Способ получения хламидиозного антигена для реакции непрямой иммунофлюоресценции

(5 г РЕТЕНИ ИСАНИ АВТОРСКОМ ИДЕТЕЛЬСТВ едицинсследооток.Леденниталь 3, 409-. ДИЙНО- РЯМОЙ к медицине, к и может быть еской диагнох заболеванийвевй ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТИО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР(71) Пермский государственный мский институт и Пермский научно-и. вательский институт вакцин и сывор(72) О.А,Тимашева, Э.С,Горовиц, Т,Вцова, В,Н,Панкратова и А;А.Шаткин(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХЛАМИГО АНТИГЕНА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ Изобретение относится медицинской микробиологи использовано для серологи стики различных хламидийн человека и животных. Известен способ получения инфекционных тест-антигенов хламидий из овокультур путем центрифугирования при 5009 в течение 16 мин гомогенизированной суспензии желточных мешков зараженных куриных эмбрионов. Средний слой, содержащий хламидии, используют в качестве тест-антигена в реакции непрямой иммунофлюоресценции для диагностики хламидийных инфекций.Однако необходимость применения материала, содержащего живой инфекционный агент. ограничивает практическое использование этого метода. 1 К 39/02, 39/118, 6 01 М 33/531(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для серологической диагностики различных хламидийных заболеваний человека и животных, Цель изобретения - повышение специфической активности тест-антигена хламидий. Цель достигается приготовлением из гомогенизированных желточных меш- . ков, содержащих живые хламидии 20%-ной суспензии на среде 199, к которой добавляют 0,05% формалина и 0,1% азида натрия при 4-6 С в течение 72 ч, после чего материал центрифугируют при 5009 15 мин отбира. ют средний слой, доводят его средой 199 до 5%-ной концентрации и лиофилизируют с 98-99,5%. среды 199 и 0,5-2% сахарозы. Я Известен способ получения инфекционных.тест-антигенов хламидий из овокультур путем многократного дифференциального центрифугирования гомогенизированной суспензии желточных мешков на солевом ,растворе с последующей инактивацией возбудителя формалином в конечной концентрации 0,25%,Однако известный способ не обеспечивает. достаточного качества полученных тест-антигенов, Обработка возбудителя высокой концентрацией формалина существенно снижает специфическую активность поверхностных антигенов хламидий, Как следствие этого снижается интенсивность их специфического свечения при взаимодействии с гомологичными антителами.уменьшается чувствительность реакции. : Жидкиетест-антигены имеют ограниченный срок годности (9-12 мес,).Цель изобретения - повышение специ.фической активности хламидийного антигеП р и м е р 1, Куриные эмбрионы, павшиена 4-7 сут после заражения хламидиямиорнитоза, вскрывают в стерильных условиях. Желточные мешки помещают в колбу состеклянными бусами и тщательно гомогенизируют. Затем на среде 199 из них готовят200-ную маточную суспензию, Добавляютазид натрия 0,1/, и формалин 0,050, выдерживают суспензию при 4 С в течение 72 ч., После этого суспензию центрифугируютпри 5009 в течение 15 мин, Образовавшийсясредний слой (нижний - частицы ткани, верхний - жир), переносят в стерильную про,бирку и доводят средой 199 до 50-нойконцентрации.Полученный таким образом хламидийный антиген смешивают со стабилизаторомсостава,мас.%: среда 199-98; сахароза - 2,разливают по ампулам по 0,25 мл, ампулыпомещают в специальные металлическиекассеты и лиофилизируют на сублимационных установках, Рабочий вакуум в течениецикла не более 13,33 Па, Температура конденсатора в начале высушивания не выше-500 С, в течениецикла не выше -47 С. Начальная температура материала в периодсублимации -(45 .ф. 10)0 С, Конечная температура досушивания (25 + 5) С. По окончаниивысушивания кассеты с препаратом немедленно закрывают крышками, помещают вэксикатор и герметизируют запайкой,П р и м е р 2, Получение неинфекционных тест-антигенов из СЫатуса рЯ 11 асвозбудителя энзоотического аборта овец(штамм ЕАЕ), Способ осуществляют так, какуказано в примере 1, но в качестве исходного материала используют желточные мешкикуриных эмбрионов, зараженных возбудителем энзоотического аборта овец.