Способ разделения лейкоцитов

(51) ЕТЕН ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ПИСАНИЕ ИЗОБР А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Авторское свидетельство СССРМ 1123645, кл. С 01 Б 33/53, 1982,(54) С 11 ОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, Цель изобретения - упрощение способа и одновременное получение лимфацитов, макрофагов и нейтрофилов. Для этогопромытые физраствором, забуференнымфосфатами, клетки перитонеальногоэкссудата лабораторных животных осаждают центрифугированием 8 мин при1200 8 и 2-4 С. Клетки, содержащиелимфоциты, макрофаги и нейтрофилы,ресуспендируют в среде Игла, содержащей 20 Х инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки и 10 мМ НЕРЕЯ (рН 7,2), и наносят на культуральные пластиковые чашки, поверхность которых предварительно обработана в течение 2 ч последовательно 27-ным водным р-ром декальцинирован.ного желатина и декальцинированной эмбриональной телячьей сывороткой.о Клетки инкубируют 1,5 ч при 37 С в атмосфере 57,-ного СО. Неприлипшие лимфоциты получают 3-кратным промыванием монослоя р-ром Хенкса и собирают центрифугированием. Отделение макрофагов производят встряхиваиием культуральных частей в течение 30 мин, затем их собирают. центрифугированием. 11 олучаемые нейтрофилы остаются на покрытой желатином пластиковой поверхности.1388809 формула изобретения Составитель Е.ЯрныхРедактор Т.Парфенова Техред А.Кравчук Корректор В.Бутяга Тираж 847 Заказ 1576/47 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва,.Ж, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектнач, 4 Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.Целью изобретения является упрощение способа и одновременное получе 5 ние лимфоцитов, макрофагов и нейтроФилов.П р и м е р. Экспериментальной моделью являются клетки перитонеальноно эксудата мышей СВА интактных и с 10 различными сроками внутрибрюшинной инъекции пептона. Клетки перитонеального эксудата получают промыванием брюшной полости мышей физиологическим раствором, забуференным фосфа тами (ИаС 1 128 мМ, ИаН РО 10 мМ, рН 7,2), затем осаждают центрифугированием в течение 8 мин при 1200 8 при 2-4 С. Клетки (40 х 10 ), содержа,щие 3,84 х 10 лимфоцитов, 25,68 х 10 20 макрофагов и 10,48 х 10 нейтрофиловйресуспендируют в среде Игла, содержащей 20% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки и 10 мМ НЕРЕЯ (рН 7,2) и наносят на культуральныебпластиковые чашки (2 х 10 /мл), поверхность которых предварительно обрабатывают в течение 2 ч последовательно 2%-ным водным раствором декальцинированного желатина и декальцинирован ной эмбриональной телячьей сывороткой. Чашки перед нанесением клеток ополаскивают Физиологическим раствором, эабуференным Фосфатами (рН 7,2).оКлетки инкубируют при 37 С в течение 90 мин в атмосфере 57, СО. Неприлипшие лимфоциты получают трехкратным промыванием монослоя раствором Хенкса и собирают центрифугированием, при этом выход 81%, чистота 927. После этого к монослоям клеток добавляют 3 мл раствора, представляющего собой смесь 1:1 (среда Игла, содержащая 207 эмбриональной телячьей сыворотки и 10 мМ этилендиамино-тетрауксусная кислота в физиологическом растворе, забуференном Фосфатами,рН 7,2), Отделение макрофагов от поверхности проводят при встряхиваниикультуральных чашей в течение 30 мин,после чего их собирают центрифугированием, при этом выход 547 чистота 94%. Получаемые нейтрофилы остаются на покрытой желатином пластиковойповерхности, выход их 507., чистота 96%. Идентификацию выделяемых предлагаемым способом клеток проводят спомощью окраски по Романовскому-Гимэаи на неспецифическую эстеразу,являющуюся маркерным ферментом длямакрофагов и моноцитов.Использование изобретения позволяет получить лимфоциты, макрофаги инейтрофилы с высокой степенью чистоты и выхода в течение 2-3 ч. Способ разделения лейкоцитов путем центрифугирования и отбора целевых продуктов с последующей их очисткой, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и одновременного получения лимфоцитов, макроФагов и нейтрофилов, после центрифугирования клетки наносят на пластиковую поверхность последовательно обработанную 2%-ным водным раствором декальцинированного желатина и декальцинированной эмбриональной телячьей сывороткой.