Способ определения антигенов или антител

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 9) 01) 5)5 О 01 И 33/53 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР(5 4 ) СПОСОБ ОПР ЕДЕЛЕ ШИ АНТИ ГЕНОВИЛИ АНТИТЕЛ(57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использована дляопределения антигенав или антител вбиологических жидкостях, 1 еь - повышение точности анализа. Для этого висследуемый образец добавляют специфический антиген или антитела, причемисследуемый образец дорабатывают декстрансульфатом, содержащся в реакционной среде в концентрации 0,00 -5,0 мас.7. орпорейшн (Л Тадамитсу Суд унология./Под Медицина, 967 А.Е.( цасабам Изобретение отопределения антиге биологической жид к способам антителсаответствиржащиц апретитела, обраосле чего внаов изобретению образец,деляемый антиген или кости, ия-п Цель изобреости способа, Способ осущ ышение тач батывают полианнаном, и дят в реакцию антиген-а ответствующим антителам итело или антиге ествляют едующим ожно испол разо реак Обр олиан ионы, которые зовать в предлагаемом способе, представляют собой соединения, включающи в себя природные или синтетические полмеры, такие как полисахариды или полистирол, содержащий многочисленные анионные группы, такие как сульфонильные анионы или карбоксильные авионы, причем указанные соединения должны быть растворимы в реакционной среде, используемой для реакции анти ген-антитело.Такими полианионами являются декстрансульфат, гепарин, полистиролсул фокислота, ацетат целлюлозфталата, гиалуроновая кислота, хондроитинсульфат и т.п. реак дить цию антиген-антитела в среде, к включает в себя полианиан, н б я образец тве рда или ф соде ржаще й пал и а н ион, вереакции антиген-антитела (в плслучае обработанный такимобразец, содержащий антпген или антитело, может быт введен в реантиген-антитело после того,отарая лн абраждкайдо пра атыв а азой, ения следнем образом акцию как и на об лианнан,удет удале о ег еакию есте я с палианионом).Реакционные средь, голхаляш использования в реакции антпге актело, представляют саб,водные ср(21) (22) (31) (32) (33) (46) (71) (72) и Ии (53) (56) 3430145 -1403, 05. 8267333/80205.81ЛР30. 03. 90, Бюл,Мицубиси КассиСатоси Тсутсуйтио Ито (Р)615.373(088.8)Лабораторная имВязова. М. ннаи среде.тку полианианам можноующим образом: провод20 ды, вклн.чающие е себя, например, ь,.ду,солевой раствор, и буферные растворы,которые могут содержать одну (или более) добавку, выбранную из стабилиэаторон, консервантов, хелатпых агентон, поверхностно-актинных соединений и т д,Буферный раствор включает в себяглициновые буферы, буферы на основефосфорной кислоты, цитратные буферы,барбиталовые буферы, боратные буферы,буферы на основе системы трис(трис)гидроксиметил(аминометан) - солянаякислота, трис-малатные буферы, аммонийные буферы и т.д.Стабилизаторы включают в себя,например, аминокислоты, полипептиды,белки и т.п которые не осаждаютсяв данной иммунологической реакциии которые обычно присутствуют в концентрации 0,001 - 1%, предпочтительно от 0 05 - 0,6%,Предпочтительными консернантамиявляются мертиолат и азид натрия. 25Предпочтительные хелатные агентывключают в себя этилендиаминтетрауксусную кислоту, нитрилтриуксуснуюкислоту, циклогександиаминтетрауксусную кислоту и т,п,В качестве поверхностно-актинныхсоединений, как правило, предпочтительно использовать неионогенные поверхностно-актинные соединения.рН реакционной среды должен нахо диться в обычном интервале рН, применяющемся дЛя реакций антиген-антитело, обчно используют рН в интервале приблизительно 5 - 10.Концентрация полианиона в реакционной среде обычно не превышает 5 мас.Е40и предпочтительно равна 0,0010,5 мас.Х.