Способ размножения вишни в культуре ткани

)5 А 01 Н 3/О ОПИСАН РЕ ЕН В ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Московская сельскохозяйственная академия им. К.А,Тимирязева(56) Попов Ю.Г., Высоцкий В.М. Культура стеблевых верхушек Ь ч 11 го, как метод ускоренного размножения плодовых и ягодных растений. Вестник с/х науки,.1978, М 3. (54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИШНИ В КУЛЬТУРЕ ТКАНИЩ Изобретение относится к биотехноло. гии и может быть использовано при клокальном микрораэмножении косточковых культур, в частности вишни. Целью изобретения является улучшение укореняемости побегов, повышение выхода растений - регенератов и повышение их приживаемости при высадке в нестерильные условия, ПоИзобретение .относится к биотехнологии и может быть использовано при клональном микроразмножении косточковых культур, в частности вишни.Цель изобретения - улучшение укореняемости побегов, повышение выхода расте- . ний-регенератов, повышение их приживаемости при высадке в нестерильные условия.П р и м е р, В период активного роста побегов на маточном растении проводят обработку маточных растений вишни водным раствором паклобутразола в концентрации 0,025, 0,05, 0,075 по д,в Внесение препаставленная цель достигается тем, что перед вычленением апикальных меристем растение вишни обрабатывают 0,05 - 0,075-ным водным раствором паклобутразола, При этом вычленение меристем осуществляют в весенний период следующего года, после чего их помещают на питательную среду для введения в культуру ткани и после подращивания пересаживают на питательную среду с цитоканалами и культивируют до получения побегов. Побеги пассируют на питатель:ную среду для укоренения, а затем полученные растения - регенераты перЕносят на питательный субстрат в нестерильные условия, При осуществлении способа процент пролифирирующих почек на среде с цитокининами до 45-75 против 20 в известном способе. Укореняемость возрастает до 50-80, а в результате значительно возрастает количество полученных при размножении данным способом саженцев.2 табл. рата в почву производят рано весной до сокодвижения в тех же концентрациях.Весной следующего года с обработанных деревьев заготавливают верхние части побегов длиной до 1 см и боковые вегетативные почки с участком стебля. В качестве эксплантата используют верхушечные меристемы с двумя-тремя примордиальными листьями (300-400 мкм), Эксплантаты стерилизуют и проводят введение эксплантатов в культуру путем посадки меристематических верхушек на модифицированную питательную среду МурасигеСкуге и после подращивания в течение 3-х недель пересаживают на питательную сре 1665986ду Готре с цитокинином 6-БПА в количестве0,5 мг/л, После получения побегов в большем количестве, чем исходные зксплантаты, их пересаживают на средуМурасиге-Скуга половинного состава, содержащую в качестве регулятора адксин фИМК в количестве 0,5 мг/л,Условия выращивания: 16-ти часовойдень, освещенность 3-5 тыс.лк, температура 22 - 26 С,Испытания проводят на сорте вишниАпухтинская с крайне низкой эффективностью размножения в культуре ткани,Результаты по изучению влияния пред,варительной обработки маточных растений,водным раствором паклобутразола на обра,зование боковых почек и образующихся изних побегов представлены в табл.1.Как видно из табл.1, при обработке маточных растений водным раствором паклобутразола в концентрации 0,05, 0,0750,процент пролифирирующих почек возра,стает до 45-75=,ь,Несмотря на то, что внесение паклобут,разола в почву (до сокодвижения 200 мл надерево) в ряде случаев оказывает положительное влияние на пролиферацию пазушных почек и укореняемость микропобегов,большие выпады при пересадке в нестерильные условия существенно снижают общий выход растений. В связи с этимпредпочтение следует отдать способу обработки - опрыскиванию препаратом в указанндм интервале концентраций.