Способ определения эффективности включений изотопа иод-125 при радиоиодировании белков и нуклеотидов

(5) ОСУДАРСТВЕННЫЙО ИЗОБРЕТЕНИЯМРИ ГКНТ СССР ОМИТЕТОТКРЫТИЯМ(71) Институт биоорАН БССР(56) Уильямс У,Дж. ОпоелелМ,;Химия, 1982, с. 383,289,Ога 1 Е, апб Репгпз 1 оп .),ТоГ ЯТостеогпесгу оГ ВасоРготепз. - Апа Вос)еп, 1980 е анионов,Оа 1 еггп пабап оопа 1 оп о 1 , 108,299-302,ода,ом. вК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВКЛЮЧЕНИЙ ИЗОТОПА ИОДИзобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в биологической, химической и других отраслях промышленности при радиоиодировании белков и нуклеотидов иэотопами Цель изобретения - сокращение времени определения,Способ осуществляют следующим обраВ реакционную смесь добавляют 0,5 - 10 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 - 5 мг/мл азида натрия. Отбирают аликвоту смеси, наносят ее на пластину силуфола и хроматографируют, смесью ацетона с водой, содержащей 5 - 200 воды по обьему с последующей радиометрией,П р и м е р 1, Определение эффективности включения изотопа при получении 1-2 -0125сукцинил-тироэинметилового эфира аденозин,5-циклофосфата ( 1-цАМФ),ПРИ РАДИОИОДИРОВАНИИ БЕЛКОВ И НУКЛ ЕОТИДОВ(57) Изобретение относигся к аналитической химии и может быть использовано в биологической, химической и других отраслях промышленности при радиомодировании белков и нуклеотидов изотопами иода. Цель изобретения - сокращение времени определения. В реакционную смесь добавляют 0,5 - 10 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 - 5 мг/мл азида натрия, Отбирают аликвоту смеси, наносят ее на пластину силуфола и хроматографируют смесью ацетона с водой, содержащей 5 - 20;(, воды по обьему, с последующей радиометрией, 1 табл,В ампулу с 20 мкл 0,1 М натрий фосфатного буфера рН 7,0 БНФБ) вносят 2 мкл раствора (0,2 мКи) йа 1, 10 мкл раствора (10Г мкг) хлорамина Т и 10 мкл раствора (1 мкг) 2 -0-сукцинилтирозинметилового эфира аденозин, 5 -циклофосфата. Перемешивают в течение 30 с при комнатной температуре, Реакцию останавливают прибавлением 10 4 мкл раствора (10 мкг) метабисульфита на- С трия. Прибавляют к реакционной смеси 200 (Ямкл, 0,05 М натрий ацетатного буфера рН 6,0, сО содержащего 0,05 БСА и 0,1 азида натрия. сООтбирают аликвоту объемом 2 мкл, наносят ее на пластинку силуфола, сушат и хроматографируют в ацетоне, содержащем 5 воды. Пластинку силуфола режут на по перечные полоски шириной по 0,7 см и, поместив последовательно в пробирки, просчитывают на гамма-счетчике. Определяют эффективность включения изотопа (ЭВ) по отношению счета радиоактивности, оста2,5 шейся на старте и соответствующей целевому продукту (1 пр), к общему количествусчета радиоактивности взятой аликвоты (1)по формуле: Эффективность включения 77,2.П р и м е р 2. Определение эффективности включения изотопа при радиоиодировании хорионического гонадотропина человека ( 1-чХГ).В ампулу с 20 мкл1 М НФЕ вносят 5 мкл раствора (1 мКи) йа 1, 10 мкл раствора (5 мкг) хлорамина Т, 10 мкл раствора (9 мкг хорионического гонадотропина человека, Перемешивают в течение 20 с при комнатной температуре. Останавливают реакцию прибавлением 10 мкл раствора (4 мкг) метабисульфита натрия. Вносят 200 мкл 0,1 М НФБ, содержащего 0,5 бычьего сывороточного альбумина и 0,02 аэида натрия,Отбирают акликвоту объемом 2 мкл и наносят ее на пластинку силуфола. Сушат, анализируют в ацетоне, содержащем 10 воды. Рассчитывают эффективность включения по примеру 1. Эффективность включения 54,3.П р и м е р 3. Определение эффективности радиоиодирования при получении 1125 раково-эмбрионального антигена (1251-РЭА),В ампулу с 20 мкл 0 1 М НФБ вносят 10 мкл раствора (2 мКи) Па 1,80 мкл раствора (80 мкг) раково-эмбрионального антигена, 20 мкл раствора (20 мкг) хлорамина Т, Реакцию проводят в течение 30 с при комнатной температуре. Останавливают прибавлением 20 мкл раствора (20 мкг) метабисульфита натрия. Разбавляют реакционную смесь 200 мкл 0,1 М НФБ, содержащего 0,1 бычьего сывороточного альбумина и 0,02 азида натрия,5 10 15 20 25 Аликвоту объемом 1 мкл из реакционной смеси наносят на пластинку силуфола и хроматографируют в ацетоне, содержащем 207 ь воды. Рассчитывают эффективность включения по примеру 1, Эффективность включения 51,Данные определения эффективности включения изотопа в разных условиях сведены в таблицу 1.Из таблицы следует, что продажный ацетон (ч.ж.а.) непригоден для анализа, а использование 5 - 20 воды включает оптимальный вариант (10), Дальнейшее увеличение количества воды ухудшает разделение иэ-за растворимости метки, при этом увеличивается время анализа.Данный способ по сравнению с прототипом позволяет уменьшить время определения эффективности включения изотопа при радиоиодировании в 24 - 48 раэ. Использование ацетона. содержащего 5 - 20 воды, для анализа реакционной смеси на пластинке силуфола позволяетдостаточно быстро произвести определение эффективности включения изотопа и тем самым сократить время нахождения целевого продукта в реакционной смеси, содержащей избыточные количества химических реагентов,Формула изобретения Способ определения эффективности включений изотопа иодпри радиоиодировании белков и нуклеотидов, включающий хроматографию аликвоты реакционной смеси на силуфоле с последующей радиометрией, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью сокращения времени, определения к реакционной смеси до хроматографирования добавляют 0,5 - 10 мг/мл бычьего сывороточного альбумина и 0,01 - 5 мг/мл азида натоия, а хроматографирование осуществляют смесью ацетона с вбдой, содержащей 5 - 20 воды по объему. условиях определения 15% воды 20 Ж воды