Способ получения антибиотика олеандомицина

145720 Союз Советскими Социалистицеских РеспубликЗависимое ог авт. свидетельстваЗаявлено 05.И 1.1961 ( 736944/31-16)с присоединением заявкиПриоритетОпубликовано 11.И 1.1973. Бюллетень30Дата опубликования описания 21.Х 1.1973 М, Кл, С 12 902 Государственный комитет Соната Министров СССР по делам изобретеий и открытийУДК -Авторыизобретения Г. И. Клейнер, Р, И. Иофо, А, Д. Касянич, В, Я. Лаздиця, 3. И, Родионовская, Е. И. Сурикова и Д. М. Трахтенберг Заявитель СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛНТИЬИОЪИКА ОЛЕАНДОМИЦИНА Известно культивирование продуцснтя антибиотика олеяндомицица ня средах, содержащих муку бобовых, барду илп энзиматичсский гидролизат белка в качестве источника азота, а глюкозу и крахмал в качестве источников углевода, Также известны очистка антибиотика, основанная ня экстракцпп его пз культуральной жидкости цс сцепивяоццвися с водой растворителями, и выделение свободного основания путем испарения растворителя при пониженном давлении пли выделении соли основания прп действии соответствующей кислотой на раствор основания в воде или органическом растворителе.Предлагаемый способ получения антибиотика олеандомицпна позволяет значительно увеличить выход препарата и упрощает технологический процссс. Это достигается тем, что на первой стадии получения антибиотика (на стадии ферментации) применяется среда, в состав которой вводится Н-пропиловый спирт и кашалотовый жир, а на стадии выделения, вместо известного метода выделения твердого препарата солянокислого олеацдомицина путем упаривания .водного раствора и последующей сушки концентрата, проводится добавление к бутилацетатцому экстракту раствора соляной кислоты в бутилацстятс.При осуществлении способа часть кашалотового жира (0,5%) добавляют при приготовленни питательной среды, а остальное количество (0,5 - 1,0% ) в процессе фсрмснтяцип.Пропиловый спирт вводят в фсрмсптацпонную среду непосредственно перед посевом 5 мицелия гриба. Такая среда обсспсчпваст получение культур альцой жидкости, содержащей примерно в двя раза (180%) больше олеапдомицпна, чем получаемые ранее культуральные жидкости. Выделение антибиотика 10 из культуральной жидкости основано ца извлечении антибиотика бутиляцстатом прп рН 9,5 - 10,0, рсэкстракцш его подкисленной водой, погторцого перевода в тот же раствори- тель и осяждешш соли добавлением раство ра соотвстств,ющс кислот, в том жс растворителе к предварптсльцо сконцентрированному В ваку уе б тилацстятцоыу экстракту олсяндомпциня.П р и м с р 1. Среду., содержащую 2,5% сое вой муки, 0,5% кукурузного экстракта (сухойгсс), 0,75% глокоз, 0,75% крахмала, 0,2% карбоната кальция, разливают в колбы Эрленмайера, стсрилизуют в явтоклавс при 120 С и засевают спорами, полученными на 25 пшене. После посева культуру выращивают втсэмостяте при 27. - :1 С ня круговой качалке в течение 24 час. Содержимое колб ассптичсски псрсдяют в посевной аппарат, содержащий среду того жс состагя, и выращивание 30 продолжают еще 40 - 48 час при 27+1 С, Го145720 Корректоры: В, Федулова и С. Сатагулова Техред Л. Грачева Редактор Н. Цалихииа Заказ 3059/1 Изд. Мз 1754 Тираж 467 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР ио делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 товый посевной мицелий в возрасте 40 - 48 час в количестве 10% по объему асептически добавляют в ферментационную среду, состоящую из посевной среды с добавлением при ес приготовлении кашалотового жира в количестве 0,5%, Непосредственно перед посевом мицелия в ферментационную среду ассптически добавляют пропиловый спирт в количестве 0,75%. В процессе ферментации до 96 чис прибавляют остальное количество кашалотового жира 0,5 - 1/о. Через 160 час содержание олеандомицина, определяемого биологическим методом, достигает 650 лсг/игл. Для выделения антибиотика фильтрат культуральной жидкости помещают в экстрактор, оборудованный мешалкой, добавляют 0,5 объема бутилацетата и доводят рН 20%-ным раствором едкого натра до значения 9,5 - 10,0 при постоянном перемешиванип. К бутилацетатному экстракту добавляют подкисленную воду в количестве 30/о к объему взятого экстракта и реэкстрагируют антибиотик при рН 1,8 - 2,0, Водный раствор повторно извлекают бутилацетатом при рН 9,5 - 10,0 и соотношении объемов водная фаза - бутилацетат 1:0,5. Второй бутилацетатный экстракт концентрируют в вакууме до /г - /го исходного объема. Солянокислый олеандомицин осаждают прибавлением 4 - 5% раствора соляной кислоты в бутилацетате, промывают бутилацетатом и высушивают в вакууме при 70 С и остаточном давлении 10 - 15 лглг рт. ст. После пере.кристаллизации из этилацетата получают кристаллический продукт с т. пл, 129 в 1 С и содертканием 725 лгг/лгл, Выход от активно сти культуральной жидкости составляет 55%.П р и м е р 2. К 10%-ному раствору солянокислого олеандомицина, полученному как описано в примере 1, добавляют один объем бутилацетата и доводят рН 20/,-ным раство ром едкого натра до значешгя 9,3 - 9,6, Послеразделения фаз к бутилацетатному экстракту добавляют при персмешивании 15%-ный раствор фосфорной кислоты в бутилацетате в количестве 1 лголь на 1 доль исходного соля нокислого олеандомицина и выпавший осадокотфильтровывают. Получают белый кристаллический препарат фосфорнокислой соли олеандомицина с т. пл. 146 - 148 С и содержанием 715 лгг/лгл.20Предмет изобретенияСпособ получения антибиотика олеандомицпна на питательной среде, содержащей соевую муку, кукурузный экстракт, глюкозу, 25 крахмал и углекислый кальций, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и упрощения процесса, в питательную среду добавляют Н-пропиловый спирт и кашалотовый жир, а выделение его производят добавле нием к бутилацетатному экстракту растворасоляной кислоты в бутилацетате.