Ссср i •-•я-. 1сид, ч•

,ЧПК омитет по пела изобретений и открытий при Совете Министров СССР-Волжинск Н. Васильев, В,С, Корнев, А. А ов, В. А. Разм В, Виноградо ий институт са СССР, ПВор бьевин -" "1 М 3 . рст ает фбо онй"" ь Заявитель чно-исследователь нис та тР тф л тРе чь,1 ю. Т;,ПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА ХИМИЧЕСКИХ РИККЕТСИОЗНЫХ ВАКЦИНИзвестны способы производства химических риккстсиозных вакцин путем выделения растворенного риккетсиозцого антигена,По предлагаемому способу культуру риккстсий суспсцдируот в растворителе, ндпримср в физиологическом растворе, цсцтрифугируют ц в дальнейшем используют цадосадочцую жидкость или корпускулы обрабатывают эфиром, экстрагируя цз цих затем антигсц трихлоруксусцой кислотой. Очистку производят, например, путем осаждения органическими растворителями или кислотами, фракциоцировация цсйтральцымц солями или ца иоцообмеццых колонках.Это позволяет уменьшить реактогецность и аллергеццость вакцин, обеспечить стандартность ацтигсца, повысить его чистоту и концентрацию, д также дает возможность вклочать вакцину в ассоциированные препараты.П р и м е р 1. Приготовление нативцых препаратов растворимого ацтигена риккетсий Провачека.Накопление риккетсий осуществляется либо на куриных эмбрионах, либо путем инфицирования вшей. Подготовленный материал гомогенизируют и суспендируют в 0,05%-ном растворе хлористого натрия, содержащего 0,2 п/, формалина так, чтобы получить 10 п,- ную суспецзию. Суспензию вьтдерживагот 20 - 24 час при 4 - 6 С, цецтрифугцруют 60 згиин при 5000 об(.иин и декантируют надосадочцую жидкость. Полученные препараты контролируют путем высева ца питательные среды, Стандартизацию препаратов осуществляют разведением стерильным 0,850/и-ныхг раствором поваренной соли, контролируя содержание ацтцгеца по РСК.П р и м е р 2. Приготовление препаратоврастворимого ацтигеца риккетсий Барнета.10 Для накопления возбудителя в жслточныемешки куриных эморионов вводят ицфицирукцццй материал риккетский Барнета, находящихся в 1 фазовом состоянии, по 0,25 - 0,3 я,г и ишубируют 8 - 9 дней при 37 - 38 С. Эмбри оцы, павшие до истечения 5 суток, уничтожают, а оставшиеся в живых и павшие более, чем через 5 суток сохраняют прц 4 С, вскрывают, извлекают жслточцыс мешки и гомогеццзируют. Из гомогсната готовят 20%-цую суспецзцю в 0,850/и-нолт растворе поваренной соли с добавлением 5 п,-ного фосфатного буферногоо р д створ а и 0,5 п/и формалина, Суспензию после выдерживация в течение 10 суток прц 4 С встряхивают с 0,2 объема наркозного эфира и отделяют нижний слой. Обработку эфиром повторяют несколько раз, пока эфирный слой це будет оставаться бссцветиыхт после отстаивя 11 ця в течение ночи. К среднему слою добавляют 0,5 объема физиологического 30 раствора цлц воды и вновь обрабатывают3эфиром, сливая нижний слой. Водные фракции после дополнительной обработки соединяют и дополнительно обрабатывают эфиром. Полученные обогащенные риккетсиями фракции центрифугируют 5 - б час при 5000 обхин, растирают осадок в ступке с небольшим количеством физиологического раствора или воды и добавляют равный объем 12 в/в-ного р аствор а трихлоруксусной кислоты. Смесь выдерживают 6 час при 0 - 1 С при частом перемсшив анни, центрифугируют 30 - 40,яин при 3 - 4 тыс, об/.ниц, суспендируют осадок в небольшом количестве воды или физиологического раствора и вновь обрабатывают трихлоруксусной кислотой.Надосадочная жидкость после цснтрифугирования содержит растворимый антигерои риккетсий Барнета, Полученные препараты подвергают диализу сначала против водопроводной воды (34 ч), а затем против дистиллированной (24 ч) при 4 - бС. Диализаты после стандартизации и контроля используют в качестве прививочных йрепаратов. Для получения более, концентрИрованных препаратов с высокой степенью очистки полученные диаа Ф 4Д 237343 лизаты смешивают с 3 объемами этилового спирта, оставляют на 24 - 48 ч при 4 - бС, отделяют выпавший осадок центрифугированием и суспендируют в необходимом количе стве физиологического раствора.Предмет изобретенияСпособ производства химических риккетсиозных вакцин путем выделения растворимо го риккетсиозного антигена, отличающийсятем, что, с целью уменьшения реактогенности и аллергенности вакцин, стандартизации антигена, повышения его чистоты и концентрации, а также возможности включения в ассо циированные препараты, культуру риккетсийсуспендируют в растворителе, например в физиологическом растворе, центрифугируют, в дальнейшем используют надосадочную жидкость или корпускулы обрабатывают эфиром, 20 экстрагируя из них затем антиген трихлоруксусной кислотой, и очищают, например, путем осаждения органическими растворителями или кислотами, фракционирования нейтральными солями или на ионоооменных ко лонках.Составитель В. ТаратутаРедактор Т. Рыбалова Техред Л. Я. Левина Корректор Г. й, ШильмаиЗаказ 3767 Тираж 480 Подписное ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва Ж, Раушская наб., д. 4/5 Типография, пр. Сапунова, 2