Способ неспецифической противовирусной защиты клеток vero

союз советскихСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 6 АЗ Б.О 2 М 7/О госуд АР ств е ннОевЕдомство ссс(г спАтент сссР АТЕНГНО АНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ПАТЕНТУ 1(71) Научный центр эпи профзаболеваний Мох анения и социальсп блики Грузия, гигиены а здравочения ре- Э.А,Иваибад демиологй инисте рств ого обеспе А,Цибадз 1 ли и А.Д,Цна несщиа клЭто1Изобретение относится к медицине, в ча тности вирусологии., Всеобще известен и распространен сп соб продуцирования неспецифической пр тивовирусной зашиты - применение инте ферона. Интерферон приводит к продуци ованию защиты клеток от вирусной ин екции, хотя это не спасает клетки от за ажения, а лишь уменьшает силу действи вируса, в чем и выражается недостаток да ного способа, елью изобре,ения является эффективпецифическая противовирусная заеток Чего.ъ достигается т и, что в предлагае . мом способедостигается эффективная неспецифическая защита клеток Чего путем возцействия на клеточные культуры Чего переменным магнйтным полем.Клеточные культуры Че о выращивалисьв виде 1-2-дневного монослоя в пеницилли-" новых. флаконах. Клеточные культуры обрабат вались переменным магнитным полем (50-,80000 Гц, индукция 0,0001-0,4 мТ), созданным в соленоиде при прохождении переменного синусоидального тока от генератора ГЗ. Заражение проводили(54) СПОСОБ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОТИВОВИРУСНОЙ ЗАЩИТЫ КЛЕТОК ЧЕРО (57) Использование: медицина, вирусология, биотехнология, Монослой культуры клеток Чего выращивают в течение 1 - 2 дней, затем обрабатывают переменным магнитным полем с частотой 600 - 70000 Гц, индукцией 0,0002 - 0,3 мТ, временем экспозиции 30 - 70 мин. После заражения клеток вирусом цитопатическое действие вируса не проявляется, 1 табл,после обработки гголем вирусами лихорадки Западного Нила, грипп А (М 1 Н 1 Гонконг), парагрипп (тип 2), Использовались следующие дозы вирусов; Западный Нил 50% цитопатическая доза (ЦПД 5 о) 6 9-0,2 мл, Грипп 3 ГАЕ (гемагглютинирующая единица) -0,2 мл, парагрипп ЦПД 5 о 6 19-0,2 мл, Перед заражением иэ флаконов удаляли питательную среду, монослой промывали раствором Хенкса, после чего вносили вирус, ставили 1 И серии опытов для трех вышеуказанных вирусов, которыми по отде 1 ьности заражали клеточные культуры, и контроль для необлученных куль:ур, После часовой инкубации при 37 С неабсорбированные вирусы удаляли, монослой трижды промывали раствором Хенкса и вносили культуральную среду, Результаты учитывали через 3,12,24,72,96,120,144 и 168 ч инкубации зараженных клеточных культур по цитопатическому действию (ЦПД) и реакции .гемагглютинации (РГА) микрометодом на полистироловых панелях, Титром антигенл считали его наивысшее разведение, при ко. тором обнаруживалась интенсивная гемагглютинация 3+-4 . В клеточных, где не наблюдалась ЦПД магнитного поля, эффек1792426 тивной защитой считали продуцироданную при действии поля защиту по отсутствии с РГА вирусосодержащей культуральной жидкости (ВКЖ) и ЦПД вирусов в течение 168 ч (7 дней), Более долгие сроки инкубации клеток приводят к нарушению целостности клеток в контроле, в необлученных магнитным полем образцах, Поэтому максимальное время для экспериментов 168 ч. В течение этого времени. отсутствие заражения вирусами облученйых магнитным полем клеточных культур,лопределенное по РГА ВКЖ и ЦПД вирусов, считали продуцированием противовирусной защиты, эффективной противовирусной защитой против вирусного заражения клеток Чего. Результаты представлены в таблице 1, Из таблицы видно, что эффективная противовирусная защита продуцируется при частотах 600 - 70000 Гц, индукции 0,0002-0,3 мТ для всех трех используемых вирусов одинаково, Значит имеется неспецифическая противовирусная защита при действии указанных полей, В укаэанном диапазоне поля использовались поля следующей экспозиции;5,10,15,20,25,30,40,50,60,70,80,90 мин. Вышеуказанная защита клеток продуцировалась только при 30-70-минутном облучении 5 клеточных культур, Таким образом, эффективная неспецифическая противовирусная защита клеток Чего продуцируется при действии на клеточные культуры Чего переменного магнитного поля следующих характеристик: 10 частота 600-70000 Гц, индукция 0,0002 - 0,3 мТ,время экспозиции 30-70 мин. Допредельные величины; частота 500 Гц, индукция 0,0001 мТ, время 25 мин. Послепредельные величины: частота 80000 Гц, индукция 0,35 мТ, вре мя 80 мин,Формула изобретения Способ неспецифической противовирусной защиты клеток Чего, заключающийся в 20 том, что монослой клеток выращивают втечение 1-2 дней и обрабатывают переменным магнитным полем с частотой 600- 70000 Гц, индукцией 0,0002-0,3 мТ, временем экспозиции 30-70 м лн Зависимость повеление титре РГА (час) ВКЖ от частоты м индукции переменного магнитного полл прилохсенносо к клеточным культурам.отсутствие титра РГА е течение68 ч, цПд цитопатическое действие переменного магнитного полл,Услеоблучеммык йолей образцов титр РГА полвллвтса:Длв вируса лихорадки Западносо Нила через Зч;402 Длк емрусов гриппе и пврагриппа через 1 гч:20 Редактор З.Ходакова Составитель М.МирцхулаваТехред М,Моргентал Корректор О.Кравцова Заказ 169 ТиражВНИИПИ ГоПодписноеГосударственного комитета по изобретениям и открь,тиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 гоо 400 600 1000 2000 Зооо 4000 5000 6000 7000 вооо 10000 12000 14000 16000 гоооо 25000 30000 40000 45000 55000 60000 65000 75000 24 24 24 24 24 24.24 24 24 4 В 46 48 48 48 48 46 48 72 72 72 72 и 72 48 46 4 4 В 72 96 96 ЦПД цпд ЦПА ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД цпд ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД ЦПА цпд Цпд ЦПД ЦПД ЦПД ЦПА ЦПД ЦПД ЦПД ЦПДП цпд цпд ЦПД ЦПД ЦПД цпдЦПД ЦПД цпд Цпд ЦПД ЦПД ЦЛА ЦПД ЦПД ЦПА ЦПД ЦПД цпд ЦПА ЦПА ЦПА ЦПА ЦПД ЦПД ЦПД ЦПД ЦПДП