Способ культивирования шизотрипанум круци

- СССР ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУГ. В, РомановСПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАИИЯ 1 ЦИЗОТРИПАНУМ КРУЦ Заявлено 26 июля 1953 г. за М 604799/31 в Комитет но делам изобретений и открытийпри Совете Министров СССРИзооретением яв.яется псб культиви 1 ования трнпанозом шизотрипапум круци путем выращивания их на среде следующего состава: Д.Д, пептона 200 мл Мясной воды (0,5 кг мяса на 1 л воды) 200 мл Дистиллированной воды 600 мл Сухих кровяных зерен 20 г КагНРО 4 12 НгО ЗгКН 2 Р 04 0,5 г Глюкозы 10 г Тиамиа (витамина В,) 0,05 г Готовится среда следуощим образом, 1) ПриГОТОВлевие Д.д, пептОна. Сзекие свиные желудки Очщаот От жира и пленок и пропускают через мясорубку. На 1 кг фарша берут 0,5 л молодых пиных дрожжей, 0,5 л дист 1:гированной воды и 40 мл химически чистой соляной кислоты уд. в. 1,19. Протеолиз проводят в бутылях.Бутыли встряхивают для равномерного перемешивания смеси, ставят в водяную баню; смесь нагревают до 50" и держат при этой температуре до конца протеолнза белков. Через 1 час а затем через 3 час. (от начала протеолиза белков при 50) в ка.кдую бутыль прибавляют по 10 мл концентрированной соляной кислоты для поддержания оптимальной концентрации водородных ионов, которая постепенно падает по мере связывания кислоты, В конце протеолиза белков, который продолжается при 50 от 5 до 7 час остатки нерасщепленных белков превращаются в однородную порошковидную массу, а гидролизат теряет тягучесть и легко стекает со стеклянной палочки. Полная потеря гидролизатом тягу. -ести слукит показателем дл 5 п 1 эекращепя протеолиза. ГидролРЗат Отстаивают 2 - 3 дня, фильтруют через легкий ватпыи фильтр, закрьвают ватно-марлевой пробкои и оставляют прн 18 - 20 для отстаивания и дальнейшего протеолза высокомолекулярных белковых продуктов ферментами, перешедшими в фильтра.118588 Предмет изобретения Способ культивирования шизотрипанум круци, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью удешевления и увеличения производства, шизотрипанум круци выращивают на питательной среде, состоящей из кровяных зерен, полученных из сгустков донорской крови и добавленного к ним витаминизированного тиамином фосфато-буферного бульона, изготовленного из Д,Д. пептона продукта двухфазного ферментативного расщепления свиных желудков и молодых пивных дрожжей в присутствии соляной кислоты) и мясной воды. Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Редактор А. К. Лейкина Гр. 139Поди. к печ. 19.111-59 г. Тираж 660 Цена 25 коп, Информационно-издательский отдел.Объем 0,17 и. л. Зак. 1397 Типография Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Москва, Петровка, 14.В конпе второй фазы протеоли",а астатк: нерасщепленных продуктов белка оседают на дно, а гидролизат становится прозрачным и дрИбретает темную окраску, Гидролизат декантируют, подщелачивают 40%-ным раствором едкого натра до рН,5, разливают в бутыли, инактивируют при 80 1 О мин. После охлаждения гидролпзат фильгруют, консервируют приоавлением 1% хлороформа, плотно закрывают резшовой пробкой и хранят в сухом, прохладном месте.2) Приготовление мясной ьоды. Парную телятину, отделенную от костей и очищенную от жира и сухожилий, пропускают через мясорубку. Мясной фарш настаивают на двойном количестве дистиллированной воды в течение 18 - 20 час, Смесь кипятят 30 мин., фильтруют, разливают в бутыли и стерилизуют при 115 в течение 30 мин .3) Приготовление кровяных зерен. Свежие сгустки донорской крови (производственные отходы при получении противокоревой сыворотки) промывают холодной водопроводной водой, заливают двойным количеством дистиллированной воды, кипятят при постоянном перемешивании в течение 20 мин. Воду после кипячения сгустков быстро сливают, а сгустки крошат на мелкие кусочки, раскладывают в противни, покрытые фильтровальной бумагой и высушивают при 38 - 40 в течение 24 - 36 час.4) Приготовление среды, Накануне приготовления среды развешивают кровяные зерна: в пробирки по 0,1 г и в матрацные колбы по 4 г (пробирки и матрацные колбы должны быть из нейтрального стекла). В пробирки прибавляют по 1 лл, а в колбы - по 40 ил дистиллированной воды, подщелоченной раствором едкого патра до рН = 8,3 - 8,4 и автоклавируют при 127 (1,5 атм) в течение 1 час,По приведенной прописи смешивают Д.Д. пептон, мясную и дистиллированную воду. К смеси прибавляют фосфатные соли, предварительно растворенные при нагревании в небольшом количестве дистиллированной воды. Смесь энергично перемешивают и постепенно нагревают приблизительно до 80, подщелачивают 10% раствором едкого натра до рН = 8,0 - 8,2 (по индикаторной бумажке с креозоловым красным) и кипятят 10 - 12 мин.Бульон отстаивают и фильтруют при температуре около 60 через полотно или плотный ватно-марлевый фильтр. К фильтрату прибавляют глюкозу, устанавливают рН = 7,6, кипятят 1 - 2 мин затем прибавляют тиамин, фильтруют через двойной бумажный фильтр, разливают в сосуд со стерильными кровяными зернами и стерилизуют при 100 45 мин.