Отмечается высокий процент микрочеренков, пригодных для укоренения. В этомже варианте на этапе укоренения наиболееактивно протекает процесс ризогенеза (укореняемость 80). а появление корней у основной части побегов отмечается на ЗО днейраньше, чем в контроле, При этом у микропобегов формируется более сильноразвитая система (в несколько раз увеличиваетсяколичество корней 1 и И порядков ветвле ния,ихдлина,что,несомненно,играетбольшую роль при пересадке пробирочныхрастений в нестерильные условия, (табл,1),Влияние обработки раствором паклобутразола на укореняемость побегов, полученных на питательной среде Гобре,показано в табл,2,Как видно из табл.2 укореняемость побегов в культуре ткани возрастает с 20 наконтроле без обработки маточных растенийдо 50-80 на варианте с обработкой паклобутразолом,Также из табл.2 видно, что при использовании предварительной (эа год) обработ Ф ормул а изобретения Способ размножения вишни в культуреткани, включающий вычленение апикальных меристем с маточных растений, введение эксплантатов в культуру путем посадки 40 на питательную среду и подращивания, пересадку на питательную среду с цитокининами и культивирование до получения побегов, пересадку побегов на питательную среду с ауксинами для укоренения и высад ку полученных растений-регенерантов насубстрат в нестерильные условия, о т л и ч аю щ и й с я тем, что, с целью улучшения укореняемости побегов, повышения выхода растений-регенерантов и повышение их 50 приживаемости при высадке в нестерильные условия, перед вычленением апикальных меристем в период интенсивного роста побегов на маточном растении его обрабатывают водным раствором паклобутразола 55 в концентрации 0,05 - 0,075 под,впричемвычленение апикальных меристем осуществляют в весенний период следующего года,5 10 15 20 25 30 ки маточных растений-регенерантов раствором паклобутразола положительно сказывается на приживаемость в нестерильных условиях, значительно повышается процент прижившихся растений; до 98 в сравнении с 12,5 без обработки,Получаемый положительный эффект проявляется на конечном результате размножения - увеличивается количество саженцев, полученных предлагаемым способом (до 264 шт,) в сравнение с 1 шт на варианте без обработки,Вычленение апикальных меристем через год после обработки маточных растений паклобутраэола обусловлено тем, что опрыскивание деревьев проводят летом в период активного роста побегов, а лучшее время года для введения эксплантатов в культуру - февраль-март, т,е, ранний весенний период следующего года. Тогда интенсивнее протекают процессы регенерации, и при ранних сроках посадки есть возможность получить растения-регенеранты к октябрю- ноябрю этого же года.Таким образом, использование в технологии микроразмножения обработки маточных растений вишни трудноразмножаемых сортов водным раствором паклобутразола стимулирует пролиферацию пазушных почек, сокращает и упрощает этап укоренения, обеспечивает высокий выход пробирочных растений, имеющих хорошо развитую корневую систему.1665986 ТаблицаВлияние способа обработки растений растворам паклабутраэалв напролифирвцио почек и ускаряемость вишни Средняя длина, см Количество корней, шт.Укареняемасть,При пересадке нвукоренение Варианты т1 пар, 11 пор. 1 пар. 11 пор среднее средняячисло длина,пабе- смгав, шт 0,5 20 2 20 1,3 Контроль Внесение о почву растворапвклобутрввола: 1,0 50 33 1,0 0,52,0 35 5 10 опрыскивание:растений раствором паклобутравола; 0,5 5,0 2,50,5 12 4,0 НО 75 20 50 2,8 Таблица 2 Влияние обработки маточных растений нв укоренение и никол роотенийдегенератав вишни Вариант Укоре- няемос Получена Количествопробудившихся Всегонабеговшт. олучено оввеннея коренены теннй,шт. чек, шт 15 аклобутраола 7 300 0,075 Х р-Рпвклобутрввола 4,5 ф - испытуемый со тинская. Составитель С.Куваеваедактор В.Ковтун Техред М,Моргентал орректор И.Муска з 2471 Тираж 368 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям иоткрытиям при ГКНТ СС 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул,Гагарина, 10 0,025 Х0,05 Х0,075 Х 0,025 Х0,05 Х0,075 Х Контроль без обработки 0,025 Х р-р паклобутрвзола0,05 Х р-р Процент пролнФернрующих почек. насреде равмнохения, 1 пассах Среднеечислобоковыхпобеговк концуП этапа Прккнввемость в нестерильныхусловиях,