Более высокая концентрация можетприводить к нестабильности реакции45в некоторых системах анализа, В то жевремя бЬлее низкая концентрация снижает ингибирование так называемыхнеспецифических реакций, которые мешают анализу и делают невозможным получение точных данных анализа из-за50повышенного ингибирующего эффекта.Аитигены, которые служат н качестве определяемого соединения и реагента, включают в себя различные антигены, такие как белки, полипептиды, стероиды, полисахариды, липиды, пыльца,пыль и гаптены, Антитела включаютв себя, например, такие белки, которь являются антителами против указанных антигенон.Анализ реакции антиген-антитело поизобретению применим для любых системанализа. Таким образом, предлагаемыйспособ применим как для систем растворов, в которых и опредепяемое соединение, и реагент растнорнмы в реакционной среде, так и для систем с носителем, н которых реагент закрепленна особом носителе, который практически не растворим н реакционной среде, при этом гонорят, что особый носитель сенсибилизирован реа гентом.Конкретные примеры реакций антигенантитело, которые могут быть проанализированы в соответствии со способомпо изобретению, включают в себя реак-.ции, протекающие при радиоиммунноманализе, при анализе агглютинации латекса с турбидиметрией в ближней ИКобласти, иммуноферментном анализе,иммунофлуоресцентном анализе, при и:мунонефелометрии с использованием светорассеяния, при агглютинации зритроцитон, агглютинацни латекса и т,п.Способ особенно прецпочтительно применять для такой системы анализа,как агглютинация латекса с турбидиметрией в ближней ИК-области, в которой может использоваться, например,обратимая пассивная агглютинация.В соответствии со способом поизобретеноо неспецифические реакции, которые могут протекать прн реакциях антиген-антитело, могут бытьпредотвращены, в результате получаютболее точные данные анализа,П р и м е р 1. Агглютинация латекса с турбндиметрией и дальней ИК-области.К 50 мкл сыворотки нормальногочеловека, содержащей не более чем2 нг/мл о 6-фетопротеина (АФП), прибавляют 50 мкл раствора, содержацег .1 мкг/мм АФП и затем 100 мкл со.евогорастнора бычьего сывороточного альбумина, содержащего декстрансульфат,и получают испытуемый раствор.К 50 мкл испытуемого раствора прибанляют 50 мкл латекстного реагента, сенсибилизированиого антителом анти-АФП,и 200 мкл буферного раствора, послечего при перемешивании иэмер нот изменение мутности н области ближнего ИКпри 940 нм. Данные анализа образцасчитывают со стандартной кривой и рассчитывают выход. Результаты сравнива"5 1554782 ют с контролем, который представляет реакционную систему без полианиона.При добавлении декстрансульфата (при результирующей концентрации5 равной 0,001 мас.У.) достигается значительное улучшение точности (Р ( О;01) и коэффициента вариации (КВ). Нормальное отклонение равно 2, 83 (по известному способу 10,32),Составитель Г,КрюковаРедактор А.Огар Техред И,Верес Корректор Н.Король Заказ 468 Тиржк 507 ПодписноеРчИИПИ Государственного комитета. по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.уагород, ул. Гагарина,П П р и м е р 2, Процедуру по примеру 1 повторяют, за исключением того, что окончательная концентрация декстрансульфата составляет 5 мас.Х.Получены аналогичные результаты. Таким образом, способ позволяетповысить точность анализа в 4-5 разпо сравнению с известным способом.ф о р м у,л а и э о б р е т е н и яСпособ определения антигенов илиантител путем добавления в исследуемый образец соответствующего специфического антитела или антигена с последующей регистрацией реакции пассивной гемагглютинации, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повыщения точности способа, исследуемый образец обрабатывают декстрансульфатом, 15 содерщащимся в реакционной среде вконцентрации 0,001-5,0 мас,З;