Способ получения производных линкомицин-2-фосфата

(23) Приоритет - (32) 1 С 07.Ц. 3.ЫХ 6С 07 Р 9/О Госуднрственньй квинтет Севвтв Мнннстрав СССР на делам нзобретвннй н вткрмтнй4 о) Йата опубликования спи Иностранцы озович и Дональд2 Авторы рв йэыатв Востр анна онтель 4) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРО ЛИНКОИИЦИНФОСФ ДНЬИ иметь алкил и фронт значения ле о ымира 3 ее ако олее чем слкил, са;.аралкил, орлер ода20 уг р дн а держащий 3-8 ато Ь держащий не боле. к - водород,шие указанные эн жаший 5-6 углеро основанный на О Способ заключ рие обшей формул,ХИн Я-( гдв хлор, бром,чет ксигруп е Изобретение относится к области получения новых антибиотиков - производных .линкомицин фосфа 1 а, обладающих широким спектром бактериального действия подобно известному антибиотикулинкомипк:у.Известно монофосфорилированив сахаров с оДной незащищенной оксйгруппой путем об:,работки их фосфорилирующими агентами, ;преимущественно эфирами хлорфосфорной 1 кислоты, с последующим удалением эашитной группы известным способом, например 1 гидролиэом, на любой подходящей стадии.Предлагается способ получения производных линкомицинфосфата общей формулы. К, СИ,томамицикловмов углерода,12 атомов угил и аралкиченин, циклоалых атомов 1стных рен в том чт НС-СНф,НЯд Й имеют указанные зн 1 ф уль или целое число, от одновключительно,19 5 Ю 15 95 Водопроводная вода1 лВо время заражения добавили этиониндо концентрации 2 мг/мл.ферментация в колбах закончилась послеообработки в течение 4 дней при 28 С натрясучке Гумпа при 250 об/мин, В нихсодержалось по 200 мкг/мл образца 5.0 о 1 еаОбщее количество твердых веществ в исчерпанной питательной среде составило 20 г/л.Очистка, Всю питательную среду(235 л)послеДЬ -зтиониновой ферментации отфильтровали при рН сбора с помощью фильтра,Осадок мицелия промыли водой и отбросили. Отфильтрованную питательную средуи водную промывку (275 л) перемешивали 45 мин с 12,5 кг активированногоугля и 2,5 кг диатомной земли, Смесьотфильтровали и фильтрат отбросили. Угольный осадок промыли 60 л воды и водуотбросили. Осадок промыли 70 л 20%-ноговодного ацетона, этот ацетон отбросили,Затем осадо, южны промыли по 100 л90%-ного ацетона, Промывки соединили(215 л) и упарили до 18 л. рН этого концентрата довели до 10,0 50/О-ным воднымраствором едкого натра и трижды зкстраги.ровали по 20 л метиленхлорида. Метйленхлоридные экстракты соединили (60 л ) иупарили до маслянистого остатка (7,14 г )содержащего линкомицин и линкомицин С З 0в равных количествах (обав форме свободного основания). Это вещество растворилив 200 мл метнленхлорида. Раствор осве" или фильтрованием и выпарили до.суха в вакууме, Остаток растворили в100 мл 1 н. метанолького раствора хлористого водорода. Метанольный растворсмешали с 3,2 г эфира .при перемешиванииПолученные в осадке бесцветные сырыегидрохлориды линкомццина и линкомицина 40С были выделены фильтрованием и их сушилй . Выход 7,14 г, проба по 5 арсюс ЬМеО940 мкг/мг на агаре, доведенном до рН6,8 с помошью 0,1 М фосфатного буфера, Единичный объем ( 0,0 8 мл) раствора45содержащего определяемое вещество, помещали на пробный диск на 12,5 мл, который помещали на агаровую пластинку, зараженную определяемым микроорганизмом.Тонкослойная хроматография показывает 5 Оналичие гидрохлорида линкомицикв и гидрохлорида лннкомицина С приблизительнов равных количествах,7,0 г сырого гидрохлорида линкомицинаС растворили в 20 мл бутилового спирта5и 20 мл воды, рН установили 4,2 с помощью 1 н, НС 6, раствор распределилив противоточном агпарате на 1000 точекТонкослойная хроматография показала,что фракции в пробирках 135-190 содер 6 О 20 жат линкомицин С, Эти фракции соединили, раствор упарилн до водных фракций,высушили вытормаживанием и получили 2,44 г гидрохлорида линкомицина С,в 1,4 раза больше, чем гидрохлоридалинкомицина, 500 мл этого препаратарастворили в 2 мл воды, 1 мл этанолаи 100 мл ацетона. Раствор осветлилифильтрованием, Фильтрат смешали с эфиромдо появления кристаллов. Смеси дали стоять 1 ч при комнатной температуре, Кристаллический ( кубики) гидрохлорид линкомицина С был выделен из верхнего слоядекантацией. Эти кристаллы перекристалли 1зовали из смеси следующ;го состава, мл:1 воды, 1 метанола, 80 ацетона. и 20 эфира, Выход 250 мг кристаллического (кубики) гидрохлорида линкомицина С. Верх.