Способ определения активности комплемента по альтернативному пути

(я)5 6 01 И 33/53 Т ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕМЕНТА ПО АЛЬТЕРНАТИВНОМУ ПУТИ(57) Изобретение относится к медицине, аименно к способам исследования системы Способ относится к медицине, а именно медико-биологическим способам исследоания комплемента человека при различных аболеваниях, а также.для изучения влияия на него каких-либо факторов,Целью .изобретения является повышение точности способа при определении АПК в сыворотках крови при отравлениях двухвалентными катионами,Способ осуществляют следующим образом. В термостатированную при 37 ОС кювету спектрофотометра помещают 0,1 мл сыворотки крови, мединаловый буфер (рН 7,4), содержащий 5 мМ и стандартное количество эритроцитов кролика (ЗК) (1,510 Кл/мл). Конечный обьем .инкубационной смеси 0,8 мл, Регистрируют лизис по убыли оптической плотности при 800 нм по методу Халяпина и Прокопьева, После завершения лизиса эритроцитов добавляют следующую равную порцию эритроцитов и вновь опре 1798695 А 1 комплемента. Цел ь изобретения - повышение точности способа. У обследуемого берут кровь, выделяют сыворотку, вносят ее в объеме 0,1 мл в термостатированную кювету и добавляют, эритроциты кролика, После завершения лигнина эритроцитов добавляют вновь эритроциты кролика и определяют активность комплемента по альтернативному пути поскорости их лизиса. По сравнению с прототипом способ позволяет определить активность комплемента по альтернативному пути в присутствии двухвалентных металлов, в том числе и при отравлении ими,деляют скорость лизиса. Активность АПК рассчитывают по формуле:Активность АПК = 0,3 х 0,6, где х - ско 1 вость лизиса второй порции ЭК.П р и м е р 1. В кювету помещают 0,1 мл донорской сыворотки, до 5 мМ концентрации в мединаловом буфере, 0,1 мл стандартйой взвеси эритроцитов кролика. Конечный объем инкубационной смеси составляет 0,8 мл. После завершения лизиса первой порции эритроцитов, добавляют вторую равную порцию и вновь определяют скорость лизиса, которая составила 16,2. Значение активности АПК составило: 0,3 х 16,2 + 0,6 = 5,46. В этой же сыворотке определили активность АПК по прототипу, Значение активности АПК, определенное по прототипу. равно 5,5, В табл,1 приведены (средние из 15 опытов) данные определения активности АПК по прототипу и по изобретению,1798695 Таблица 1 блица 2 й 2,1 оставитель В.Литовченко .ехред М,Моргентал Корректор Н.Слободяник Реда кт Подписноепо изобретениям и открытия-35, Раушская наб., 4/5 аз 768 ВНИИ при ГКНТ СССР Тираж Государственного комите 113035, Москваизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Данные табл,1 показывают отсутствие существенных различий между этими величинами, По литературным данным (прототип) средняя активность АПК доноров равна (6,2 + 0,2)10 ЛЕК/мл, т.е. по значению близка нашим данным,П р и м е р 2, Регистрировали лизис второй порции эритроцитов кролика сывороткой кровипри отравлении солью двухвалентного меТалла Со. По формуле рассчитывали активность АПК, Значение активности АПК составило 2,2, Активность АПК для этой же сыворотки, определенная по прототипу равна 6,0. В табл,2 представлены средние (и = 7) значения активности АПК при отравлении солями двухвалентных металлов (И и Со),определенные по прототипу и по изобретению,По данным табл,2 видно, что в присутствии ЭГТА (и рототип) не обнаруживается эффекта двухвалентных катионов на АПК. По изобретению выявлено значительное снижение АПК, что согласуется с клиническими данными о снижении иммунореактивности у пациентов при отравлениях такого рода(Ю,А.Ершов, Т.В,Плетенева, Механизмытоксического действия неорганических соединений, 1989 гст.131-137),Использование способа позволяет5 - удешевить исследование за счет иск. лючения применения ингибитора классического пути активации комплемента -импортного реактива ЗГТА,- повысить точность определения ак"0 тивности АПК при отравлении двухвалентными катионами. Ф о р мул а и 3 о б р ете н и я Способ определения активности комп лемента по альтернативному пути, включающий забор крови, выделение сыворотки, инкубацию ее с эритроцитами кролика с определением активности комплемента по скорости лизиса эритроцитов, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышенияточности способа в крови при отравлениях двухвалентными катионами, перед инкубацией сыворотку крови дополнительно инку бируют с эритроцитами кролика до их 25 полного лизиса,