Способ определения концентрации гепарина в крови

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕОЪЬЛИН е аи ЗС 59 С 01 й 33 САНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ К АВТОРСН товых -иссле- иологи- соеди,8)ков М.Н.1978,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬ 1 ТИ(21) 3487670/28-13 (22) 31.08.82 (46) 23.02.84, Бюл. У 7 (72) В.С,ЕФимов, А.Б.Зезин, В.А.Кабанов, В,А, Кеменова, К.М.Лакин, А,М.Скородинская, О.В.Чернова и К.Н,Дулевич (71) Филиал по разработке го лекарственных средств Научно довательского института по б ческим испытаниям химических нений (53) 615.361.36:612.11.12(08(54) РАЦИ вани гепа свер .с я спос пари ский на о лоты нилп комп(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТ И ГЕПАРИНА В КРОВИ путем титроя плазмы крови антагонистом рина в присутствии активатора тывания, о т л и ч а ю щ и й тем, что, с целью упрощения оба, в качестве антагониста гена используют нестехиометричеполиэлектролитный комплекс снове полиметакриловой киси четвертичной соли поли-вииридина при весовом соотношении лекса и гепарина 2.1 - 20:1Изобретение относится к медицине,в частности к определению гепаринав крови.Известен способ определения концентрации гепарина Б крови путемтитрования плазмы крови антагонистом гепарина - протаминсульфатом вприсутствии активатора свертываниятромбин-кальциевой смеси, заключающийся в регистрации времени образования сгустка при последовательном Оповышении концентрации протаминсульФата, добавляемого к плазме крови 11.Недостатком способа являетсяотсутствие стабильного нейтралиэующего весового соотношения протаминов с гепарином. Это соотношениеколеблется от 1,.5 до 4 мг/1 мг гепарина и зависит от значения рН.Кроме того, протаминсульфат Б количестве, превышающем количество при-.сутствующего в плазме гепарина, сам2 ООказыБает антикоагулянтнОе действиекоторое ошибочно может быть приписано не полностью нейтрализованному гепарину, Кроме того, низкаяселективнссть протаминсульфата квзаимодействию с гепарином Б условиях крови удлиняет время титрованияи определения количества гепарина.Нейтрализующая активность протаминсульфата меняется от препарата к 30препарату а также изменяется прчкратковременном хранении его Б водных растворах,Целью иэобт."етеныя является упрощение способа определения гепаринаЯ КРОБИ,Эта цель достигается тем, чтоОпределение содержания гепарина Бкрови ведут с использованием в качестве антагониста гепарина нестехиометричного голиэлектролитногокоьплекса на основе полиметакриловойкислоты и четвертичной соли поли-винилпиридина при весовом соотношении комплекса и гепарина 2;1-20;1.45П р и м е р Кровь для исследования из краевой Бены уха кроликаберут в силиконированные пробирки,содержащие 3,8-ный раствор цитратанатрия в объемном соотношении 9:1(кровь".цитрат), После добавления0,1 ьп 5%-ного раствора гепаринасмесь перемешивают и центрифугируют10 ми; са скоростью 3000 Об/мин.Плазму отбирают и помещают в термостат коагулометра Мнитгера и Гросса.55Исходный раствор нестехиометричногополиэлектролитного комплекса на основе полиметакриловой кислоты ичетвертичной соли поли-винилпиридина 2,2 разводят последовательнов 2 раза до концентрации 2,210 Ъ,-3В реагентную прОбирку, помещеннуюв термостат коагулометра, вносят0,1 мл плазмы, 0,1 мп одного из приготовленных растворов комплекса 65 и 0,2 мл тромбин-кальциевой смеси такой активности, чтобы свертывание контрольной плазмы наступало за 10-12 с, используя автоматическую пипетку с магнитным пускателем отсчета времени. При образовании сгустка секундомер коагулометра автоматически отключается, Аналогичные измерения проводят с другими разведениями комплекса, При добавлении нестехиометричного полиэлектролитного комплекса в концентрации, 0,275 соотношение антигепаринат:гепарин 1,1: Ц время свертывания составляет 29,7 с, При увеличении концентрации комплекса в 2 раза (соотношение 2,2:.1) Бреви свертывания плазмы составляет 10,2 с и не изменяется до достижения 20-кратного переизбытка комплекса. Таким образом, минимальная нейтралиэующая доза достигается при концентрации комплекса 0,55, что соответствует концентрации гепарина:Скреп ьвксо О, 55епори но Фт =- 0,25% концентрации введенного гепарина, где в " нейтрализующее соотношение комплекс".гепарин.В таблице приводится титрование плазмы, содержащей 0,08 мг гепарина/1 мл плазмы по известному и предлагаемому способам.Из приведенных данных видно, что для определения гепарина в образце плазмы по известному способу требуется по крайней мере 7 титрований общее время титрования 24 мин) тогда как по предлагаемому способу уже третий опыт дает необходимый результат, т.е. число операций сокращается в 2,3 раза (время титрования 4 мин 30 с), При использовании,протаминсульфата в качестве нтагониста гепарина невозможно рименение автоматического коагулометра, так как происходит выпадение осадка, препятствующее образованию прочных нитей фибрина. В предлагаемом способе для регистрации используют автоматический коагулометр, что сокращает время, необходимое для титрования одного образца. Кроме того, сокращение времени исследования достигается за счет приготовления заранее и возможности длительного хранения растворов нестехиометричного полиэлектролитного комплекса. Протаминсульфат же необходимо заново готовить перед каждым опытом. Поэтому общее время, необходимое для определения содержания гепарина, сокращается почти в б раз.упрощение определения концентрации гепарина в крови, ведущее к значительному сокращению времени определения, является чрезвычайно важным Б послеоперационный период1075164 шает вероятность опасных пос:ледствий, вызванных гиперкоагуляцией. для своевременного введения точного количества антигепаринового агента, так как уменьПредлагаемяй способ Известный способ Порядокдобавлениятитрующегоагента Время свертывания, с Нестехиометричный полиэлектролитный комплекс(концентрация)(Ъ Время свертывания,с(концентрация)(В О,1 0,10 0,050,0250,0125 Составитель Н. ГуляеваРедактор Т, Кугрынева Техред,Л.Микеш КоРРектоР И. Эрдерн Заказ 490/37 Тираж 823 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж( Рауюская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород( ул, Проектная, 4 0,200,0500,0750,0250,01250,006 Более 60 Более 60 Более 60 Более 60 30,5+0,6 12,4+0,6 18,6+0,4 10,2+0,4 10,1+0,5 10,2+0,4 18(4+0(6