ний слой выдержали при 5 С в течениео4 ч. Кристаллический (игольчатый) гидрохлорид линкомицина С, который высадился, отфильтровали и высушили, выход 150 мг,т, пл, 151-157 оС.Г. Другой способ получения линкомицина С,Гидрохлорид линкомицина (8,85 г,0,02 моля) растворили в 20 мл воды, охладили до 0 С и перемешивали при добавлении брома (3,52 г, 0,022 моля) покаплям в течение 1 мин. Добавили 25 мло зтантиола, смесь перемешивали при 25 С 2 ч. Прозрачную бесцветную двухфазную систему (этантиол сравнительно мало растворим в воде) охладили на ледяной бане и в течение 5 мин пропускали газообразный хлористый водород. Нижний водный слой окрасился в красный цвет. Затем реакционную смесь трижды экстрагироввли скеллисолвом В (до 100 мл) и добавили водныйраствор едкого натра для поднятия рН водной фазы 1 1. Шелочную фазу хорошо экстрагировали хлороформом, хлороформенный экстракт промыли насышекным раствором хлористого натрия в воде, высушиливыпарили в вакууме и получили 6,2 г бело го осадка.4,8 г этого осадка хроматографировали 800 г силикагеля, используя систему растворителей метанол-хлороформ (1,7), После первого погона в 800 млсобрали 80 фракций по 25 мл. Фракции 40-58 соединили, выпарили досуха, остаток перекристаллизовали из ацетона и получили 0,5 г вещества, идентичного диэтилди тиоацеталю из п. Б, 1, Фракции 65-75 соединили, выпарили досуха, растворили в смеси 5 мл метанола и 400 мл диэтилового эфира. Добавили газообразный хлористый водород и собрали вьшавший белый осадок. После перекристаллизации из водного ацетона получили гидрохлорид линкомицина С(0,5 г), идентичный соединению из и, В.Д, Другие влкнл,8-дидеоксиб-(транс- -1-метил-пропил- , -2-пнрролидинкврбокс амидо)-1-гно- Э -эрнтро- с. - Э -галвктооктопиранозит-фосфаты.ЬЗаменив этантиол в пп. Б, 1 и Г этого примера другими алкилмеркаптанами, например пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, децил, ундепил,додецил, тридецил, тетрадецил, центадецил, гексадецил, гептадецил, октадецил, нонадецин, и эйкозилмеркаптвнвми или. их изомерными формами ини циклоалкилмеркаптанами, -напри. мер циклопропил, циклобутил, циклопен тин, пикногексил, пиклогептил, циклооктил 2 метилциклопентил, 2,3- диметилпиклобутил, или 3-циклопентилпропинмеркаптанвми или аралкилмерквптвнвми, например бензол, фенетил:, З-фенилпропил, или 1-нафтилметилмеркаптанами, получают соот ветствующие алкил, циклоалкил или аралкил,8- дидеокси- (транс-Метил-пропил- Ц "2-пирролидинкврбоксвмидо)- -1.ггно- Э -эритро- д. - Я -галактооктопнранозиды, которые прн обработке по способу примера 1 превращат в соответствующие алкин, циклоалкил илн аралкил,8-дидеоксн-.б-(транс-метил- -пропил -2-пнрролидинкврбоксвмидо)-1.мгио -ернтро- с(.- Э -галактооктаноп рвнозид-фосфаты. Полученные таким спо собом соединения,в которых анкил предстввлярт собой пропил,бутил,пентил и гексил (полу-. ченные соответственно из пропил, бутил, пентил,или гексилмеркаптанов) являются особенно эффективными противобвктерицидными веществами с таким же спектром действия на живые организмы, квк линкомицин, и с равной илн с большей активностью. 40П р и м е р 5; Метил,8 дндеоксн-б-(трвнс-алкнл-бутил-пирролидннкврбоксамидо-тно- Э -эритро- а - 3 -гвлвктооктопирвнознд-фосфаты. А. Заменив гидрохлорид линкомицина ив; примера 1 метил-б,8-дидеокси-б-(транс- этил-бутил)- Ц -2-пирролидинкврбоксами; до)-1-гио- Э .эрнтро- А - Э -гвлвктоокто 50 пиранозидгндрохлоридом получают метил- -6,8-дидеоксн-б-(транс 1-атил-бутил- Ь-пирролидинкарбоксамидо)-1-тно- Э эритро- с(. - Э -галвктооктопирвнозид-фосфат.Заменив цис-эпнмер, получают метил 6,8-дидеокси-б-(цис-этил-бутил- Ь-2-пирролидинкарбоксамидо)-1-гио- Э эритро- д - Р -гвлактооктоиранозид 2-фосфвт сгем же противобактериальным спектром, 4 Ю Заменив 1-метиланалоги, получают метил,8 дидэокси 6-(цис- и трансметил 4-бутил- Ь -2-пнрролидинкврбоксамидо"-1 и но- Э -еритро- сЬ" Э -галвктооктопирвнозид-фосфаты,Применяемые в качестве исходных веществ пис- и транс-изомеры получаютследующим образом.