Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов

( , Научнотут транспла ных органов (72) А.Б.Цьп (53) 616-0.8 (56,) Петрова рованные мет ин и 11.М. Ман9.9(0888)И.Ви др,оды обследовчеловека. И. о Гтандартизиания иммун 1984. ис темь АГОЦИТАРНОЙ я к област Изобретение, а именноЦель изобретениости способа.Способ осуществлбразом. меди е относится к иммунолог и. ыщение точедую ется ин. саГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГННТ СССР НИЕ ИЗОБРЕ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(57) Изобретение относи Хотингера одоорганизмовраствором, кробов с поандарту мутв 1,0 мли ри 3000 об/м даляют, а о0 мп Аизиолоем к суспенавляют Аормарации 10/ иой температуре Выращенную на агаре нодневную культуру микр смывают физиологическим доводят концентрацию ми мощью Аизраствора по ст ности микробов до 1 х 109 центрийугируют 35 мин и Надосадочную жидкость у док ресуспендируют в 5, гического раствора. Зат зии микроорганизмов доб лин до конечной концент выдерживают при комнатн После этого суспензию убитых Амалином микроорганизмов центрифуги медицины, а именно к иммунологии.Целью изобретения является повышениеточности способа. Цель достигаетсятем, что инкубацию нейтроАилов проводят с предварительно инактивированными микроорганизмами. При этом дляинактивации используют 10 Х-ный раствор Аормалина, который смешивают ссуспензией микроорганизмов в соотношении 1:10. Затем микроорганизмыперед инкубацией обрабатывают раствором анилинового черного в течение58-60 мин при 96-98 Г, Спос.об повышает точность определения Аагоцитозадо 11. руют 35 мин при 3000 об/мин, К осадку микробов добавляют 5,0 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и отмывают путем центриАугиро 3 ав вания (35 мин ири 3000 об/мин) Надосадочную жидкость удаляют, а к осад- СЛ ку убитых и отмытых микроорганизмов Ю добавляют 5,0 мл дистиллированной 00 воды и ресуспендируют. Затем к сус- с) пензии микробов добавляют 1,0 мл ев насыщенного водного раствора анилинового черного, тщательно перемешивают и ставят в водяную баню на 60 мин при +98 С, перемешивая 1 раз в 10 мин, После этого суспензию микробов выдерживают еще 30 мин при комнатной температуре, а затем центри- ффффф угирют 30 мин при 3000 об/мин.Осадок окрашенных микробов триждыотмывают от лишней краски дистиллированной водой с помощью центриАугиро-. вания (при 3000 об/мин в течение1652871 активность нейтроАилов оценивают попроценту Аагоцитоза (количество Аагоцитирувих нейтроАилов из 100), Аа 5гоцитарному числу (среднее количество микробов, поглощенных одним нейтроАилом), Аагоцитарной емкости (число активных нейтроАилов в 1 мкл крови) и абсолютному Аагоцитарному показателю (общее число микроорганизмов,поглощенных всеми нейтроАилами в1 млк крови),П р и м е р 1, Кровь от больного инкубирувт с суспенэией микроорганизмов, подготовленных указаннымспособом. Готовят мазки, которыемикроскопирувт, и определяют показатели Фагоцитоза. Количество лейкоцитов равно 8570, нейтроАилов - 7/13,20 процент Аагоцитоза равен 75+0,08,Аагоцитарное число б+0,01, Аагоцитарная емкость 53354 0,107 и абсолютныйАагоцитарный показатель 32009+0,151,Таким образом, предлагаемый способ повышает точность до 17, по сравнению с прототипом (20 Х),ологический раствор до первоначального объема, восстанавливая тем самьм начальную концентрацию микробов (1 х 107 в 1,0 мл), и ресуспендируют. Приготовленнув таким образомсуСпензив окрашенных микроорганизмовиспользуют в дальнейшем для постановки реакции Аагоцитоза. Хранят еев холодильнике при +4-+боС или в моро.1 илке (при температуре ниже нуля)в течение длительного времени (доб мес и более),Проведение реакции АагоцитозаслЕдующее,В силоконовув стерильную пробирку наливают 0,15 мл стабилизированной крови и добавляют к ней 0,05 млсуСпензии окрашенных микроорганизмоя с концентрацией 1 х 10 микробныхте, и 1,0 кп, Прй этом соотношениеАагоцитов и микробов соответствует1:10-80. Смесь инкубируют в водянойбане, периодически переме 1 ивая,встряхивая пробирки, в течение 30 минпри +37 С, После этого каплю смесинаносят на предварительно обезжиренно смесьв НикиАорова предметное 30стЕкло и делают мазок. Мазок высуцивают на воздухе и Аиксирувт метилоьм спиртом. Мазки можно окрашивать, 1 краиивание мазка проводят27, ным водным раствором метилового35зеленого в течение 15 мнн. При подаче ядра Аагоцитов становятся ярко-зеленого цвета, цитоплазма - бледно-серо 1 о, а микробы - черного цвета,Окрашенные мазки тщательно иромывают проточной водой, а затем докра 1 ивавт 0,1-ньм водным растворомэозина в течение 3 с в результатечего цитоплазма Аагоцита становитсябледно-розового цвета, ядра клетокостаются ярко-зеленого, а мнкробы -черного цвета, После этого мазокпромывают проточной водой н высушивают на воздухе. Учет полученных резупьтатов проводят под иммерсионнойсистемой микроско 1 а, ФагоцитарнувСоставитель Л.СтебРедактор И.Касарда Техред Л,Олийнык Формула изобретения Корректор Н,Ревская Заказ 1768 тираж 397ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патет, г,ужгород, ул, Гагарина,01 35 сут). К осадку окраРнньх и отмьтьх микроорганизмов добавляют АизиСпособ определения Аагоцитарной активности нейтроАилов путем забора крови, ее инкубации с микроорганизмами, предварительно инактипированными, приготовления мазка, его окраски и огределения активности по наличию микроорганизмов в клетке, о т л и ч а в щ и й с я тем, что, с цельв повышения точности способа, инактивацив микроорганизмов проводят в течение 3-5 ч в среде, содержащей 10 У,-ньй раствор Аормалина и суспензив микроорганизмов в соотношении 1:10, ири этом перед инкубацией микроорганизмы дополнительно обрабатывают раствором анилинового черного в течение 58-60 мин при 96-98 С, а заАиксированные мазки крови последовательно окрашивают 27,-ным водным раствором метилового зеленого в течение 15-20 мин и 0,1 И-ньм водным раствором эозина в течение 3-5 с.аева