Способ выделения гликозаминогликанов из синовиальной жидкости и травматического экссудата

(71) Волгоградский государственный медицинский институт(56) 1. Логинов А.С., Приваленко М.Н. Скобелева Т.В. Скрининг-метод иссле- . дования ГАГ мочи в клинике хронических заболеваний печени.-Лабораторное дело", 1981, В 2, с. ЛЗ-Л 7.2. Меркурьева Р,В, Электрофорети- ческое разделение сывороточных мукоцротеидов на фракции.-фЛабораторное делоф, 1966, В 12, с. 712-716 (прототип). ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И.ОТКРЫТИЙ(54) (57) СПОСОБ ВЬЩЕЛЕНИЯ ГЛИКОЭАМИНОГЛИКАНОВ ИЗ СИНОВИАЛЬНОЯ ЖИДКОСТИИ ТРАВМАТИЧЕСКОГО ЭКССУДАЪЪвключающий осазщение фосфорно-вольфрамовой кислотой гликозаминогликанов,о т л и ч а ю щ и й с я тем, .что,с целью повнаенчя чистоты целевогопродукта, после добавления Фосфорновольфрамовой кислоты к пробе добавляют 0,07-0,1 моль этилового спиртазатем пробу инкубируют при встряхивании в течение 10-15 мин.1054785 Количествновокаинамоль 0,03 05 5 10 1 5 0 10 ратыв 2 н,55щательно выдй хлопье- лороб ирке н сол Изобретение относится к медицинской химии, а именно к методам выделения гликозаминогликанов из синовиальной жидкости и травматическогоэкссудата, и может быть использовано в ревматологии, травматологии и 5ортопедии для диагностики различных заболеваний.Известен способ вццеления гликозаминогликанов из сыворотки крови,включающий последовательное осаждение белков 6-ной хлорной кислотой, отделение их и осаждение гликозаминогликанов 5-ной Фосфорновольфрамовой кислотой 13. и 2 3.Однако известный спосОб не обеспе чивает чистого выделения гликозаминогликанов суставной жидкости и травматического экссудата ввиду того,что взятие данных .;сред у больныхпроизводится с применением 2-ногорас" зора новокаина или других местных анестатиков, которые дают осадок с фосФорно-вольФрамовой кислотой,который при проведении следующих. этапов обработки согласно методикене отделяется от осадка гликозаминогликанов,Цель изобретения - повышениечистоты целевого продукта.Поставленная цель достигаетсятем, что при осуществлении способа 30выделения гликозаминогликанов изсиновиальной жидкости и травматического экссудата, включающего осаждение фосФорно-вольфрамовой кислотой,после добавления фосфорно-вольФрамовой кислоты к пробе добавляют 0,070,1 моль этилового спирта, далее пробу инкубируют при встряхивании в те. чение 10-15 мин,Способ осуществляют следующим об Оразом.Для взятия у больных синовиальнойжидкости и травматического экссудатапроводится пунктирование коленногосустава и места перелома в асептических условиях с введением в полостьсустава и место перелома 2 раствора новокаина,К 1 мл взятой синовиальной жидкости и травматического экссудатаприбавляют 3 мл 6-ного растворахлорной кислоты, получившийся раствор фильтруют через фильтровальнуюбумагу. К полученному фильтрату добавляют 2,5 мп 5-ного раствофосфорно-вольфрамовой кислорастворе соляной кислоты, тперемешивают, выпавший белывидный осадок оставляют в ина 15 мин, .Он представляет собойесь осадка гликозаминогликанов и 60и новокаина, которые перед центрифугированием осадка должны бытьВНИИПИ Заказ 9099/52 разделены. Для разделения осадков в каждую пробу вносят в среднем по 3-5 мл 96-ного этилового спирта и пробы встряхивают в течение 10 15 мин, В результате получается прозрачная жидкость с едва заметными хлопьями. Только после этого суспензию центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Полученный осадок является смесью гликозаминогликанов, которые после удаления надосадочной жидкости подсушивают и растворяют в 0,1- 0,2 мл 0,.1 н.раствора едкого натра.Для подтверждения полученной цели проводят электрофоретическое разделение гликозаминогликанов в поли акриламидном геле. Полученный. осадок растворяют в 0,1 н, растворе едкого натра и проводят электрофорез в 7-ном полиакриламидном геле в режимах 2,5 мЛ на трубку в течение 2,5 ч,После окраски альциановым синим и обесцвечивания в 3-пой уксусной кислоте получают Фракции хондроитин сульфатов и гиалуроновой кислоты.Для определения оптимальных концентраций.,этилового спирта, необходимых и достаточных для осуществления способа, проведено испытание с чистым 2-ным раствором новокаина. При этом найдено количест во спирта, необходимое для полного растворения новокаина, образующегося при его реакции с фосфорно-вольфрамовой кислотой (см. таблицу). Данные таблицы показывают, что если проба содержит максимадьное количество новокаина до 1 мп , а исследуемую жидкость в минимальных количествах, то для растворения осадка новокаина необходимо взять 0,1 моль этилового спирта (б мп 96 саирта. Таким образом, 4-6 мпявляются необходимыми и достаточными для обработки гликозаминогликанов из 1 мл биологической пробы.Способ позволяет повысить чистоту елекия гликозаминогликанов из биогических сред, взятых с применением овокаина, по сравнению с известньак, что дает возможность использовать метод дискэлектрофореза в качестве клйнико-лабораторного теста в ревматологии, травматологии и ортопедии.Тираж 873 Подписное