Б. 4-Бутилидж-кврбобензоксн- Ъ. -пролии и его циклогексиламиновая соль53%-ную суспензию 19 г 1 гидридв натрия в минеральном масле нагревали со350 мл диметилсульфоксидв при 70-75 Сдо окончания реакции (около 30 мин).После охлаждения до 32 оС добавили16,2 г бутилтрифенилфосфорный бромид,полученную смесь перемешивали 1 ч дляобеспечения полноты реакции. Добавилираствор 26 г 4-кето-карбобензокси- -пролива в 100 мн диметилсульфоко,сида и полученную смесь нагрели до 70 Св течение 3 ч. Реакционную смесь охла- .дили до 25 С и добавили 1 л 2,5%-ноговодного раствора бикарбоната натрия. Этусмесь дважды промылй по 700 мл эфира,,после обратной экстрвкцни вытяжку отбросили, Бикврбонвтные растворы соединили и подкислили 4 н, соляной кислотой.Подкисленную смесь экстрагировали четырьмя порциями по 500 мл эфира. Соепиненные эфирные экстракты последовательно промыли 250 мл воды,1 тремя порпнями по 250 мл насыщенного растворабисульфата натрия и 250 мн воды,. сушили нвд безводным сульфатом натрия. Поо.ле отгонки растворителя в вакууме цолучили 24 г мвснянистогоостатка, представляющего собой 5-бутилиден 1-кврбобензокси- Ь -пронина,Остаток растворили в 31 мл ацетонитрй лв и обработвпи 18 мл дициклогексиламина и заморозили. Кристаллы собрали,промыли от вцетонитрила и высушили ввакууме. Получили 21 г (46.,8%) кристе 14 личйской соли циклогексилвмина с т. пн.-., щций иэ ацетонитрила получили внанитический образец с т. пл. 142-144 С,д.3 = - 4 ( с=0,99, СЯСЬ )Вычислено, %: С 71,86; Й 9 Л 5М 5,78.С Н К О,Найдено, %; С 71,69; Н 9,30; Н 5,И10 г Дициклогексиламнновой соли 45 -бутилнден 1-карбобензоксн- Ь -пронинавэболтвлн с эфиром и избытком 5% ноговодного раствора едкого кали до полюгорастворения вещества, Слои рвзделилк икаждый из них подвергли обратной промеэке. Водный щелочный слой соедииннк с обратной промывкой эфирного слоя и подкислили 5 н, соланой кислотой. Смесь повтор.но экстрагировали эфиром, эфирные экстракты соединили, сушили над сульфатом ,натрии, упарили в вакууме и получили6,3 г (93%) 4-бутилиден-карбобензокси -пронина в виде масла.В. 4 Бутил-карбобеизокси- Ь -пролинаМасло из и, Б гидрировали в 20 млметанола над 2,1 г 10%-ной платины накатализаторе Дауэкспод давлением 40фунт-кв. дюйм (2,8 кг/см ). Катализатор2отфнльтровали, фильтрат выпарили и получили 6,3 г, 4-бутил-карбобензокси пролина в виде масла, Этот продукт содержал около 2 ч. цис-бутил-карбобензокси -пролина на 1 ч. транс-бутил-кербобензокси- Ь -пролнна.Если нужно, то гидрирование 4-ипипеновой группы можно продлить до любойстадии, да 3 ке до окончательной,Заменив бутилтрифенилфосфонийбромндиз и. Б другими замененньзмн трифенилфосфонийбромидамп, где заместителями явля 3 отся метил, этил, пропил, пентил, гексил,гептил, октил, попил, ценил, уидецнл, додецил тридецил, тетрадецил, пентадецил, гексадецил, гептадепил, октадецнл, нонадецилн эйкозил н их изомерные формы нли цнклопропип, ищлобутип, пнкпопентил, циклсгексвл, пиелогептил, циклооктил, 2-пиклопропилэтил или З-ИЗЗхлопентилпропил, нлнбензи 33 ю фенет 33 п, Эфен 333 ИЗропил ю ИЗЗИ 1 Э нафцфтнлметил, получа 3 от соответствуюп 3 не 4- 35у алкилиден; 4-щГклоалкилиден или 4-аралфкплиден- карбобензокси-пролинь 3 илиСООГветствующие 4-злкил, 4-пнклоалкип-,нпп 4-ара 3 жил-карбобензоксн- Ь -проЗНЗны. Например, если вместо бутидтРИФенилфосфонпйбромида берут этнл ъ пропип-пзобутпп-, пентил- и 33 И гексилтрифенилфосфонийбромиды, то получают 4-эгилицен-,-1-карбобензокси- Ь -прол 33 н, 4-изОбутнпндб,И 1-карбобекзоксн- Ь - :Зро 33 нн, 4 нен45тиЗИЗден 1 ф карбобензоксн 4 про 33 ин нпн4-Гексилиден-Х-жзрбо 33 еизоксиф- Ь -33 ролин нлн пис- нли транс-этил-карбобен."кси пролин, 4-пропил-карбобензоксп- Ь -яишБН, 4-нзобутил ф 1-карбобжзокск- д -прол 33 н 4-пеЗРии-кар 33 Обнезоесн - Ь .про 33 ин 33 ле 4 Гекскл 1 карбобензоксн- Ь -пролин.Г. Мепщ-ам 3 що,8-дидеокси-гио) -эритро- А - В -галактооктопира- ЬЬнозид( с - МТ). ).Раствор 40 г свободного основания л 3 знкомпцина (патент США Мо 3086912) в20 мл хчп 3 рата гидразина (98-100%) нагревали с обратиьп 3 холодильником в те-69 24чение 21 ч, затем избыток гидразинаотогнали в вакууме в атмосфере азотана паровой бане. Остаток в виде пастообразной массы кристаллов охладили,добавили ацетонитрил и смесь перемешивали до суспендирования кристаллов. Последние отфильтровывали,промыли ацетонитрилом и водой.