Способ определения активности тимозина

(19) (11) 51) 4 О 01 Б 33/48 СУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ ОПИСАНИЕ ЛЬСТВУ С 8 И Н АВТОРСНО овательи он кольскийева,(56) ГюллингЭ,В., Самбур М Способ количес ктивности тимо 7 енно(57) Изобретение повышает точность определения активности тимозина, Лимфоциты выделяют иэ гепаринизированной крови в градиенте фиколла и веро- графина, отмывают средой 199, взвесь лимфоцитов доводят до концентрации 10 в 1 мл средой 199, Клеточную 6о взвесь инкубируют 1 ч при 37 С с различными концентрациями тимоэина,6 добавляют эритроциты мыши (2.10 клеток), центрифгируют и инкубируют 30 мин при 37 С. К осадку добавляют 0,6 Е раствор глутаральдегида, готовят капли на предметном стекле, фиксируют метанолом и окрашивают по Романовскому-Гимза. Активность тимо- с зина определяют по числу розеткообраэующих клеток при минимальной концентрации тимозина.12 Изобретение относится к биологий,медицине, медицинской промышленностии может быть использовано для определения активности тимозина - гормона, выделяемого из вилочковой железы, широко применяемого в экспериментальных исследованиях и клиникедля лечения больных с иммунодефицитами различной этиологии.Цель изобретения - повышение точности определения активности тимозина,Составитель И. БашкаевТехред А.Кравчук Редактор В. Ковтун Корректор Л. Пилипенко Заказ 381/50 Подписное Тираж 777 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, И, Раушская наб., д. 4/5Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 П р и м е р 1. Лимфоциты выделя" ют из гепаринизированной крови в градиенте фиколла и верографина, Полученную взвесь лимфоцитов дважды отмывают средой 199 по 10 мин при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость отбирают, осадок помещают в 1 мл среды 199 и считают количество выделенных лимфоцитов. Взвесь лимфоцитов доводят до конечной концентрации 10 в 1 мл средой 199. Для одноБго определения берут 0,1 мл указанной клеточной взвеси. Клетки инкубируют 1 ч при 37 С с различными коноцентрациями тимозина, добавляемого в пробирки в объеме 0,1 мл. Контролем служат лимфоциты, инкубируемые при 37 С в течение 1 ч с тем же объемом питательной среды, После инкубации с тимозином клетки дважды отмывают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 мин, К 0,1 мл взвеси проинкубированных с тимозином лимфоцитов (10 клеток) до 5бавляют 0,1 мл суспензии трижды отмытых физиологическим раствором эритробцитов мьппи (2.10 клеток). Смесь клеток центрифугируют в течение 5 мин при 1000 об/мин и инкубируюто30 мин при 37 С. Затем к осадку до 93656бавляют по 0,1 мл 0,6 Х-ного раствораглютаральдегида, осторожно ресуспендируют осадок и центрифугируют 5 минпри 1000 об/мин. Надосадочную жид кость сливают к осадку добавляют0,1 мл дистиллированной воды, ресуспендируют смесь, готовят капли напредметном стекле, Высохшие каплиФиксируют метанолом и окрашивают по 1 О Романовскому-Гимза. Подсчет произво,дится при увеличении 7 х 90, Розеткойсчитают образование из лимфоцита,инкубированного с минимальной дозойтимозина и трех и более присоеди-нившихся к нему эритроцитов. Подсчетрозеток производится на 200 лимфоцитов и выражается в процентах. Например, после инкубации лимфоцитов всреде было зарегистрировано 47 20 Ем-РОК, а,после инкубации лимфоцитовс тимоэином в концентрациях 60 и30 мкг/мл соответственно 8 и 47,активность тимозина равна 60 мкг/мл,что более чем,на 307. повышает точность способа по сравнению с прототипом, возможность определения которого равна 125 мкг/мл. формула изобретения30 Способ определения активности ти.мозина, включающий выделение лимфоцитов человека, инкубацию лимфоцитов с тимозином в различных концентрациях и добавление эритроцитов с последующим определением активности тимо- зина по числу розеткообразующих клеток при минимальной концентрации тимозина, о т л и ч а ю щ и й с я тем, 40 что, с целью повышения точности способа, выделениелимфоцитов осуществляют иэ периферической крови и после инкубации их с тимозином добавляют эритроциты мыши.