Штамм патогенных лептоспир rаттus norvegicus, используемый для получения поливалентной противолептоспирозной вакцины

(5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Борознов,(71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи, Казанский государственный медицинский институт им. С,В,Курашова и Ставропольский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток(56) Регламент производства противолептоспирозной вакцины 230-81, ТУ 42.14.(54) ШТАММ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИР ВАТТОВ ИОВНЕ 61 СОЯ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ПРОТИВОЛЕПТОСПИРОЗНОЙ ВАКЦИНЪ Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству противолептоспирозной вакцины.Цель изобретения - получение штамма лептоспир серовара сорепИацеп иэ серологической группы 1 с 1 егоЬаеаоггЬацае, обладающего высокой антигенной и имунной активностью с известной серовариантной и серогрупповой принадлежностью.Штамм лептоспир Ваттцз погчецсцз 382-В изолирован в 1975 г. в Краснодарском крае из почки серой крысы и принадлежит к серовару сорепЬацеп серогруппы 1 стегойаевоггйацае.(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к производству противолептоспирозной вакцины. Цель изобретения - получение штамма лептоспир серовара сорепЬацеп иэ серологической группы 1 стегоЬаетоггЬадае, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью с известной серовариантной и серо- групповой принадлежностью. Штамм выделен иэ почки серой крысы и депонирован в коллекции микроорганизмов НИИЭМ им. Н,Ф.Гамалеи под М 356/461. Антигенность Штамма 382 - В определяют,в опытах на кроликах, Установлено, что антигенность штамма 382 - В выше, чем у вакцинного штамма Крыса 17 не менее чем в 10 раэ. Иммуногенность штамма исследуют методом пассивной защиты на золотистых хомячках массой 25 - 30 г. В результате сравнительного анализа протективной активности имунных сывороток выявлено, что иммуногенность лептоспир штамма 382 - В в 10 раз выше, чем вакцинного штамма Крыса 17. Штамм лептоспир Ваццз погчецсиз 382-В депонирован в коллекции микроорганизмов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под М 356/461 и характеризуется следующим признаками.Морфологические признаки.При микроскопии в темном поле, при увеличении Х 400 представляют собой се-. ребристо-белые плотные спирали, заканчивающиеся крючками на концах, длина лептоспир 5 - 10 мкм, диаметр 0,1-0,15 мкм.Физиологические свойства.Растут в жидких сывороточных питательных средах Фервоорт-Вольфа, Терских, подвижны, характерное вращение вокрчгсвоей оси и перемещение без полярнойдифференциации. Максимального накопления 7.10 - 8,10 лептоспир в 1 мл питательной среды с рН 7,2 - 7,4 достигает на 6 - 8день при +28) - +30)С. Максимальное количество жизнеспособных клеток наблюдается на 4 - 5 день роста культуры,Интигенные свойства.Штамм лептоспир Я, погчецсов 382 - Видентифицирован методом монафактарнаго антигенного анализа и принадлежиг ксеровару сореп Ьацеп 1 сурологическай группы 1 с 1 егоЬаевачеЬацае. Антигеннастьштамма лептаспир Я. пагчецсиэ 382-В:иределяли и сравнивали с вакцинным шгаммом Крыса 17 в опыте на кроликах.Пятидневнуо культуру каждого штаммалептоспир с максимальным наполнениемжизнеспособных клеток вводят трем кроликам весом 2,5 - 3 кг трехкаатно, внутривеннов дозах 5 1 О, 10, 10 лептоспир с интерва 7 В Влом два дня. На 10-й день после последнейиммунизации у всех кроликов забираюткровь и в сыворотках определяют реакциеймикраагглютинации и лизиса концентра.цию 1 дМ и 1 д - антител к гомологичному и13 диагностическим штаммам лептоспир.При этом устанавливают, что антигенность штамма лептаспир Я. погчецсцэ 382 -В выше, чем у вакцинного штамма Крыса 17не менее чем в 10 раз.Иммуноген н ые свойства.Иммуногенность штаммов лептоспирисследуют методом пассивной защиты назолотистых хомячках весам 25 - 30 г.Гомолагичнуа от трех кроликов пулированную иммунную сыворотку с исходнойконцентрацией антител 1;30000 в обьелах0,05; 0,1; 0,5; 1,0 мл внутрибрюшинно вводят золотистым хамячкам, На каждую дозуиспользуют па шесть животных, Через 2 чпосле иньекции имунных сывороток хамячков инфицируат культурной лептоспирштамма Я. погчецсов 382 - В в дозе25010+5 о.Вирулентнасть контролируют и определяют 1.05 о внутрибрюшинным заражением.Животным второй группы за 2 ч да инфицирования внутрибрюшинно вводят 1,0 мл сыворотки нормального кролика,В результате сравнитного анализапротективной активности иммунных сывороток выявляют, что в дозе 0,05 мл иммунная сыворотка к штамму Я. пагчец 1 сцэ382 - В защищала практически всех инфицированных гамологичными лептоспирамиживотных от гибели, в отличие от сывороткик вакциннаму штамму Крыса 17, которыйтолько в дозе 0,5 мл проявляет свои защитные свойства,5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 П р и м е р. Для получения поливалентной лептоспироэной вакцины используют штаммы лептоспир 4-х серологических груйп - Роп 1 опа-Бронница водаи Крыса; дг 1 рроурЬоэа - Суханов и Корнилов;1 стегойаегпоггЬадае - 853-Одесса-В и. Я. погчед 1 сиэ 382 - В; НеЬсослабэ-НеЬОогпааа и 3705,Каждый штамм выращивают на среде Герских отдельно до операции инактива.- ции. Первоначальна рост штаммов лептоспир проводят в пробирках на среде с 5;4-ным содержанем инактивированной сыворотки кролика, По истечении 4-5 сут проводят рассев лептоспир из пробирок по 40 мл в матрицы со средой в количестве 0,6 л, содержащей 20 инактивированной кроличьей сыворотки. По истечении 4 - 5 сут проверяот количественный и качественный рост штаммов лептаспир, делают посев на стерильность. Лептоспиры из стерильных матрацов вновь засевают в бутыли со средой в количестве 1,5 л, содержащей 20 кро-,личьей сыворотки, На 4 - 5 сут проверяют количественный и качественный рост лептоспир и проводят посев на стерильность и внось засевают в бутыли со средой в количестве 1,5 л.На 4 - 5 сут проверяют качественный и количественный рост микробной массы в бутыли и проводят посев на стерильность, Выращенные лептоспиры инактивируют на водяной бане в течение 30 мин при 56 С. По истечении времени добавляют фенал до 0,3 содержания,Далее инактивированные штаммы, содержащие 7.10 - 8,10 лептоспир в 1 мл в7 7равных соотношениях сводят в одну емкость, Отконтралированный полуфабрикат разливают, запаивают, затем проверяют на стерильность, безвредность, физические свойства. Полученные результаты вносят в паспорт,Полученный препарат используют для профилактики людей от лептоспиразнай инфекции. Более высокая антигенность и иммунногенность позволит использовать штамм 382 - В при производстве поливалентной противолептоспирозной вакцины вместо применяемого сейчас при изготовлении этого препарата нетипированнаго штамма Крыса 17 серогруппы с 1 егоЬаегпоггЬад 1 ае.Формула изобретения Штамм патогенных лептоспир Яацоэ погчец 1 саэ НИИЭМ им, Н.Ф.Гамалеи чь 356/461, используемый для получения паливалентной противолептоспирозной вакцины.