Способ получения диагоностического флуоресцирующего гриппозного иммуноглобулина

Номер патента: 1218513

Авторы: Камфорин, Медведева, Потапенко, Фейгельман

ZIP архив

Текст

СОЮЗ СОЯЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 51)4 А 61 В 10 00 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ АВТОБУС семдктеьа ТВ сследоваи Ленинград ьскнй инсти едведев ельман И,тныхесциены антиеини Сл УДМРСТВЕКНЫЙ КОМИТЕТ СССРДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧКНИЯ ДИАГНОСТИЧКСКОГО ФЛУОРЕСЦИРУВЩЕГО ГРИППОЗНОГОИИИУНОГЛОБУЛИНА путем последовательной обработки нротивогрнппозной сыворотки риванолом, сульфатом аммония споследующей очисткой и коны 0 гациейс флуорохромом, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью ускоренияспособа и повышения выхода конечного продукта, очистку проводят обработкой ХБ 6 6-8 Х-ным раствором хлористого натрия, а конъвгацив осуществляют в течение 1-3 ч при 18-26 С.Составитель Т. КозловаТехред А.Кравчук Корректор О. Луговая Редактор Т, Якова юМ Заказ 5588/2 Тираж 660 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делаи изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5роизводствекно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4 4 12Изобретение относится к иедицине, в частности иммунологии, и может быть использовано в вакционно-сывороточнои деле при производстве флуоресцирувщих антител для экспрессдиагиостики гриппа.Целью изобретения является ускорение способа и повышение выхода конечного продукта.Способ поясняется следующим приме- ромеХ О,ЗХ-ному водному раствору риваиола при иостояинои перемешиваниидобавляют сыворотку кролике, иииуниув к вирусу гриппа А(НЗЯ 2 у и имеющув специфический титр в РТГА 1/640, На 500 ип растворе риванола берут100 мп сывбротки. Через 1 ч после добавления сыворотки рй смеси доводят раствором едкого натрия до 7,1 и выдерживают в течение 15 ч при 4 фС, при этом выпадает плотный оса док ельбумииа. Надосадочную жидкость, содержащую глобулины, отделяют цеитрифугированием в течение ЗО иин ири факторе разделения Р =1000.Для очистки глобулина от риванола в иадосадочную жидкость добавляют П хлористого натрия, После 30 мин переиешивания осадок отделяют фильтрованием через буиажный фильтр.Профильтрованный раствор охлаждают до 4 С, после чего в него добавляют равиьй объем насыщенного раство- ра сериокислого аммония и выдерживают при той же температуре в тече" иие 12 ч. Осадок отделяют центрифугированиеи в течение 45 мин при Р в 25 ОО, а затем разводят забуференным физиологическим раствором уИ 7,2 до объема, равного 1/3 исходного объема сыворотки, что составляет 33 ил.Очистку выделенного 1 яС осуществляют гельхроиатографией на колонке с сефадексом Спри помощи аб 18513 3сорбциометра. Для дальнейшей работыотбирают фракции 1 еС максимальногосветопоглощення при длине волны280 нм. Всего собирают 807 иммуноглобулинов, иммунологнческая активность которых в РТГА с гомологнчным антигеном составляет 1/640. Порезультатаи электрофоретическогоконтроля установлено, что вьщеленная1 О фракция не содержит других сывороточных белков., кроме 1 яС, при этоиконцентрация белка в собранном растворе составляет 2,4 об,Х,В полученный раствор добавляют15 0,5 М карбонатный буферный раствордо рН 9,3.Операцию конъюгации 18 С с флуоресцеиннзотноцианатом (ФИТЦ), используемым в качестве флуорохрома для2 о метки иммуноглобулина, проводят добавлением 24 мг ФИТЦ к 50 ил2,4 Х-ного раствора 18 С. Смесь выдерживают в течение 2 ч при 22 С.Полученный конъюгат подвергают25 очистке от несвязавшегося ФИТЦ наколонке с гелем сефадекса С.После этого производят фракционирование меченых иимуноглобулинов наДЕАЕ-целлюлозе по известной метоЗб дикеВ конъюгат вносят консервант -1 Х-ный раствор мертиолята натрия всоотношении 1: 10000, заморажнваютдо -20 С и лиофйлиэирувт.В данном примере получают флуоресцирующий иииуноглобулин с обратным красящим титром, равным 32,н обратным титром неспецифическойактивности, равным 8.Таким образом, за счет сокращения экспозиции при проведении конъюгации происходит ускорение способав 10 раз (2 ч против 20 ч по прототипу) н повышение выхода конечного4 продукта за счет повышения красящего титра в 4 раза (16-32 против 4-8по прототипу).

Смотреть

Заявка

3728252, 18.04.1984

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГРИППА, ЛЕНИНГРАДСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВАКЦИН И СЫВОРОТОК

КАМФОРИН Л. Е, МЕДВЕДЕВА Н. А, ПОТАПЕНКО Л. Б, ФЕЙГЕЛЬМАН Б. И

МПК / Метки

МПК: A61B 10/00

Метки: гриппозного, диагоностического, иммуноглобулина, флуоресцирующего

Опубликовано: 15.10.1986

Код ссылки

<a href="https://patents.su/2-1218513-sposob-polucheniya-diagonosticheskogo-fluoresciruyushhego-grippoznogo-immunoglobulina.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения диагоностического флуоресцирующего гриппозного иммуноглобулина</a>

Похожие патенты