Способ определения антигена

)9) й 33/53 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ А,Мо ИГЕНА нохимии наружетител) в обрете- опредеетодом зующих щее ани микрости и овано генов Уля ление ан- мунофлуокомплексы ело, видии.ющ моб разом.В известном с тигена (антител) в р ценции, включающ со специфическими тителами, получени зультатов реакции,пособе опр еакции им ем инкуба флуоресци е преципи определен еделения ан- мунофлуоресцию антигена рующими аната и учет реие антигенов ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТ(57) Изобретение относится к иммуи может быть использовано для обния специфических антигенов (анбиологических жидкостях, Целью изния является повышение точностиления антигенов (антител) миммунофлуоресценции, не абракомплексы антиген - флуоресцируютитело, видимые в люминесцентны Изобретение относится к обл нохимии и может быть использ обнаружения специфических ант тител) в биологических жидкостя Цель изобретения - опреде тигенов (антител) методом им ресценции, не образующих антиген-флуоресцирующее антит мые в люминесцентный микроск Способ осуществляется следскоп, Для реализации способа в реакции иммунофлуоресценции, включающей инкубацию антигена со специфическими флуоресцирующими антителами, учет результатов реакции проводят в жидкой фазе без использования твердофаэных носителей. Для этого образовавшиеся люминесцирующие комплексы выделяют иэ жидкой фазы иммунологической реакции центрифугирователем при 3 - 4 тыс ., отливают от непрореагировавших исходных компонентов, ресуспендируют в исходном объеме забуференного физиологического раствора и флуориметрируют в жидкой фазе. Положительный эффект способа состоит в возможности определения антигенов (антител), не образующих флуоресцирующих агрегатов, видимых в люминесцентном микроскопе, в частности вируса лиэура. пикорна- и калицивирусов, 1 табл.(.Ь (антител) проводят в жидкой Фазе без ис- р пользования твердофазных носителей, Для этого образовавшиеся люминесцирующие комплексы выделяют иэ жидкой фазы иммунологической реакции центрифугирова- СЛ нием при 3 4 тыс,у отмывают от 00 непрореагировавших исходных компонентов, ресуспендируют в исходном обьеме забуференного физиологического раствора и д флуориметрируют в жидкой фазе.П р и м е р. Подбор оптимального разведения флуоресцирующей иммунной сыворотки.В центрифужные пробирки вносят по 3 мл забуференного физраствора, состоящего иэ 7 ч. 0,85-ного раствора, )чаС и 3 ч. 0,15 Мфосфатного буфера рН 7,5 - 7,6, Добавляют1689858 Злу о Оесяирую щая с ы В типа А в разведенГ 17 6 д 13 2 2Нормальная тканьБез антигена Составитель М.Губарев1 ехред Ы,Ыорген. ал Редактор Е,Пап Корректор Ы.Ма,С 44 м 44 д 4 инец Заказ 3810 Тираж ГОдписноеВН 41 И"4 ИОеударСТГ;ЕННОГО КОМИтЕта ПО ИЭОбрЕтЕНИяМ И ОтКОЫтИяМ ПрИ 4 КНТ СССР3035, Москва, Ж, Рац 4 д 4 С 4 ая наб., 45 41 рсь 1 эвг)дг 4 Гн 4 эДЯ 4-:44 ьскл 4 комбина 4 "41 в 4 е 44". 4, ужгог 4 ОД, ул.1 л. 3; ийа. 401 по 0,1 мл известного антигена и по 0,05 мл разведений соответствующей иммунной флуоресцирующей сыворотки, В контрольные пробирки вносят те же разведения флуоресцирующей сыворотки без антигена, Пробирки инкубируют 12-16 ч при 37"С, после чего осажда 4 от прореагировавшие комплексы путем центрифугирования в центрифуге с горизонтальным ротором при 3 - 4 тыс.я в теченле 20 мин, Надосадочну 4 о жидкость сливаот,а осадок отмывают путем ресуспендирования его в 3 мл эабуференного физраствора, центрифугирования при 3 - 4 тыс.о в течение 10 мин и удаленияОнадосадоной жидкооти, Отмь 4 тый Осадок ресуспендируют в 3 мл забуференного физраствора и флуориметрируют. Ог44 мальным разведением флуоресцирующей иммунной сыворотки считают разведение, обеспечивающее наибольшу 4 о разницу в флуоресценции между гомологичной и контрольной системой, не содержащей специфического антигена. При использованл 4 л антиглобулиновых флуоресцирующих сывороток последние не титруют, а испольэуот в четырехкратной концент рации по отношени 4 о к их красящему титру, определенному изготовителем,В табллце приведен пример титрования флуоресцирующей иммунной сыворотки против вируса ящура тиг а Д,В приведенном .4 рлмере оптимальнь 4 м разведел 4 ием флуоресцир;ющей сыворотки является 1;10, та", ах после вычитания вел 4 дчины фонового свечения (без антигена) такое разведение обеспечивает самый высокий уровень флуоресценции (в данном примере 14 едлниц),5 Положительный эффект способа состоит в возможности определения антигенов (антител), не образующих флуоресцирующ 4 лх агрегатов, видимых в люминесцентном микроскопе, в частности вируса ящура, пи 10 корна- и калицивирусов, других растворимых антигенов, Способ не требует связывания образуощегося люминесцирующего омплекса с твердофаэным носителем,15 Формула изобретения Способ определения антиге 44 а в реакци 4 л иммунофлуоресценции, включающий инкуоа 4.О ан-Иге 4 а со спсцифическими 20 флуоресцирую 4 цлми антителами, выделение л 4 оминссцируощих комплексов путем центрифугирования и учет результатов реакции. о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа за счет выяв ления антигенов, не образующих комплексов, видимых в люминесцентный микроскоп, люминесцирую 4 цие комплексы выделяют из жидкой фазы иммунологической реакции центрифугированием при 30 3-4 тыс.а, отмывают от непрордагировавших исходных компонентов, ресуспендируют в исходном обьеме забуференного физиологического раствора и учитывают мегодом флуориметрии в жидкой фазе, 35