Способ определения нв -антигена

(57) Изобиммунологигии и эпид к прикладнои для вирусолоофилактике ге - повышение дешевленне и сть для клинио проводят адретение относитсяи, предназначеноемиологии при пр1 ель изобретенияности метода, укая его доступнораторий. Для этог атита В.увствительолее широ ских л ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ ОПИСАНИЕ Н АВТОРСКОМУ С(71) Горьковский научинститут эпидемиологи(56) 1. С 1 п. Ра 1 о 1., 1СОБ ОПРЕ ОБРЕТЕНИ сорбцию специфических иммуноглобулинов на твердой подложке. Затем проводят отмывку и инкубацию препарата с антигеном и кон ьюгатом специфических антител пероксидазой. В качестве твердофазного иммуносорбента применяют целлофановые диски ф 1+.0,2 см, на которые наносят специфические иммуноглобулины в концентрации+ 0,2 мг(мл. Метод позволяет обнаружить НВ-антиген в сыворотках и плазме больных вирусными гепатитами с целью определения этиологического фактора инфекции и установления диагноза заболевания, а также для контроля препаратов крови (гамма-глобулина, иммуноглобулина, протеина, альбумина и др.) с целью отбраковки образцов, контамированных вирусом гепа- Я тита В.1408374тическую плотность раствора с помощью фотометрирующего устройства или на спектрои фотометре при длине волны 490 нм. Дляподтверждения специфичности реакции проводят реакцию нейтрализации, в этом случае в конъюгат добавляют 2 о/о антисыворотки о (в контроль - 2% нормальной сыворотки). а Уменьшение интенсивности окрашивания в2 - 2,5 раза по сравнению с контролем указывает на специфический характер реакции. сО Предлагаемый способ апробирован научастке по производству иммунодиагностикумов для определения НВ-антигена. Чувствительность анализа составляла не менее е 0,4 - 0,5 мг/мл НВАд, в пробе по известнох му способу 0,5 - 1,0 мкг/мл. Сорбционная15емкость целлофана превышала емкость поо листироловых планшетов не менее чем в а 3 раза.Ы Метод высокоспецифичен и позволяетполучать четкие количественные данные.20 Кроме того, метод доступен, так как результаты могут учитываться визуально. Непрои реагировавшие компоненты легко отмываются с целлофана после каждого этапа анализа. Целлофан, представляющий собой отр . мытую от примесей гидратцеллюлозу, является дешевым, прочным и широко доступным материалом. Для целей иммуноферменть цой реакции может быть использован целлофан любой марки, выпускаемый отечесм твенной промышленностью.х З 0 Метод расширяет возможности иммуноферментного анализа и позволяет более широко использовать его в клинике - эпидей миологической и гематологической службедля диагностики и профилактики гепатита В. Форлсула изобретения 35 1Изобретение относится к прикладной им 1 уцологии и может найти применение в в р усо;огии и эпидемиологии для диагностикпрофилактики гепатита В. Метод позво пнет обнаруживать НВ -антиген в сыворо 1 гнх п плнзхге болнпнгх вирусггыии гепатит: и с целью определения этнологи ческогактера ггнфектггги и установлении диагноз аболевания, а также для контроля препа )атов крови (гамма-глобулина, иммуно лобулица, протеина, альбумина и др.) селью отбраковки образцов, контамироваг ых вирусом гепатита В.Цель изобретения - повышение чу ствительцости метода, удешевление и боле широкая его доступность для клинически абораторий.Поставленная цель достигается тем, ч в качестве твердофазного иммуносорбент применяют целлофановые диски диаметро 1+0,2 см, на которые наносят специфичес кие иммуноглобулины в концентрации. +0,2 мг/мл.Прил ер. Диски целлофана ди а метро около 1 см (размер дисков зависит от диа метра емкостей, в которых производят маццуляции с ними) помещают в раство спссифических иммуноглобулинов (анти ВАМ ) в концентрациимг/мл в фосфатцо солсвом буфере (ФСБ) рН 7,2.7,4 на цоч (18 - 20 и) цри температуре (+2) - (+4)С 11 осле отмывки водой или ФСБ с 0,05%-ны твин адиски инкубируют в раствора ацтигеа или с исследуемыми пробами в те чсцие 2 -3 ч цри 37"С или в течение 18 - 20 и при комнатной температуре (для это сс.и могут оыть использованы любые стек ляццые или пластиковые емкости). После промывки диски выдерживают в растворе когькц ата апти-НВд -цероксидаза 1 ч при 37+1 С и после тсцательной огмывки - в , растворе эцзимсубстрата (0,005%-ная перекись водорода в 0,1 М фосфатцо-цитратном буфере рН 5,0 с 0,04 о/о орто-фенилецдиамица) . 1 ри наличии анти сна в пробе диски тотчас окрашиваются в ярко-оранжевый или коричневый цвет, контрольные робы остаются бесцветными. Реакцию останавливаюг через 30 - 40 мин 2 М раствором серной кислоты. При необходимости количественного учета реакции измеряют оцСпособ определения НВ -антигена, включающий адсорбцию специфических иммуноглобулицов на твердой подложке, отмывку, инкубацию с антигеном и конъюгатом специфических антител с пероксидазой, оценку результатов проводят по появлению специфического субстратферментного окрашивания, отличаюи(ийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве 45 твердой подложки используют целлофановые диски.Списидите лв В. гигопенкиПели кторди и с хрен И. В рее Корректор О. Крдвцонддк д Зтцт с 1 иудук ЬПодпиеносоВИ ГгдСтддрЕГВ ИНОгг КцЧИх Гд СЛ.С НО ЛЕЛдн ИВОбрстЕНИй И ОтКрЫтннЗСгЗ 5 т .ЧтдСКВд, Ж - З 5, сдупСнхсдя Идбд. 415ни 1 двол. гвхс ннг-иолигрдфигеекое ире.ирятис. г. Уукгород, л. Проектндя,