Способ определения спектра жирных кислот в биологической жидкости

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 3/9 ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 11 Гг гА и- ния з ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(71) 1-й Московский медицинский институт им. И.М. Сеченова(56) Карлин И.П., Якушина Л.М.,Кузьмин Н,М. Газохроматографическийанализ жиров и масел растительногои животного происхождения. - Журналаналитической химии, 1980, 35, В 6,с. 1195-1200.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕКТРА ЖИРНЫХ КИСЛОТ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ(57) Изобретение относится к медцине, предназначено для определесостава жирных кислот в плазме крови больных ишемической болезнью сердца. Цель изобретения - повышениечувствительности способа путем расширения спектра определения кислот.Для этого порцию плазмы крови экстрагируют с хлороформно-метанольнойсмесью (2:1) 3 мин. Нерастворимуюфракцию белков отфильтровывают черебумажный фильтр. Фильтр промывают5- 10 мл хлороформно-этанольной смеси (2:1). К объединенному фильтратуприбавляют 5 мл воды, энергичновстряхивают и центрифугируют. Верхний водный слой отделяют и отбрасывают. Хлороформный слой высушивают,добавляют раствор едкого калия, инкубируют при 90-100 С, охлаждаютдо 20 С и подкисляют серной кислотой до рН 1. Свободные жирные кислоты экстрагируют тремя порциями додиэтилового эфира. Эфирные извлечения объединяют и эфир испаряют. Кполученной смеси свободных жирныхкислот добавляют 107-ный бутанольныйраствор гидроокиси тетрабутиламмония или 107.-ный раствор этанольного раствора гидроокиси тетраэтиламмония, перемешивают и вводят в испаритель хроматографа с 330 С. Анализ кислот проводят на газовом хроматографе "Биохром" с плазменно-ионизационным детектором на стеклянной капиллярной колонке с неподвижной фазой ф ОЧ. Газ-носитель - азот, давление на входе О, 15 МПа, расход водорода 25 мл/мин, воздуха 300 мл/мин, (300 С в детекторе и 330-350 С - в испарителе. Выход бутиловых эфиров 987.Составитель Л.КонюховаТехред М.Ходанич Корректор В,Бутяга Редактор Е.Копча Тираж 776 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5 Заказ 2655/49,Производственно-полиграфическое предприятие г. Ужгород, ул. Проектная, 4 1 132075Изобретение относится к медицине,в частности к определению составажирньй кислот в плазме крови больныхишемической болезнью сердца.Цель изобретения - повышение чувствительности способа за счет расширения спектра определения кислот.П р и м е. р, 1 мл плазмы кровиэкстрагируют 20 мл хлороформно-метанольной смеси (2:1) 3 мин, Нерастворимую фракцию белков отфильтровываютчерез бумажный фильтр, Фильтр промывают 5 мл хлороформно-метанольнойсмеси (2:1). К объединенному фильтрату прибавляют 5 мл воды, энергичновстряхивают 1 мин и центрифугируют.Верхний водный слой отделяют и отбрасывают. Хлороформный слой упаривают до сухого остатка, добавляют 5 млраствора едкого калия (0,5 моль/л),нагревают в течение 5 мин на водянойбане при 90-100 С, затем охлаждаютдо 20 С и подкисляют серной кислотой(2,5 моль/л) до рН 1, Свободные жирные кислоты экстрагируют тремя пор 25циями диэтилового эфира по 1 мл втечение 1 мин. Эфирные извлеченияобъединяют в микропробирке, оттянутой на корпус, и эфир испаряют в токе воздуха или азота. К полученнойсмеси свободных жирных кислот добавляют 30 мкл 10 -ного бутанольногораствора гидроокиси тетрабутиламмония или 30 мкл 10 -ного этанольногораствора гидроокиси тетраэтиламмония, перемешивают и при помощи газохроматографического шприца вводятв количестве 5-10 мкл в испарительхроматографа, нагретый до 330 С,6 2По известному способу на хроматограмме, регистрируются кислоты, начиная с лауриновой. Анализ проводят на газовом хроматографе "Биохром" с плазменно-ионизационным детектором. на стеклянной капиллярной колонке длиной 50 м и внутренним диаметром 0,2 мм с неподвижной фазой ОЧ. Газ-носитель - азот, давление на входе О, 15 МПа, расход водорода 25 мл/мин, расход воздуха 300 мл/мин, деление потока на входе 1:20, температура детектора поддерживалась на уровне 300 С, испарителя 330-350 С.Температура колонки программировалась от 110 до 295 С со скоростью 4 град/мин, диапазон чувствительности усилителя 1,2.10 "А.Выход этиловых эфиров составляет 98 . На хроматограмме в виде бутиловых эфиров регистрируются кислоты, начиная с гептановой, в виде этиловых эфиров - начиная с капри- новой. Формула изобретенияСпособ определения спектра жирных кислот в биологической жидкости путем экстракции пробы, упаривания, этерификации промежуточных продуктов с последующим газохроматографическим анализом, о т л и ч а ю щ и й с я тем, чтос целью повышения чувствительности способа за счет расширения спектра определения кислот, в качестве этерифицирующего агента используют тетраалкиламмониевые основания, а этерификацию проводят в испарителе хроматографа при температуре 330- 350 С.