Способ диагностики гломерулонефрита

(57) Изобретениене. Цель изобрет ние в ранние сроки уровня прекалликре этого в.пробирку н 25 С вносят равные суспензии каолина отбирают в пробирк 0,05 М мединаловог ОСУДАРСТНЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ 3733404/28-1428.02,8423.06.87. Бюл, У 23Киевский научно-исследовательснстнтут урологии и нейрологии Е.И.Кримкевич, Н.М.Петрунь .Кучеренко612,015:616,6 (088.8) Биохимические методы исследоваклинике./ Под ред. А.А.Покровс - М.; Медицина, 1969, с.61. ПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЛОМЕРУЛОНЕ тносится к медициия - диагностировапутем определенияина в крови, Дляа водяной бане причасти плазмы и(10 мг/мл), Смесьи, содержащие о буфера, рН 7,6,добавляют протаминсульфат и инкубируют пробы 15 мин прй 35 С, Затемдобавляют 207-ную трихлоруксуснуюкислоту (ТХУ). В контрольные пробыпротаминсульйат вносят после ТХУ.После осаждения нерасщепившегося протаминсулъфата ТХУ пробы центрифугируют45 мин при 5000 об/мин. Затем пробирки с отобранным ТХУ-центрифугатомдержат 60-120 с на кипящей водянойбане, повторно центрийугируют 15 минпри 5000 об/мин. В прозрачном центрифугате определяют содержание аргииина. Количество аргинина в пробах служит мерой активированного прекалликреина. Уровень прекалликреина вплазме здорового человека 178,8 +ф 10 мкмоль/л.мин, При уровне ниже130 мкмоль/л,мии делают вывод об активации калликреин-кининовой системыкрови, вызванной наличием аутоиммунного процесса в почке, и диагностируют гломерулонефрит.1 131Изобретение относится к медицинеи может использоваться для диагностики гломерулонефрита.Цель изобретения в ,диагностирование в ранние строки, что достигаетсяза счет определения уровня прекалликреина в крови,Способ осуществляют следующим образомм.В полиэтиленовую пробирку, помеощенную на водяную баню:при 25 С,вносят 0,2 мл плазмы и 0,2 мл суспенэиикаолина (1 0 мг/мл). После контактаплазмы с каолином в течение 1 минотбирают по 0,2 мл смеси в пробирки,содержание 0,4 мл 0,05 М мединалового буфера, рН 7,6; Добавляют 0,2 мл17.-ного протаминсульфата и инкубируоют пробы 15 мин при 35 С, после чегореакцию останавливают, добавляя0,8 мл 20 Е-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ). В контрольные пробы протаминсульфат вносят после ТХУ. Послеосаждения нерасщепившегося протаминсульфата трихлоруксусной кислотойпробы центрифугируют 45 мин при5000 об/мин.После этого пробирки с отобраннымТХУ-центрифугатой погружают в кипящую водяную баню на 60-120 с, охлаждают и повторно центрифугируют при5000 об/мин 15 мин, В прозрачномцентрифугате определяют содержаниеаргинина по реакции Сакагучи. Дляэтого к 1 мл цеитрифугата добавляют1 мл дистиллированной воды, 1 мл0,023-ного раствора оксихинолина,1 мл 107.-ного раствора едкого натра.Через 2 мин добавляют 0,2 мл 1 Е-ного.раствора ЮаВгО, спустя 15 с - 1 мл403-ного раствора мочевины, по истечении 45 с - 1 мл дистиллированнойводы. После каждого добавления очередного реактива пробы тщательно пе"ремешивают. Спустя 10 мин определяютоптическую плотность раствора при508 нм на спектрофотометре илн наФЭКе при светофильтре 9 5 в кювете10 мм, сравнивая опытную пробу сконтрольной,Количество аргинина в пробах служит мерой активированного прекалликреина,Активность прекалликреина выражают в микромолях аргинина, отщепленного от протаминсульфата 1 литром плазмы крови за 1 минуту, по Формуле1 8910Р х Ч, х 1000АхЧ хе хЧгде Р - количество аргинина в пробе,5 мкг;Ч - общий объем пробы, мл;Ч - объем плазмы в пробе, мл;оС, - время инкубации при 35 С,мин;- время преинкубации при 25 С,мин;М - молекулярная масса аргинина;1000 - пересчет на 1 л плазмы,При расчете уровня прекалликреинаучитывается разность между содержанием аргинина в плазме, активированнойв течение 1 мин и неактивированной,Уровень прекалликреина в плазмездорового человека составляет 178,8++ 11,0 мкмоль/л,мин.1Снижение уровня прекалликреинаниже 130 мкмоль/л.мин свидетельствует об активации калликреин-кининовойсистемы крови, вызванной наличиемаутоимунного процесса в почке,1П р и м е р 1, Больной С.,1968 г,.рожд., В ист,болезни 629. Содержа 30 ние общего белка, определенное известным методом 81,4 г/л - нормальный уровень, Параллельно исследованный предлагаемым способом уровеньпрекалликреина 97,3 мкмоль/л,мин35 понижен, Клинический диагноз: острый гломерулонефрит, т,е, предложенный способ позволяет провести необходимую диагностику на раннем этапеи раньше назначить патогенетическую40 терапию,Формула изо бретенияСпособ диагностики гломерулонеф рита путем исследования белка плазмы крови, о т л и ч а ю щ и й с ятем, что, с целью диагностированияв ранние сроки, плазму обрабатываюткаолином, инкубируют полученную 50 смесь с протаминсульфатом, далеедобавляют трихлоруксусную кислоту,полученный супернатант кипятят в течение 60-120 с, после чего в нем определяют уровень прекаллекреина и 55 при значении его менее 130 мкмоль/