Получили после сушки в вакууме при комьнатной температуре 21 г (98%) болеекристаллического свободного основания,Перекристаллизацию вели из горячего диметилформамида с добавлением равногообьема диметилового эфира гликоля,Метил 6-амиио,8-дидеокси-тио- -,эритро- о- - 3 -галактооктопиранозидкое основание имеет т, пл. 225-228 (;.,ыоптическое вращение А = + 276 ( с =Э0,768, вода), рКа 7,45.Вычислено, %: С 42,7; Н 7,56;Й 5,63; б 12,66,СУК 9 Иоу ЬНайдено, %: С 42,6; Н 7,49;. Й 5,75;о 12,38,Если заменить линкомицин другими алкол- или циклоалкил- или аралкил,8 дидеокси-(транс-метил-пропил- Ь-пирролиди 33 карбоксамидо 3-1-тио-эрйтроъ(. - 1) галактооктопиранозидами, гдеалкил - этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, попил, децил, ундепил,додецилтридецил, тетрадецнл, пентадецил, гексадецил, гепта.децил, октадецил,нонадецил, или эйкозил или их изомеры,циклоалкил, - щ 3 клопропил, пнклобутил,циклопентил, цнклогексил, цикл огептил,циклооктил, 2-метилциклопентиг-димети 33 циклобутил, 2-метилциклобутил илиЗ-циклопентилпропил- аралкил - бензил,фенетил, 3- фенилпропил или 1-нафтилметил, то получают соответственно алкил,циклоалкил или аралкнл -б-амино,8-дидес к.сж-тио- Э -еритро- о(.- 3)-галактооктопнранозицы. Например, заменив линеоми.цнн этил-, пропил-, бутил-, пентил- ипигексил,8-дидеокиси-(транс-метил-прони-Ъ -2-пирролидинкарбоксамидо) 1гио- Э -эритро- о(. - Э -галактооктопиранозидами, получают этил-б-амийо,8-дидещси-тио -еритро- е 3, - ,3) -галактооктопиранознд, пропил-б-амино,8-дидеокси-био-.ц -эритро- Ж - Ъ -галактооктопнра-.нозид, бутил-б-амино,8-дидеокси-тио 3 -еритро- с( - Э -галактооктопираиоэид., пентил-б-амино,8-диде окси-тио3-ернтро- д - В -галзктокотопираноэидИли гексил-б-амино,8-дндеокси-тио - Р -еритро- с(. - Р -галактооктопираноЗБИ,Д. Свободное основание метил,8-диде окси-( 1-карбобензокси-бутил- Ь -2-пирролидинкарбоксамидо)-1-тио- Р-эритро- с(. " Р -галактооктопиранозида.К раствору 6,3 г 4-бутил-карбобензокси- Ь-пролина (масло из и, Б) в 175 млперегнанного ацетонитрила, охлажденногодо 0 С, добавили 346 мл триэтиламина,а затем 3,34 мл изобутилхлорформиата.о оСмесь перемешивали при 0 С (+ 3 С) втечение 15 мин, Добавили раствор 6,2 г:вободного освнования МТ, из п.В в 85 млводы и реакционную смесь перемешивалипри 0 С в течение 05 ч и при 25 оС вотечение 1 ч, Реакционную смесь фильтровали, сушили. Получили 4,57 г (37,7%)свободного основания метил,8-дидеокси6-( 1-карбобензокси-бутил- Ь в : пирролидинкарбоксамидо)-1-тио- Р -еритроР -галактооктопиранозида. Маточный раствор упарили в вакууме и выделили дополнительно 4,25 г (35,2%) продук,та. После перекристаллизации из ацетонитрида получили кристаллы свободной о основания метил,8-дидеокси-( 1 карбобензокси-бутил--2-пирролидинкарбоксамидо)-1 гио -эритро- с(, - Э -галактооктопиранозида с т, пл, 194-196 С, После повторной перекристаллизации из ацетлнитрила получили аналитический образецт. пл. 195,5-200 С, с(.3 = + 111 (с д0,98, МеОН),Вычислено, %: С 57,75; Н 7,46;М 5,13; 5 5,93.С 2 Н НО 5Найдено, %: С 57,58; Н 7,16; Я 5,50б 6,07.Е. Гидрохлорид метил,8-дидеокси-(4 бутил- Ь -2-пирролидинкарбоксамидо)"1-тио- Р -эритро- с(. - Р -галактооктопиранозида,Раствор 7,8 г свободного основания метил,8-дидеокси-( 1-карбобензокси- -бутил- Ь - 2-пирролидинкарбоксамидо- -гио -эритро- с - Э -галактэоктопирано зида из п. Д в 200 мл метанола взбалтывали над 2 г 10% палладия на угле при2 давлении 40 фунт/кв, дюйм (28 кг/см ) водорода в течение 17 ч. Катализатор отфильтровали, раствор упарили в вакууме, Остаток растворили в смеси 20 мл ацетона и 20 мл воды и подкислили 6 н, соляной кислотой, При разбавлении четырьмя объемами ацетона выпал осадок гидрохлорида метил,8-дидеокси-(4-бутил- Ь -2-пирролидинкарбоксамидо )-1-тио- эритро- с. - Р -галактооктэпиранэзида, который отфильтровали и высушили, Вес кристаллов, высушенных в вакууме, при 55 С, 4,7 г, т. пл, 188-194 С, После перекристаллизации из ацетона полученоаналитический образец с т.