Способ подготовки препарата нервных волокон мышечной ткани для люминесцентной микроскопии

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ Яц 16367 УБЛИК(51)5 б 01 1 Ч 1/28,В 10/О ГОСУДАРСТВЕННЫИ НОМИПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРПРИ ГКНТ СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯА ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ юл. Ю 11 государственный 2-й Московский кий институт им,медицин- осударстН. И. ПиЯрыгин и эмбри.Н.идления адв раств Аспаргин магния Буфер Хе Способ ом. 0,1 - 4,5 0,1 - 4,5 са Остально ществляют следующим ок медицине, а может быть искатехоламин соргических сплетеиале различных иоптат прямои мышцы жи- ,1 см погружают на 3 мин раствор Хенкса при 2 С, концентрацией аспарагината(71) Ижевскийский институт ивенный медицинсрогова(56) Архив анатомии, гистологиилогии, 1987, 93, 10, 91, Швалев ВУлучшение гистохимического выявренергических нервных элементовре глиоксиловой кислоты. Изобретение относится именно к морфологии, и пользовано для выявления держащих структур адрене ний в биопсийном матер органов и тканей. Цель изобретения - повышение качест ва способа за счет лучшей сохранности нервных терминалей. Способ осуществляют следующим об разом. Биоптат исследуемой мышечной тка ни объемом 0,20 - 0,25 см, содержащей нерв ные волокна, инкубируют 3 - 3,5 мин в бу ферном .растворе Хенкса, при 1=2 - 4 С(рН 7,3 - 7,35), в который добавляют кри опротектор, в качестве которого берут глицерин, а также модулятор, в качестве которого выбирают аденозинтрифосфорную кислоту, а также флюорограф, при следую щих соотношениях компонентов, мас.00:(54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕПАРАТА НЕРВНЫХ ВОЛОКОН МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ ДЛЯ ЛЮМИНИСЦЕНТНОЙ МИКРОСКОПИИ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии. Целью изобретения является повышение качества способа за счет лучшей сохранности нервных терминалей. Цель достигается инкубацией ткани в течение 10 - 105 мин в среде, содержащей глицерин (20 - 22 мас 00), АТФ (002 - 0,025 мас.00), аспаргинат магния (0,1 - 4,5 мас.00) и буфер Хенкса (рН 7,3 - 7,35). Готовят срезы, которые повторно инкубируют в среде без глицерина в течение 1 О - 10,5 мин. Способ позволяет выявить нервные терминали 1,5 - 2 мкм в диаметре. браубируют 3 - 3,5 мин в буференкса, в который добавляют и флюорофор при 1=2 - 4 С затем биоптат замораживаяют с помощью криомикронные срезы, которые повтор- буфер Хенкса без криопроируют в течение 10 - 10,5 мин,к стандартному раствору замораживания обусловлено обратный захват катехолаи терминалями и предупрежии последних в окружающие Биоптат инкном растворе Хкриопротектор(рН 7,3 - 7,35),ют и изготовлтома заморожено помещают втектора и инкубДобавлениеХенкса АТФ доее влиянием наминов нервнымдением диффузткани.Пример 1. Бвота объемом 0в холодный1636718 15 формула изобретения Составитель Л. Стебаева Редактор Л. Зайцева Техред А. Кравчук Корректор Т.Малец Заказ 810 Тираж 398 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат Патент, г. Ужгород, ул. Гагарина, 1 Омагния 010 мас , АТФ 0020 мас Я и глицерина 2,0 мас.Я. Остальное буфер Хенкса, Затем биоптат замораживают в жидком азоте, хранят в нем до исследования. Замороженные срезы толщиной 20 мкм монтируют на стекле и повторно инкубируют в буфере Хенкса (рН ,3), содержащем 0,020 мас,Я натриевой соли АТФ и 4,0 мас.Я аспарагината магния в течение 10 мин при комнатной температуре, В последующем после двухкратного ополаскивания в буфере Хенкса стекла сушат под струей теплого воздуха 10 мин, заключают в полистирол и исследуют в люминисцентном микроскопе используя светофильтры ФС,4, СЗС,4 БС,8.Адренергические нервные претерминали и терминали образуют на мышечных волокнах тонкие ветвистые сплетения в желто-зеленом цвете, Выявляются нервные терминали диаметром 1,0 - 1,5 мкм.Пример 2. Биоптат большой грудной мышцы объемом 0,25 смз погружают на 3,5 мин в холодный буферный раствор Хенкса при 3 С (рН 7,3) с концентрацией аспарагината магния 0,125 мас.Я, АТФ 0,025 мас.и глицерина 22 мас. Я, остальное буфер Хенкса. Затем биоптат замораживают в жидком азоте и изготавливают на кри опто ме замороженные срезы толщиной 22 мкм, которые монтируют на стекле и повторно инкубируют в буфере Хенкса (рН 7,3) . В последнем содержится 0,025 мас.Я АТФ и 4,5 мас.Я аспарагината магния. Инкубацию осуществляют в течение 10,5 мин при комнатной температуре. После двухкратного ополаскивания в буфере Хенкса стекла сушат струей теплого воздуха 10 мин, заключают в полистирол и исследуют в люминисцентном микроскопе используя светофильтры ФС,4, СЗС,4, БС,8.Адренергические нервные претерминали итерминали образуют на мышечных волокнах вдоль кровеносных сосудов тонкие ветвистые сплетения, флюоресцирующие желто- зеленым цветом. Выявляются нервные терминали с размером в поперечнике 0,00 в 10 0 0015 мм.Способ позволяет выявить нервные терминали диаметром 1,5 - 2 мкм, что позволяет в полном объеме выявлять нервные сплетения в мышечной ткани. Способ подготовки препарата нервных волокон мышечной ткани для люминисцентной микроскопии, путем инкубации в среде, 20 содержащей раствор Хенкса, криопротектори флюорограф, с последующим приготовлением замороженных срезов и повторной их инкубацией в той же среде без криопротектора, отличающийся тем, что с целью повышения качества препарата за счет лучшей сохранности нервных терминалей, повторную инкубацию проводят в течение 1 О - 10,5 мин, при этом среда дополнительно содержит АТФ, а в качестве криопротектора используют глицерин и флюорографаЗ 0 аспаргинат магния при следующих соотношениях компонентов, мас.Я:Глицерин 20 - 22 АТФ 0,02 - 0,25 Аспаргинат магния 0,1 - 4,5 Буфер Хенкса Остальное