Способ угнетения репродукции вируса лихорадки западного нила

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК ом С 12 й 7(0 СА ЗОБРЕТЕНИЯ ПАТЕН(54 Х 57) СПОСОБ УГНЕТЕНИЯ РЕПРОДУКЦИИ .ВИРУСА ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА, включающий выращивание моно- слоя культуры клеток с последующим заражением вирусом,отл ич а ю щи йся тем, что, с целью повышения степени угнетения репродукции вируса и сохранности натив- ного состояния, клетки через 3 - 24 ч после заражения обрабатывают переменным магнитным полем с частотой 100-50000 Гц, индукцией 0,0002 - 0,3 мГ и временем экспозиции 15-120 мин. эпидемиологии, гигиены й Министерства здравольного обеспечения Рее, Н,О. БарнабишА.Д. Цибадзе и О.К. ли, меилид ред. Р.Шоу ауИзобретение относится к медицине, в частности вирусологии.Целью изобретения яние степени угнетения релихорадки Западного Нилнативного.состояния клетки.Это достигается тем, что в предлагаемом способеповышения степени угнетения репродукции вируса лихорадки Западного Нила осуществляется путем воздействия низкочастотного переменного магнитного поля на зараженные вирусом клеточные культуры, Применение низкочастотных магнитных полей обусловлено, тем, что эти поля при низких индукциях не нарушают целостность мембранных систем и функционирования биосистем, по этому и испольэу.отся в физиотерапевтической практике.Исследования выполнялись на зараженных вирусом лихорадки Западного Нила клеточных культурах Чего и Ч-Е. Исходный титр вируса 7,5 - 8,0 9. В экспериментах применялся вирус разведенный до 6,0 1 д. Титр вируса в реакции гемагглютинации 1:5000 - 1:10000, После заражения адсорбцию вируса на клетки проводили при температуре 37 С в течение 1-1,5 ч. После чего неадсорбированные вирусы удаляли, а монослой клеток, помещенный в пенициллиновые флаконы, промывали и заливали средой поддержки и инкубировали в течение 3 и д 24 ч. После этого флаконы помещали в соленоид, где создавалось низкочастотное магнитное поле (частота 50 в 10000 Гц;индукция 0,0001-0,5 мТ) при прохождении Оо синусоидального тока от генератора ГЗ-ЗЗ.В 6-часовой срок после воздействия полем ставили реакцию гемагглютинации (РГА) вирусосодержащей культуральной жидкости (ВКЖ) образцов и проверяли цитопатическое действие (ЦПД) магнитного поля, Зависимость титра вируса в РГА ВКЖ образцов (д) от частоты и индукции приложенного поля представлена в табл, 1 и 2. вляется повыше- продукции вируса а и сохранности, в широком диапа Гц), индукций ГА вирус в ВКЖ не твие титра РГА укатение репродукции Как видно иэ табли зоне частот (100-50 0,0002-0,3 мт) поля по обнаруживается. Отсут зывает на полное угн ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(71) Научный центри профзаболеваниохранения и социаспублики Грузия1838405 вирус лихорадки Западного Нила. Верхний Послепредельные величины, частота 55000 предел эффекта по индукции лимитируется Гц, индукция 0,35 мТ, экспозиция 130 мин. ЦПД поля. Использовались следующие экс- Совместно с определением титра вирупоэиции поля: 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, са в РГА, присутствие вируса в ВКЖ образ, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150 мин. При 5 цов проверяли по методу экспозиции меньше