пл. 197-199 Си д 1) + 150 (вода, с . 0,89),Вычислено, %; С 48,80; Н 7,96;И 6 34; 5 7,24,С 1 й НЗ,1 М 0 б НСЕ,Найдено (с, поправкой на 5,54% воды),%С 4858; Н 8,19; Й 6,04; б 7,36.Ж. Гщрохлорид метил,8-дидеокси-( 1-метил-бутил "2-пирролидинкарбоксамидо)-1-био- Э,-эритро- с(. - Э .аа",лактооктопиранозида.Раствор 2,0 г гидрохлорида метил,8-(4-бутил-пирролидинкарбоксамидо)-1- гио -эритро- д. - Э -галактооктопиранозида из и, Е и 2,0 мл 37%-ного формалина в 150 мл метанола взбалтывалинад 500 мг 10% палладия на угле при дав 2ленииводорода 40 фунт/кв. дюйм (2,8 кг/см )в течение 3,5 ч, Катализатор отфильтровали, растворитель отогнали в вакууме и получили частично кристаллический гидрохлэрид метил,8-дидеэкси-б-( Ь-метил-бу- тил -2 пирролидинкарбоксамидо)-1 сгио 25- 1) -эритро- Ю - Э -галактэоктопиранэзида. Тонкослойная хроматографияна силикагеле с помошью смеси этилацетата, ацетона,воды (8;4;1) для элюирования и раствораКМъ 0; для обнаружения показала, что30этот продукт состоит главным образом изцис- и транс- эпимеров гидрохлорида метил,8-дидеокси-( 1-метил-бутил- - 2-пирролицинкарбоксамидо)-1 тио мэрит .ро- о(. - 3 -галактооктопиранозида в соотИношении 3: 2.3. Разделение цис- и транс- изомеровхроматографией,Гидрэхлэрид метил, 8-дидеокси-( 1-метил-бутил -2-пирролидинкарбокс40амидо)-1-тиэ) -эритро- а.- Э -галактооктопиранозида раствэрили в смеси метанола и метиленхлорида ( 1; 1 ) и добавили 1,5 млтриэтиламина, К этому раствору добавили7 г силикагеля и выпарили растворительв вакууме, при этом антибиотик сорбиро-вался на силикагеле, в верхн 1 эю частьхроматографической, колонки насыпали 200 гсиликагеля со смесью,растворителей, сосЭъ тоящей мз этилацетата, ацетона и воды( 8:4:1). Колонку элюировали; таким жерастворителем, Собирали порции по 20 мЛ.Тонкэслойная хроматография каждой порции,показала, что 310 мг фракций 31-38состояли в основном из чистого траноэпимера, 32 мг фракций 49-74 состоялив основном из чистого цис-епимера и фрайции 39-48 состояли из смеси эпимеров,Последние фракции можно было разделить60 повторной хроматографией. Каждый эпимер,растворили в нескольких каплях разбавленной соляной кислоты, а гидрохлорид высаживали добавлением ацетона, Таким об,разом получили 50 мг гидрохлорида метил,8 дидеокси-(транс-метил 4-бубтил д 2 пирролидинкарбоксамидо) -1 тио- Э -эритро- д.- Э -гвлактооктопиранозида с т. пл. 135-137 С и около150 мг гидрохлорида метил 6,8-дидеокси 6-(цис-метил-бутил- Ь 2 пирролидинкарбоксамидо)-1-гио- Э -эритро- ю(- Эгалактооктопиранозида, размягчающегосяпри 105 С с дальнейшим плавлением при175-185 С; т. пл. транс- эпимера послеперекристаллизации из такого же растворителя 139141 С,Вычислено, %; С 49,93; Н 8,16;Х 6,13; 5 7,02,С,Н й 06 5 НСЯ.Найдено (с поправкой на 4,07% воды),%;1 щС 48 е 81 Н 81541 Мбф 49 ) 667 еАналогично после,перекристаллизации,цис- эпимера получили продукт, размягчающийся при 108 С, далее, плавящийся прио189 С (сольватирован). 25Найдено (с поправкой на 4,95% воды),%:С 50,27; Н 9,0; М 6,051 б 6,65,И, Гидрохлорид метил,8-дидеокси-( 1 этил-бутил- ь -2-пирролидинкарбоксамидо)-1-био- Э -эритро- Й - Э -галактооктопиранозида.Смесь 2,0 г гидрохлорида метил,8-дидеокси-(4-бутил)- д -2-пирролидинкарбоксамидо)-1 тио- Э -эритро- с(, - Э-галактооктопиранозида из части Е, 61,5 мл ацетальдегида, 150 мг 10% палладия на угле в 150 мл метанола взбалтывали в течение 5,5 ч под давлениемводорода 2,45 кг/см:, Катализатор,отфильтровали в остатке содержались в основном цис- и транс- эпимеры гидрохлоридаметил,8- дидеокси+6-(1-этил-бутил-2 пирролидинкарбоксамидо)-1-тио- Д эрит- лро Д -галактооктопиранозида,45К, Разделение эпимеров,Как описано в и. 3 смесь эпимеров изи. И (2 г) хроматографировали на 200 гсиликагеля и использовали для элюирования смесь этилацетата, ацетона и водыф(8:4;1). фракции 33-42 представляли собойчистый транс-епимер, их соединили, фракции 49-64, представшие собой чистыйцис-епимер, также соединили, фракции,43-48, представлявшие собой смесь эпимеров, очищали повторной хроматографией.Каждый эпимер растворили в несколькихкаплях разбавленной соляной кислоты, кристаллический гндрохлорид осадили разбавлением большим количеством эфира. 