Способ получения аутоактиватора роста для культивирования еsснеriснiа coli

( ,ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Всесоюзный научно-исследовательскийинститут особо чистых биопрепаратов(56) Авторское свидетельство СССРМ 491691, кл. С 12 й 1/00, 1974,Пшеничнов Р.А., Колотов В.МБарихин С.ЛТкаченко А.Г. и Дедюкина М.М.Микробная популяция - саморегулируемаясистема, Экология и популяционная генетика микроорганизмов. УНЦ АН СССР, 1975,с. 3 - 13.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АУТОАКТИВАТОРА РОСТА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯЕЯСНЕК 1 СН 1 А СО 1 1(57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения стимуотносится к биотехнолопособам получения стимуок к питательным средам и микроорганизмов, ения - повышение биолости ауторегулятора роста и ба.й способ заключается в учения ауторегулятора росочного микробного фильЕзс)егсЬа со 1 Мстиллированной воде при ратуре в течение 5 - 9 сут, тором роста является низ(около 500 у,ед) соединеся по хроматографическим Изобретение гии, а именно к с лирующих добав при выращивани Цель изобрет гической активно упрощение спосо Предлагаемы том, что для пол та в виде бесклет трата клетки инкубируют в ди комнатной темпе Основным актива комоле куля рное ние, отличающеелирующих добавок к питательным средам при выращивании микроорганизмов. С целью повышения биологической активности ауторегулятора роста и упрощения способа клетки Езс)егсна со Минкубируют в дистиллированной воде при комнатной температуре в течение 5-9 сут, Для получения аутоактиватора используют суспензию клеток с концентрацией до 20 млрд/мл. Активность полученного препарата почти в 60 раз превышает активность известного препарата. Отсутствие в фильтратах с аутоактиватором компонентов питательной среды облегчает их лиофильную сушку. Сухие препараты обладают повышенной удельной активностью и улучшенными физико-химическими свойствами (сыпучесть, низкая гигроскопичность), Облегчается возможность дальнейшей очистки препарата. 1 табл. своиствам от аминокислот и нуклеотидов, не используемое бактериями в качестве питательного субстрата и обладающее, по всей видимости, чисто регуляторными функциями.Способ осуществляют следующим образом.Клетки бактерий Евсйег 1 сЫа со Мотделяют центрифугированием от питательной среды, ресуспендируют в равном обьеме 0,9-ного раствора йаС 1, осаждают и вновь ресуспендируют в дистиллированной воде до концентрации 20 млрд/мл, выдерживают в защищенном от света месте в течение 5 - 9 сут при комнатной температуре. Затем отделяют клетки Е. со Мцен 1638156трифугированием. Надосадочную жидкость стерилизуют фильтрованием (фильтр Мроге; 0,22 мкм.Биологическую активность препарата определяют культивированием бактерий Е, со Мв синтетической глюкозоминеральной среде с добавкой аутоактиватора.П р и м е р 1, Культивирование бактерий Е, со Мпроводят в стандартной безбелковой минимальной синтетической среде М при 37 С во флаконах с постоянным перемешиванием среды, Засевная доза составляет 25 млн/мл. В намеченные сроки культуру фильтруют через бактериальные свечи Кс размером пор 0,9 мкм под отрицательным давлением 80 - 150 мм. Для оценки активирующего действия в фильтрат. содержащий аутоактиватор, засевают отмь 1 тую бульонную культуру Е. со Мв дозе 15 млн/мл, Для контроля производят посев аналогичной дозы клеток бактерий в свежую синтетическую среду М,Зависимость активирования от срока развития исходной культуры (по известному способу) представлена ниже.Индекс стимуляции - частное от деления концентрации микробов в опытной пробе на концентрацию их в контроле, количественные показатели соответствуют активности препарата в известном способе,П р и м е р 2. Отмытые от культуральной жидкости клетки Е, со М, выращенные до конца логарифмической фазы, помещают в 200 мл дистиллированной воды в концентрации 20 млрд/мл, Выдерживают в защищенном от света месте при комнатной температуре 9 сут. Отделяют бактериальные клетки центрифугированием (3000 об./мин, 30 мин) на отечественной центрифуге К, Надосадочную жидкость с аутоактиватором фильтруют (фильтр Мроге, 0,22 мкм).Для проверки активирующего действия 1 мл фильтрата с аутоактиватором, разбав 40 45 50 ра россо М- ование отиеест ем, чт ивно че- ния а инку- перату 10 15 20 25 30 ленного в 125 раз, смешивают с 1 мл глюкозоминеральной среды, содержащей все необходимые для роста компоненты в удвоенных концентрациях и клетки Е. со М(2 10 кл/мл).Состав глюкозоминеральной среды, г/л: глюкоза 6,0; Ма 2 НРО 42,0; КН 2 РО 4(водный) 2,0; цитрат аммония 9,0; МаС 10; Ка 2 СОз 3,0; М 9 ЯО 4 (водный) 0,4; никотиновая кислота 0,01.В контрольную пробирку вместо аутоактиватора вносят равный объем дистиллированной воды. Культивирование проводят 5 ч при 37 С, Остановку роста осуществляют путем помещения пробирок в ледяную баню на 10 мин, Прирост биомассы оценивают спектрофотометрически на спектрофотометре СФпри длине волны 460 нм. Индекс стимулирования (ИС) вычисляют так же, как в известном способе.Динамика изменения ИС разбавленного в 125 раз аутоактиватора, полученного по. предлагаемому способу, в процессе выдерживания представлена в таблице.Таким образом, активность полученного препарата почти в 60 раз выше, чем препарата, полученного по известному способу, Отсутствие в фильтратах с аутоактиватором компонентов питательной среды облегчает их лиофильную сушку. Полученные сухие препараты обладают повышенной удельной активностью и улучшенными физико-химическими свойствами (сыпучесть, низкая гигроскопичность), Облегчается возможность дальнейшей очистки аутоактиватора,Формула изобретен Способ получения аутоактиватта для культивирования ЕзсйегсЫ17, предусматривающий инкубиклеток в жидкой среде с последующделением культуральной жидкостирилизацией, отл ич а ю щийсяс целью повышения биологическойсти продукта и упрощения способастае жидкой среды для инкубииспол ьзуют дистиллирован ную водубацию проводят при комнатной темре в течение 5 - 9 сут,