Способ определения активности комплемента

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЩИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН 9) (И) И 33/48,1 ч 33/5 ПИСА ВТОРСНОМ инфекционноМ.: 1967,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕМЕНТА(57) Изобретение относится к биологии, предназначено для изучения комплемента в эксперименте и в клинике при необходимости многократных исследований и в тех случаях когда забор крови труден из-эа малых размеров подопытных животных или из-за тя желого состояния больных. Цель изобретения - повышение чувствительности метода и упрощение путем сокращения числа стадий. Для этого эритроциты барана 3 раза отмывают физраствором.Ц пентрифугируют при 1000 об/мин. Готовят взвесь 4 10 эритроцитов в1 мкл физиологического раствора, вравном объеме приливают разведеннуюв тройном титре гемолитическую кромолью сыворотку. Полученную гемосистему инкубируют 10 мин при 37 еС. Вопытные пробирки вносят по 0,2 млфизраствора и гемосистемы и испытуемую сыворотку - 2 мкл. В контрольнуюпробирку вносят те же ингредиенты,но вместо сыворотки - 2 мкл физраствора. Инкубация 30 мин при 37 С пипетируют содержимое пробирок, отбирают О,1 мл реакционной взвеси, соединяют с 0,9 мл физраствора разводятв 10 раз) и нелизированные эритроци- сты считают в камере Гореева опытныен контрольные пробы. Расчет по фор- Ямуле х=(в-а):в 100, где х - комплементарная активность, а - количество Сасосчитанных эритроцитов опытной пробы, в - количество сосчитанных эритроцитов контрольной пробы. Результатдается в литических единицах. 1 табл,94 2личью сыворотку, Полученную гемосистему инкубируют 1 О мин при 37 С.В опытные пробирки вносят по 0,2 мл физраствора и гемосистемы и автопипеткой - 2 мкл испытуемой сыворотки. В контрольную пробирку вносят те же ингредиенты, но вместо сыворотки - 2 мкл физраствора. Инкубация 30 мин при 37 С. Пипетируют содержимое пробирок, отбирают 0,1 мл реакционной взвеси, соединяют с 0,9 мл физраствора (разводят в 10 раз) и нелизированные эритроциты считают в камере Горяева; в 5 больших квадратах (увеличение 10 х 10) проводят опытные и контрольные пробы.Для вычисления результата пользуются формулойв-ах= - х 100,в Эритроциты барана трижды отмываютфизраствором, центрифугируют при 251000 об/мин. Готовят взвесь 4 105эритроцитов в 1 мкл физиологическогораствора. К приготовленной взвеси вравном объеме приливают разведеннуюв тройном титре гемолитическую кро- З 7 Проба Показатели 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Количество эритроцитов в 5 квадратах 62 21 131 Активность комплемента, л,е. 68 90 34 64 30 56 32 80 23 69 1 12981Изобретение относится к области биологии и может быть использовано для изучения комплемента в эксперименте и в клинике, особенно при необходимости многократных исследований и в тех случаях, когда взятие крови затруднено маленькими размерами подопытных животных или тяжелым состоянием больных.Целью изобретения является повыше ние чувствительности метода и его упЪрощение за счет сокращения числа стачдии еП р и м е р 1. Делают забор крови в капилляр.15 Крови для исследования достаточно 1 капли.Центрифугированием отделяют сыворотку, В качестве разводящей жидкос ти применяют веронал-мединаловый буфер или физраствор (рН 7,2-7,4). П р и м е р 2Берут 400 мг гемогената селезенки мыши, добавляют 1,2 мл физиологического раствора.Далее способ осуществляют аналогично примеру 1.Получают в контроле - 202 эритроцита в 5 больших квадратах; в опыте - 170 эритроцитов, 20 лимфоцитовКомплементарная активность равна 15,8 л.е.Процент примеси в данном случае достаточно высок (97) что, несомненно, повлияло бы на результат при фотокалориметрическом и визуальном учете. где х - комплементарная активность;а - количество сосчитанных эритроцитов опытной пробы; в - количество сосчитанных эритроцитов контрольнойпробы. Результат выражают в литических единицах (л,е.),Результаты определения комплементарной активности сыворотки 10 крыспредставлены.в таблице,72 139 86 135 39 151 61 199 В том случае, если биологическая жидкость обладает крайне слабой или высокой активностью комплемента, следует увеличить или уменьшить ее количество в опыте и в последующем использовать подобранное для данного материала соотношение. Например, при низкой активности, не определяющейся в 2 мкл сыворотки, берут 3 мкл, а при необходимости и больше, до получения положительных результатов. Напротив, при высокой активности можно уменьшить количество исследуемой сыворотки до предельного (1 мкл), в последующем прибегая к разведениям.Составитель Л.СабуроваТехред И.Ходанич Корректор Л.Патай Редактор Н.Егорова Заказ 855/23 Тираж 777 ф Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/51 роиэводственно-полиграфическое предприятие,г,ужгород,ул,Проектная,4 3 1298Формула изобретения Способ определения активности комплемента, включающий разведение гемолитической сыворотки в тройном титре, добавление к ней взвеси эритроцитов барана с последующим инкубированием полученной смеси с испытуемым биологическим препаратом и физиологическим раствором и учетом результатов, 10 о т л и ч а ю щ и й с я тем, что,194 4с целью повышения чувствительности способа и его упрощения за счет сокращения числа стадий, взвесь эритроцитов барана берут в количестве 4 10 в 1 мкл физиологического раст 5вора, а гемолитическую сыворотку, физиологический раствор и взвесь эритроцитов берут при их соотношении1:100:100 соответственно, а учет результатов проводят путем подсчета количества лизированных эритроцитов.