60 415 мг фракции сырого транс- эпимера дали 940 мг (15,4%) кристаллического гидрохлорида,8-дидеокси-(транс-этил-бутил- ), -2-пирролидинкарбоксамидо)-1-тио- Э -эритро- с(, - Э -галактооктопиранозида с т, пл, 144-151 С, После перекристаллизации из разбавленногоацетона т. пл, 148-151 С.645 мг фракции сырого цис- эпимерадали 30 мг (14,1%) кристаллическогогидрохлорида метил,8-дидеокси-(цис-етил.5 утил- Б -2-пирролидинкарбоксамидо) -1-тио- Э -эритро- А - Эгалактооктопиранозида с т, пл, 135-139 С,После перекристаллизации из разбавленного ацетона т. пл, 134-138 С.Транс- эпимерный изомер обладает активностью в 1-1,2 раза большей, чем линкомицин по пробе 5. Го 1 еа, в 2 - 4 раза большей чем линкомицин против грамположительных микроорганизмов и в 8 разбольшей против грам- отрицательных микроорганизмов, По мьпдам против Я.аогеибтранс- эпимер в 2 раза более активен,чем линкомицин. Активность цис- эпимерасоставляет 1/2 активности транс-эпимьраРазделение цис- и транс- изомеров неявляется необходимой стадией, поскольку2-фосфаты смешанных эпимеров применимыкак таковые, Однако желательно, чтобы содержание транс-изомера былобольшим. Можно легко получать смешанные эпимерные продукты, содержащиесоотношения транс- и цис- эпимеров 3:15:1П р и м е р 6, Метил,8-дидеокси-(транс-метил-пропил- Ь -2-пирроидинкарбоксамидо)-1 тио-грео - с - Э -галактооктопиранозид-фосфат)- пилинкомицин-фосфат,Заменив линкомицин из примера 1 эпиинкомицином, получают эпилинкомицинфосфат. Зпилинкомицин получили следующим образом.А. 3,4-0-Изопропилиденлинкомицин,Раствор 9,8 г линкомицина в 150 млацетона добавили к раствору 9,8 г и-толуолсульфокислоты- моногидрата в 100 млацетона при хорошем перемешивании и бездействия влаги. Смесь перемешивали прикомнатной температуре в течение 1 ч, после чего добавляли 100 мл безводногоэфира и перемешивали на ледяной банееще 0,5 ч, Смесь фильтровали, осадок сушили в вакууме при 50 С, выход 13,35 го( 85 4) 3,4-0-изопропилиденлинкомицнн-и толуолсульфоната, Еще 1,15 г ( 7, И)можно выделить из маточной жидкостидобавлением Ъ 50 мл безводного эфира иохлаждением жидкости в течение ч, ГЬлученные 14,5 г суспепдпровалп в 200 млэфира и взбалтьпяли с 125 мл 5%-ногораствора бикарбоната калия. Водный слойэкстрагировали двумя порциями эфира по100 мл, Эфирные экстракты промывали50 мл раствора поваренной соли и фильтровали через безводный сульфат натрия,Эфир отгоняли в вакууме, Осталось 7,9 г( 73,1%) 3,4-0-изопропилиденлинкомицина, 0который растворили в 25 мл этилацетатаи выпарили до 10-15 мл. Концентрат выдерживали при комнатной температуренесколько часов, затем на ночь замораживали. Кристаллы отфильтровывали от ра- цствора и промывали холодным этилацета-.том. Выход 455 г (42,2%) 3,4-0-изопропилиденлинкомицина с т, пл. 126128 оС ит 2, с.1 -101-102 о (с =1, метиленхлорид). р)Б, 7-Дегидро,4-0-изопропилиденлинкомицин,К раствору 6 г (0,0135 моля) изопропилиденлинкомицина в 75 мл пиридика добавили 12 г (избыток) окиси хома, при. 25этом раствор нагрелся до 20 С. Через1 ч смесь добавили к раствору, содержащему 250 мл этилового эфира и 250 млэтилацетата. Затем смесь фильтровали ивыпаривали до сиропа, получали 8,4 г. ЭОЭтот сироп распределили противотоком вколонке на 500 точек, применяя системувода- этилацетат - этанол - циклогексан(1:1:1;1 ), 7-Дегидро,4-0-изопропилиденлинкомицин выделили в пиковой фрак- В 5ции из пробирок 330-380, рК = 2,45.Вычислено, %: С 56,72; Н 8,16;М 6,30; б 6,84.СЗН 3; 8206540Найцено, %: С 56,37; Н 7,64;г 6,51; 5 6,84,В, 3, 4-.0-Изопропилиденэпилинкомицин,К 1,6 г чистого по Крейгу 7-дегидро,4-0-изопропилиденлинкомицина4 в 75 мл метанола добавили 400 мг боргидрида натрия, Через 1,5 ч этот раствор выпарили досуха на роторном испарителе. Остаток добавили к 25 мл воды и трижды экстрагировали по 25 мл метиленхлорида, Экстракты промыли 15 мл воды, высушили над хлористым магнием и выпарили досуха. Остаток ( 14 г) подвергли обработкеф на цротивоточной распределительной установке на 500 точек, используя ЬЬ систему вода этилацетат- этаиол- циклогексан (1:1;1:1;1). Одиночный пик, соусласующийся с теоретическим, наблюдался при К = 1,05, Вещество из пробирок 240- 280 было выделено в виде сиропа,е 0 Вычислено, %; С 56,17;8,58;Я 6,27; б 7,18.