором серной кислоты. Балластные белки отделяют фильтрацией. Из фильтрата липазу осаждают кристаллическим сульфатом аммония до степени насыщения 0,5 и отделяют фильтрацией под вакуумом. Полученный осадок липазы растворяют в 4 об. воды с последующим высаливанием балластных белков кристаллическим сульфатом аммония до 0,2 насыщения. Балластные вещества удаляют фильтрацией. Из полученного фильтрата вновь осаждают липазу кристаллическим сульфатом аммония до 0,45 насыщения и отфильтровывают под вакуумом. Осадок липазы растворяют в 4 об. воды с добавлением 0,4 об. ( к весу осадка) 1 М раствора сульфата аммония. Осаждение липазы нз раствора производят ацетоном прн температуре - 12 С и 46 -ном насыщеьнш.После 30-агинутного неремешивания нри той 5 же температуре осадок линазы отфильтровывают и растворяют в 10 об, воды, подщелоченной раствором аммиака до рН 7,6. Раствор деалнзуют против 0,02 и. ацетатного буфера нри рН 5,0 в течение двух суток и лно фильно высушивают.Выход лиофильно высушенного препараталипазы 0,15 г.Активность препарата 55000, 83000 (потрибутприну).15 1. Способ выделения ферментного препарата липазы из животного сырья, например 20 поджелудочной железы свиньи, путем экстрагирования измельченной обезжиренной и высушенной ацетоном железы с последующим удалением балластных белков и осаждением липазы путем многократного высаливания 25 сульфатом аммония, и дальнейшей очисткойлипазы, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода ферментного препарата, на первой ступени высаливания резко изменяют рН среды вначале от 6,0 до 9,0 и вновь от 30 9,0 до 6,0.2. Способ по п, 1, от гичающийся тем, чтосульфат аммония используется в кристаллическом виде3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что 35 очистку липазы осуществляют диализом против 0,02 н ацетатного буфера при рН, равном 5,0.