чем 15 мин и больше иммунофлк 3 оресценции, В образцах, где чем 150 мин в ВКЖ образцов, облученных при действии переменного магнитного по- вышеуказанными, угнетающими реплика- ля, отсутствует титр в РГА, отсутствует и цию характеристиками магнитного поля, по- специфическое свечение, иммунофлюоресявляется титр в РГА, а при 15-120 мин 10 ценция,характерное при присутствиивируотсутствует. Таким образом наблюдается сов, А в норме, так же как у необлученных полноеугнетениерепродукциивирусалихо- образцов, регистрируется свечение 30 радки Западного Нила при следующих ха- клеток интенсивностью 4, что подтверждарактеристиках переменного магнитнОго ет полное угнетение репродукции вируса поля: частота 100-50000 Гц, индукция 15 лихорадкизападногоНилапридействиипе,0002-0,3 мТ, экспозиция 15-120 мин, До- ременных магнитных полей вышеуказанных предельные величины: частота 50 Гц, индук- характеристик на зараженные этим вирусом ция 0,0001 мТ, экспозиция 10 мин, клеточные культуры,".таблица 1Зависимость титра РГА (я обратных величинах) от частоты и индукции переменногомагнитного поля (при 3- часовой.инкубацин звраивнных культур). Индукция, мТ Частота, 1 ц 0,0001 0,0002 00005 0,001 0,005 0,01 О,ОЗ 0,05 0,08 0,1 0,12 0,15 0,2 О,З 0,35 0,4 6 7 8 8 10 11 12 1 Э 14 15 16 1 2 3 4 5 5 О 40 ЦПД ЦПД ШИ ШИ 1 ОО 40 40 2 ОО 40 40 40 40. зоо 4 о 400 40 40 40 600 4 О 40е щ 40 4 О 4 О 4 О 1 ООО 2 ООО ЦПД Ш 1 Д ШИ ШИ зооо 80 60 3- Э 40 ОО 8 О 60 о-ю5000 БИ ЦПД ШИ ШИ ШИ ШИ во во 1 ОООО 12000 во ео 14000 16000 20000 25000 8 О ВО З 0 ООО З 50 ОО ес60 45000БИ БИ 160 ЦПД ШИ 160 ШИ БИ ео ео160 160 160 160 160 ;160 160 160 160 160Ф160 160 . 160 160 160 160 160 160 160 160е титра РГА; ШД - цитопвтпческое действие переменного идля необлученных обраэцов -40 (в обратных величинах ) 160 160 160160 160 160. вгнитного лола,60000- отсутстви Титр РГА40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 ШИ ШИ ШИ ШИ БИ ШИ ЦПД ШИ ЦПД ЦПД ЦПЛ БИ - цПд цпд - цпд цпдШИ БИ ШИ ИИ ППД БИ1838405 атотв 11 мт 0,0001 О,ЬО 02 О 0005 0,001 0,005 0,01 0,03 0,05 0,08 0,1 0,12 0,15 0,2 0,3 0,35 0,4 1 г , з 4 5 6 т е э Го и 12 1 з 14 15 16 50 100 160 160 Ш)Л ЦПД ЦПЛ ЦПД ЦПЛ Ш)Д ЯШ ШЫ ЦПЛ ЦПД цПЛ 160 160 160 160 , Ф160 160 160 160 .му 160 160 320 320в 320 320320 Э 20 100000 3000320 320г 4000 320 320 32 О 320 7000ЙЮОО 320 320320 Эао ЦПД Ш(Л ЦПД ШИ ЦПД 320 320 320 320 10000 320 320 12 ООО 14000 16000 320 320 20000 2500030000320 320 320 320 35000 320 320 320 320 45000 ЦПЛ 640 ЦПД ЦПЛ ЦПЛ640 Ц)Ц 640 55000 640 60000отсутстви Титр РГА Редактор Заказ 2905 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Таблица 2Зависимость титра РГА (ь обратных величинах) от частоты и индукциивеременного магнитного ноля (при 24- часовой инкубацчи заравенных культур) 1(0 160 160 10 160 160 160 160 160 160 160 160 160 160 ЦПД 160 160 - (Д 1 320 320Ф320 320 Ф320 320 Э 20 320,320 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640 640. 640 640 640 е титре РГА; ЦПД - цитопатическое действие магнитного полн; для необлученных образцов - 160 (в обратных величинах) Составитель Н. БарнабишвилиТехред М. Моргентал Корректор Л. Филь цПД цПД ЦПД ЦПЛ ШЦ( ШЩ ЦПД ШШ цРЛ цПЛ ШЫ ШЦ( ШЯ Ш)Л Ш(Л а ШЦ( ЦЦД Ш(Д ЦПЛ ЪПЛ БЩ ЦПЛ ЦПД Ш)Д ШЩ ЦПД Ш)Д