гНэВг аНайдено, %; С 56,24; Н 8,54;6,13; Я 7,01.Тонкослойная хроматография. показала,что вещество состоит из двух соединений -3,4,-0-изопропилиденлинкомицпна и 3,4 О-изопропилиленэпилинкомпцина.Г. Эпилинколпщин.Сироп из и, В хранили при комнатнойтемпературе 5 ч в растворе, содержащем60 мл 0,25 н, соляной кислоты и 40 млэтилового спирта. Затем его выдержалиопри 0 С 4 дня. После нейтрализации бикарбонатом натрия его выпарили до 25 мли экстрагировали хлороформом, Экстрактпромыли небольшим количеством воды и сушили над сульфатом магния, затем выпарили до остатка. Тонкослойной хроматографией показано наличие двух веществ,активных против Ь.:о.ес, Остаток хроматографировали на колонке 3/4 х 14 дюймов, заполненной флорисилом (синтетический силикат, описанный в патенте США2393625), которую градиентно промывали растворителем, непрерывно менявшимся от 100% скеллисолва В до 100%.ацетона. Общий объем ацетона. Общийобъем жидкости .5000 мл. Таким образомразделили оба вещества.Фракция 1: пробирки 53-65 (погоны по40 мл), эпилинкомицин,УПроба 450 мкг/мл, проба на линкомиВычислено, %: С 50,92; Н 8,55;М 6,60; 5 7,56.С, , М,О, бНайдено, %: С 50,19; п 7,91; М 6,05;5 6,42.Фракция 2; пробирки 73-104, линкомицин,Проба 950 мкг/мл.Заменив линкомицин соответствующимианалогами линкомицина, получили собтветФГвующие аналоги эпилинкомицинфе;фатов,Поэтому все описанные соединещя имеютих противоположности по конфигурации,т, е. конфигурацию, вытекающую из 7-эпиформы. Все вьидеонисанные соединенияимеют их противоположности в 7-()-хлордеокси; 7 Лй ) -хлор 7"деокси-,7-( б )-бром- . -деокси-, 7-( б )-бром"деокси-аналогахП р и м е р 7, Линкомицин-4 юсфап.кальция,Раствор 5,0 г линкомицин-фосфатав 40 мл воды смешали с раствором, содержащим 1,47 г хлористсго кальция и5 мл концентрированной гидроокиси аммоЯводород жвщие столько ж и указанные для держащий 5-6 уг влкил и атомов углерода, квк пиклоапкил, соатомов,и од Подпнс филиал А ППП Патент" го, Проектная,нии. Образовался объемистый белый осадок,Су(спензию разбавили 40 мл 95%-ногоэтанода и перекрещивали 0,5 ч. Продуктвьщедили фильтрованием, промыли 20 млсмеси этанола и воды (1:1). После сушкиобразца в токе. азота получющ 4,4 г линкомицин 2-фосфата кальция.Вычислено,Ъ С. 41,21; Н 6,341ЬОД 4 ф Н(Э 10 ф 27 ф Са 764 ф 1 Ч 6111Р 5,90,СаС, Н МОР,Найдено (с поправкой на воду), %:С 40,3; Н 6,25; Й 5,78; Р 6,08;Са 7,32,Кальциевая соль нерастворима в водено растворима в кислых растворах, можетприменяться в водных суспензиях и дляприема внутрь, Таким же способом можно получить другие водонерастворимые соли, в том числе стронпиевые, магниевыеи алюминиевые,Линцомицин 2-фосфат может применятьсядля тех же целей и в тех же дозах, чтои линкомицин. ксигруппа, хлор, бром; могут иметь одинаковые или ачения, влкил, не более, чем ными атомами, пиклоалкил, 3-8 атомов углерода, арапй ие более 12 атомов уг 1 НИИПЦ Ьиав 751/5351 отдичаюшнйся тем, что сое динение общей формулы, Я имеют указанные энануль иди целое число от одн го до четырех включительно,1й - водород, метил, этид, изопропилтреъ- бугид, 3,4- тетрвметиден, фенил,метокси-, этокси-, пропокси-, изопропокси .цианогруппа, метилкврбоню-, .этоксикар 20бонил-, рксикарбонид-, карбоксигрупца,триметилсилид, триэтялсилил, триметилсалилметилен, триметилстаниил, триэтидствниил, остаток .мышьяковистой или фосфористой кислоты, триметилгерманий, триэтид(германий, ацетамино-, триметиламино,ЗЬнитро-, н- бутокси-, п- пентокси , феноксиацетокси, оксн-, метидтио-, этилтно-, изо. пропидтио; меркапто-, ацетилтно-, циантио-,диметилтио, сульфамидо-, метилокситио,сульфо-, азо-метилсульфонилгруппа, метилселенил, атомы галогеиа, остаток йодистойкислоты, сернистой кислоты,Х - хлор, бром или тритилоксирадикалобщей формулы .