Способ получения растений-регенерантов риса

СОВеТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 6598 С 19 ОПИСАН К АВТОРСКОМУ РЕТЕН ЕТЕЛЬСТВУ тел ьски ние меа, - Маии, М.,Ий ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР(56) Кучеренко Л,А. и др. Испольэовтодов биотехнологии в селекции ритериалы всесоюзной конферен1986, с. 95.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТЕГЕНЕРАНТОВ РИСА Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в селекции растений для расширения генетической изменчивости форм, в частности риса методом культуры тканей,Цель изобретения - увеличение выхода жизнеспособных регенерантов,Способсостоит в том, что при получении из эксплантатов первичного каллуса, субкультивировании его, обработке каллуса мутагеном М-нитрозо-й-метилмочевиной, переносе на регенерационную среду, доращивании на безгормональной среде и последующей пересадке растений в грунт, каллусы перед переносом на регенеративную среду обрабатывают смесью мутагена и репарогена, а именно: и-аминобензойной кислотой (ПАБК) с концентрации 0,005 - 0,05 вес.П р и м е р 1. В качестве эксплантата для индукции каллуса используют зрелые семена. Семена шелушат, стерилизуют сулемой О,10 мин. эамачивают на 16 ч в автоклавированной дистиллированной воде, после чего высаживают на поверхность агаризо)5 А 01 Н 4/00, С 12 1 ч 5/О(57) Изобретение относится к биотехнологии и касается получения новых исходных форм для селекции риса методом культивирования изолированных тканей в сочетании с мутагенным воздействием. Целью изобретения является увеличение выхода жизнеспособных регенерантов. Способ состоит в том, что при культивировании тканей перед переносом на регенерационную среду каллусы обрабатывают смесью мутагена (йнитроэо-Й-метилмочевины) и репарогена (и-аминобензойной кислоты в концентрации 0,01 - 0,1), 1 табл. ванной среды на 1 шт в пробирку в 5 млсреды. В качестве индукционной среды используют среду Мурасиге-Скуга (МС) + 4мг/л 2,4 (Д) (О-пассаж). Полученный каллуспересаживают на субкультивационную среду МС + 2 мг/л 2,4 Д (1 пассаж), продолжительность пассажа 20 сут.В конце 1 пассажа каллусы обрабатывают раствором НММ 0,1, который готовят Она основе среды МС. Обработку каллусов - СЬэтим раствором проводят на встряхивателе(Я(100 об/мин), втечение часа, После обработ- соки мутагеном каллусы промывают жидкой . Орсредой МС.После этого каллусы пересаживают нарегенерационную среду МС + 5 мг/л БАП,Полученные регенеранты доращивают набезгормональной среде МС. Растения, полученные на безгормональной среде, пересаживают в грунт,Выход нормальных укорененных проростков определяют в расчете на 100 каллусов,пересаженных на регенерационную среду.П р и м е р 2. Условия проведения опытааналогичны описанным выше, но перед пе16 б 5987 Результаты обработки каллусов смесью мутэгенэ и репэрогена перед пересадкой на регенерационную средуреносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НММ0,1=,ь и репарогена - ПАБК 0,001 ь.П р и и е р 3. Услоаия проведения опытааналогичны описанным выше, но перед переносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутагена НММ0,1 и репарогена ПАБК 0,005.П р и м е р 4. Условия проведения опытаналогичны описанным выше, но перед пееносом каллусов на регенерационную среду их обрабатывают смесью мутэгена НММ0,1 ои репарогена ПАБК 0,01 о ,П р и м е р 5. Условия проведения опытааналогичны описанным выше, но перед переносом каллуса на регенерационную средуих обрабатывают смесью мутагена НММ0,1% и репарогена ПАБК 0,05 о ,П р и м е р 6, Условия проведения опытавналогичны описанным выше, но перед переносом каллуса не регенерационную средуих обрабатывают смесью мутэгена НЯМ0,1% и репарогена ПАБК 0,1%.Результаты проведенных исследованийи редста ален ы в та бл и це. 25Как видно из таблицы, обработка каллусов перед пересадкой на регенерационную среду смесью НММ и ПАБК повышает выход растений-регенерантов, Лучшие результаты получены в примерах 3, 4, 5; примеры 2, 6 дают низкие результаты. В сравнении с известным способом выход регенерэнтов увеличивается в 8,4 раза, что ведет к увеличению выхода генетически измененных форм, которые являются новым исходным материалом для селекции,Формула изобретения Способ получения растений-регенерэнтов риса, включающий посадку зксплантатов на модифицированную питательную среду Мураисге-Скуга до образования инициального каллуса, субкультивирование его, обработку каллуса мутэгеном-М-нитроза-К-метилмочевиной, перенос на регенерационную среду, доращивание на безгорманальной среде и последующую пересадку растений в грунт, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью увеличения выхода жизнеспособных регенерэнтов, перед переносом на регенерационную среду каллус обрабатывают смесью мутагенэ и репарогена, при этом в качестве репарогена используют и-аминобензойную кислоту в концентрации 0.01 - 0,1.