П р и м е р 3. Получение неинфекцион. ных тест-антигенов из СлгасЬогпабз, возбудителя уретрита (штамм ЛБ). Способосуществляют так, как указано в примере 1,но в качестве исходного материала используют желточные мешки куриных эмбрионов,инфицированных штаммом ЛБ,П р и м е р 4, Получение инфекционныхтест-антигенов из С.сгасЬоаатз, возбудителя венерической лимфогранулемы (штаммЛ). Способ осуществляют так, как указанов примере 1, но в качестве исходного материала используют желточные мешки куриных.эмбрионов. зараженных штаммом Л.Эффективность инактивации штаммовхламидий в исходном материале различными концентрациями азида натрия и форма 10 20 лина контролируют введением этого материала после 72 ч инкубации при+4-бЯС в желточные мешки шестидневных развивающихся куриных эмбрионов, Использование азида натрия в концентрации 0,1-0,15 и формалина 0,05% обеспечивает полнуюинактивацию различных штаммов хламидий. Это позволяет значительно снизитьконцентрацию формалина (до 0,057 ь), применяемую для инактивации возбудителя, следовательно, уменьшить его влияние на специфическую активность поверхностныхантигенов.Специфическую активность полученных тест-антигенов хламидий с использованием различных концентраций формалина ф азида натрия определяют титрованием гомологичных иммунных сывороток методомнепрямой флюоресценции (см. табл.).Таким образом, положительный эффектот использования способа заключается вповышении специфической активности хламидийного антигена, что отражается на чувствительности реакции. а также на удлинении срока хранения тест-антигенов и возможнОсти транспортировки лиофилизированных препаратов. При этом повышается технологичность процесса приготовления диагностйкумов, поскольку 30 инактивация возбудителя в отличие от известного способа проводится сразу после го-: могенизирования инфицированныхжелточных мешков, следовательно, все последующие операции по приготовлению35 тест-антигенов осуществляют уже с неинфекционным материалом, Это особенно важно при работе со штаммами возбудителя орнитоза, которые относятся к второйгруппе патогенности40Формула изобретения Способ получения хламидиозного антигека для реакции непрямой иммунофлюоресценции, включающий культивирование хлаовидий в куриных эмбрионах,.гомогенизацию инфицированных желточных мешков, суспендифование клеток в солевомрастворе с последующей инактивацией формалином и отделением целевого про 50. дукта, о т л и ч в о щ и й с я тем, что с целью,повышения специфической активности антигена, после гомогенизации клетки суспендируют в среде 199, инактивацию проводятФормалином в смеси с азидом натрия в ко-.55 нечной концентрации 0;05 и 0,1 на обьемсуспензии соответственно, далее целевойпродукт смешивают со стабилизатором состава, мас,: среда 199- 98-99.5: сахароза- 0,5-2, и лиофилизируют,1711898 реаулататн титроаанин сиаороток больных хнаалиозом методом йенркмой итмунорптооесцфицннс немнрекцмоннее тест-антигенаии хлаимлий, лолученеае лри использовании раа хмнактиемруюцих концентраций акиле натрии и фориална е е еее ее йомцентрацнк айнда натрииТитр сиаоротек с антигонами иа итаеоа хланмдий, обработанннх рсллнчнвн концентрацикми Еормалина ееЛори тДЕ ЛтО 0501е е Лф0,05 0,1 ее ееее е е е е е0,05 О, 0,05 0,1 е е е е Орннт ооонФ2 8 . 32ф 3216 бч, 64 .32 256 ., 12866 16 256 6бц16 256 бче ееее е ее еееееееа анде обрхтннх калинин; концентрации реарда 60281266еОораелнна - "е ее ееее ееее ееечр н. Титрн антител данна лроцентех натрии и гт Ф и н. е Составитель А,Горбатов:Редактор: Й.Касарда . Техред М.Моргентал рр рКо ектор С,Шевкун Ти ажПодписноеЗаказ 485 иражям и отк ытиям при ГКНТ СССР. ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям пр113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 П оизводственно-издательский комбинат . Патен ", . р, у .нт" г. Ужго од, ул.Гагарина, 101Р