Способ стабилизации уриказы

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 17301 и я)5 С 12 М 9/06,9/96 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Нотегц С, Огсазе рогйсатоп апб ргорегтез. - Восмаев , 1939, н,33, р,1901 - 1909.Ргассогцз Е., Ровзеп Н. Епгутатс сетеггпйабоп о 1 игс асЫ, - Ясапс СЬи, ЕаЬ. пчезт 9, 1953, ч.5, И 3, р,273 - 278.(54) СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ УРИКАЗЫ (57) Изобретение относится к энзимологии, а именно к способу стабилизации фермента уриказы, Сущность изобретения заключаетИзобретение относится к энзимологии, конкретно к способу стабилизации фермента уриказы. катализирующего распад пуринов и используемого в составе анализаторов для определения концентрации мочевой кислоты в биологических жидкостях организма.Известен способ стабилизации уриказы путем добавления к ферменту сульфита натрия (йа 2 ЯОз), причем на каждые 1000 ед. уриказы добавляют 1030 мМ Ма 230 з,Однако этот способ не позволяет сохранять активность уриказы в водном растворе более 10 ч. Кроме того. Ка 230 з легко окисляется на воздухе и растворы фермента при этом быстро желтеют.Наиболее близким к предлагаемому является способ получения стабилизированся в том, что. с целью увеличения сроков хранения уриказы, в способе, включающем растворение уриказы в щелочном водном растворе при 4 - 6 С, в качестве комплексообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислотыи выдерживают 10-20 мин, в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацетамид натрийи дополнительно в полученную смесь вводят 10 О-ный раствор декстрана (). При этомдобавляют из расчета 5 - 10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед, уриказы,и- соответственно 10 - 12 мг и 2 - 4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы. Предлагаемый способ позволяет повысить стабильнсть водных растворовуриказы при 4 - 6 Сдо 28 - 30 сут. 1 з.п,ф-лы, М ной уриказы, согласно которому в качестве стабилизаторов используют серосодержащее соединение - сульфит натрия из расчета 10-20 мМ на 10000 ед уриказы и комплексообразующее соединение - динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (йа 2-ЭДТА) из расчета 1 - 2 мМ на 10000 ед. уриказы,Недостатками известного способа я вляются непроизводительное время сохранения активности уриказы в водном растворе при 4-6 С - не более 1 сут, а также быстрое пожелтение раствора при хранении.Цель изобретения - увеличение сроков хранения уриказы,Поставленная цель достигается тем, что согласно способу стабилизации уриказы, включающему растворение уриказы в ще1730145 40 10 Составитель Л,СтекольниковТехред М,Моргентал Корректор Н,Ревская Редактор М.Петрова Заказ 1488 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 лочном водном растворе при температуре 4 - 6 С, добавление комплексообразующего и серосодрежащего соединений и перемешивание смеси, рН щелочного раствора устанавливают 7,5 - 8,5. в качестве комплексообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (тетацин-кальций) и выдерживают смесь в течение 10-20 мин, а в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацетамид натрий (сульфацил-натрия) и дополнительно 10 -ный раствор декстрана (реополиглюкин), при этом тетацин-кальций добавляют из расчета 5 - 10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы, сульфацилнатрия и реополиглюкин соответственно 10-12 мг и 2-4 мл на 1 мл раствора. содержащего 1000 ед. уриказы.П р и м е р 1, 10 мл водного раствора, содержащего 1000 ед,/мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0.1 н,раствором йаОН до рН 7,5, добавляют 50 мг тетацинкальция (5 мг/мл), смесь выдерживают 10 мин, затем добавляют 100 мг сульфацил-натрия (10 мг/мл) и 20 мл раствора реополиглюкина (2 мл/мл), Получают раствор. в котором активность уриказы сохраняется при 4 - 6 С в течение 28 сут.П р и м е р 2. 10 мл водного раствора, содержащего 1000 ед,/мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0,1 н. раствором йаОН до рН 8,0, добавляют 75 мг тетацинкальция (7,5 мг/мл), смесь выдерживают 15 мин, затем добавляют 110 мг сульфацил-натрия (11 мг/мл) и 30 мл раствора реополиглюкина (3 мл/мл), Получают раствор, в котором активность уриказы сохраняется при 4 - 6 С в течение 29 сут.П р и м е р 3. 10 мл водного раствора,содержащего 1000 ед,/мл уриказы из пече ни свиней, подщелачивают 0,1 н.растворомКаОН до рН 8,5, добавляют 100 мг тетацинкальция (10 мг/мл), смесь выдерживают 20 мин, затем добавляют 120 мг сульфацилнатрия (12 мг/мл) и 40 мл реополиглюки на (4 мл/мл). Получают раствор, в которомактивность уриказы сохраняется при 4-6 С в течение 30 сут;Формула изобретения 1, Способ стабилизации уриказы, вклю чающий растворение уриказы в щелочномводном растворе при 4 - 6 С, добавление комплексообразующего и серосодержащего соединений и перемешивание смеси, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью увеличе ния сроков хранения уриказы, рН щелочного раствора устанавливают 7,5-8,5, в качестве комплексообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты и вы держивают смесь в течение 10 - 20 мин, а вкачестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацетамид натрий и в полученную смесь дополнительно вводят 10,-ный раствор декстрана.30 2. Способ по п.1, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что кальцийдинатриевую соль этилендиаминтетрауксуснй кислоты добавляют из расчета 5 - 10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы, парааминобензолсульфа цетамид натрий и декстран соответственно10 - 12 мг и 2 - 4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед, уриказы.