Способ определения антигенов и антител

Номер патента: 1291155

Авторы: Иващенко, Лиознер, Хаитов

ZIP архив

Текст

ИСА АВТОРСКОМУ значено для одноеления 2-х антигете иммуноферментно изобретения - уве ределяемых в одной или а Ж руе- Щчет ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВИ АНТИТЕЛ(57) Изобретение относится к иммунологии и преднавременного опреднов : в одном опыго анализа. Цельличение числа оппробе антигенов или антител за с использования 2-х коньюгатов с различными ферментами. Для этого на полистироловую твердую фазу адсорбируют антиген (Аг) или антитела (Ат),инкубируют с исследуемой пробой, содержащей Аг или Ат, затем вносятсмесь специфических коньюгатов соответственно Аг или Ат со щелочной фосфатазой и пероксидазой, далее вносятхромогенный субстрат для щелочнойфосфатазы, колориметрически определяют концентрацию одного Аг или Ат,затем твердую. фазу отмывают и вносятхромогенный субстрат для пероксидазьпо оптической плотности которого опеделяют концентрацию второго А т. Таким образом, в одном опыт дается установить изотип синте мых антител и антигенов. 1 табл510 20 25 30 35 40 45 50 55 Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для одновременного опеределения 2-х анти- генов или 2-х антител в одном опыте иммуноферментного анализа.Цель изобретения - увеличение числа определяемых в одной пробе анти- генов или антител за счет использования 2-х конъюгатов с различными ферментами.Способ осуществляется следующим образом.На полистироловую твердую фазу (пробирки, микротитровальные плашки) адсорбируют антиген (Аг) или антитела (Ат), инкубируют с исследуемой пробой, содержащей Ат или Аг, затем вносят смесь специфических конъгогатов соответственно Аг или Ат со щелочной фосфатазой и пероксидазой, делее вносят хромогенный субстрат для щелочной фосфатазы, колориметрических определяют поглощение проб и концентрацию одного Ат илн Аг, затем твердую фазу отмывают и вносят хромогенный субстрат для пероксидазы, по оптической плотности которого определяют концентрацию второго Ат или Аг.П р и м е р. Определяют иэотипическую и антигенную специфичности иммунного ответа г.п ч 1 го с помощью разработанной тест-системы с двойной иммуноферментной меткой.Объектом исследования служат супернатанты 5-дневных культур клеток селезенки мышей линии СВА, иммунизированных г.гг чг.1 го гаптеновой группировкой динитрофенилом (ДНФ), сорбированной на полистироле через неиммуногенный аминокислотный спейсер (алании или глицин). Тест-анти- геном служит ДНФ-БГГ с эпитопной плотностью гаптена 30 на одну молекулу БГГ. В этих опытах двойная метка используется для выявления соотношения антител 1 рМ/ 1 яС изотипов при первичном иммунном ответе на искусственный антиген.Применение тест-системы с двойной иммуноферментной меткой для изучения иммунного ответа на гаптеновую группировку ДНф п чхйго приведено с таблице. Постановка тест-систем с двойнойиммуноферментной меткой включаетприготовление иммуносорбентов. Антигенный сорбент готовят пассивной сорбцией ДНФ-БГГ на полистироле10 мкг/мл конъюгата в РВБ в течение18 ч при 4 С); аффинный сорбент включает сорбцию белка А стафилококка в той же концентрации и в тех же условиях. Дополнительно незаполненные сайты полистирола "пассивируют" 1 Е-ным раствором БСА, Все операции сопровождают промывкой панелей водопроводной водой и водой с 0,05- ным Твин,.Вносят исследуемые культурные жидкостгг в объеме 50-100 мкл, инкубируют 45-60 мин, при 37.С, отмывают.Вносят смеси конъюгатов (анти 1 еМ - щелочная фосфатаза, анти 1 еС - пероксидаза или пероксидаза -анти - 1 яС - щелочная фосфатаза, в зависимости от задач опыта),Постедовательно обрабатывают энзим-субстратами п - нитрофенилфосфатом и 5 - аминосалициловой кислотой с определением Соответственноуровня иммунных реагентов, связанныхс соответствующим ферментом как визуально, таки спектрофотометрически.Таким образом, в одном опыте удается установить изотип синтезируемыхантител.,формула изобретения Способ определения антигенов и антител, включающий сорбицию антител или антигенов на твердой фазе, связанные ими соответствующих антигенов или антител из жидкой фазы, обработку полученных комплексов иммуноферментным конъюгатами с последующим определением количества антигена или антител по интенсивности окрашивания хромогенного субстрата, о т л и ч а ю щ и й с.я. тем, что, с цельго увеличения числа определяемых в одной пробе антигенов или антител, используют смесь специфических иммуноферментных конъюгатов антител или антигенон с пероксидаэой и щелочной фосфатаэой, при этом определение количества антигенов или антител осуществлягот путем последовательного внесения хромогенного субстрата. для щелочной фосфатазы, регистрации интенсивности окрашивания, отмывания первого субстрата и внесения хромогенггЬго субстрата для пероксидазы н повторной регистрации интенсивности окрашивания.1291155 Эксперимент АнтиДНФ-анти емыши Анти- тела перок- сидаза 1 Т 1 яС-изотипа 1 еМ-изотипа Конъюгат антиеМ 18/98 29/98 щелочнаяфосфатаза гаптенДНФ 24/98 26/98 гаптенДНФ Составитель М.васильевРедактор И.Горная Техред Л.Сердюкова Корректор В,Бутяга Заказ 63/7 Тираж 596 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Вторичныйиммунныйответ на Первичныйиммунныйответ на Компоненты тест-системы с двойной иммуноферментной меткой КонъюгатантиеСмыши -перокси- даза Частота выявления культур (клоновиммунокомпетентных клеток, продупирующих тестируемые иммунореактанты

Смотреть

Заявка

3878181, 04.04.1985

ИНСТИТУТ ИММУНОЛОГИИ

ИВАЩЕНКО МИЛАНА ЕВГЕНЬЕВНА, ЛИОЗНЕР АЛЕКСАНДР ЛЬВОВИЧ, ХАИТОВ РАХИМ МУСАЕВИЧ

МПК / Метки

МПК: A61K 39/00, G01N 33/535

Метки: антигенов, антител

Опубликовано: 23.02.1987

Код ссылки

<a href="https://patents.su/3-1291155-sposob-opredeleniya-antigenov-i-antitel.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ определения антигенов и антител</a>

Похожие патенты