ъи х,С-О е Х , Х , Хводород, атом галогена, метоксигруппа,подвергают фосфорилироввнию путем обработка известным фосфоридирующим агентом, например хлорокисъ 1 о фосфора или трифенилфосфином, . присутствии третичного амина, например пиридина, с последующим кислотным гидролизом водой получен ного продукта и вьщелением целевых продуть тов известным способом в свободном виде или в виде солей.2. Способ по и. 1 о т л и " а ю щ и й -с я тем, что фосфоридирование проводятсреде органического растворителя при пониженной температуре.У ом 1,2. ритпере- форму также полу общей форХ - водород, метил, этил, изопропил,трет бутил,4-тетралетилен, фенил, метокси-, этокси- , пропэкси-, изопропокси-,цианогруппа, метилкарбонил-, этоксикарбонил-, оксикарбонил-, карбоксигруппа, триметилсилил, триэтилсилил, триметилсилилме.тилен, триметилстаннил, триэтилстаннил, остаток мышъяковистой или фосфористой кислоты, триметилгерманий, триэтилгерманий,ацетамино-, триметиламино-, нитро-, н-бутокси-, н- пентокси-, фенокси-, ацетокси-окси-, метилтио-, этилтио-, изопропилтиомеркапто-, ацетилтио-, циантио-, диметилтио-, сульфамидо, метилокситио-,сульфо-,азо-, метилсульфонилгруппа, метилселенил,атомы галогена, остаток йодистой кислотМ,сернистой кислоты,Х - хлор, бром или тритилоксирадикалобщей формулы где Х, Х, Х - водород, атом глогена, метоксйгрупйа,подвергают фосфорилированию путемработки известным фосфорилирующим агенапример хлорокисью фосфора или трифефосфином, в присутствии третичного амнапример пиридина. Полученный при этопродукт подвергают кислотному гидроливодой.Продукты выделяют известным спосоИспользуемый в качестве исходногопродукта линкомицин 1 метил,8- дидеокси- (транс- метил-пролилпирролидинкарбоксамидо) -1-тио -эро- А- Р -галактооктопираиозид 1 и егизомеры получают согласно патенту США% 3086912, Эти соединения можновести из изомерной формы эритро втрео и наоборот,Исходный лиикомициц можночить ацилированием соединениямулыг ния реакционной смеси. Эти соединения лложно перевести и 7- галоид-дсзоксиэнэлэги путем обработки первых тиэнилхлоридомили реактивом Ридона при нагревании. 11 ри 5 этом замена оксигруппы атомом хлора приводит к изменению конфигурации. Использование 7-зритроизолер-оксисоединенияприводит к получению треэизомера 7-хлорсоединения. Реактив Ридэна получают при О соединением галоида к трифенилфосфинуили трифенилфэсфиту.Поскольку полученный биосинтезом линкомицин, а также получение из неГо аминосахара представляют собой метил- или 1 этилтиогликозиды, иногда требуется превратить их в высшие или низшие гликозиды,Это можно осуществить реакцией соответст-.вующегэ соединения с меркаптаном фор;мулы Я ЬН, где Я- алкильная группа небф более чем с 20 углеродныли атомами, ноотличная от 3, и получают дитиоацетали.Полученные соединения можно подвергатьгидрогенолизу с последующим ацилированием,При выполнении предлагаемого способ ф линкомицин или аго аналоги (лучше в виде гидрохлорида) сначала конденсируют сароматическим альдегидом при слабом нагревании с получением 4,3-0-арилиденлинмицина, Если применяют гидрохлорид лин-мицина, то не нужен кислотный каталитор, так как сам гидрохлорид обеспечиет достаточный катализ реакции. Реакцию смещают в нужнюю сторону путем азеотропоного удаления воды органическим растворителем, например бензолом, толуолом,хлороформом, дихлорэтаном. Необходимостьв азеотропном растворителе отпадает, еслиможно удалять воду другим способом, например с помощью вакуума или выпариванием инертным газом или просто сэвместительной отгонкой с растворителем с болеевысокой температурой кипения, чем у воды.Азеотропный растворитель применяется всмеси с высокополярным растворителем,например М, М -диметилформамидом, М, Йдиметилацетамидом, диметилсульфоксидом,Я -метилпирроллидоном, чтобы увеличитьрастворимость гидрохлорида линкомицинаи получить гомогенный раствор.ующим агентомимеииемым., для ацикщпю обычно ведутстворителя притемпературы кипесоответствуюпщм ацилир известным способом, цр лирования сахаров, Реа в среде органического р температуре от 10 С дооо вести при С. Оптималь оотнэщения ворителей и вэрителя,наазеотропа с пения самоНеполярный агу, мояно менять Реакцию конденсации можн70-180, лучше при 90-110.ная температура зависит от сполярного и неполярного растМ от свойства неполярного растпример температуры кипенияводой, а также температуры ки.растворитель, содержащий влВО непрерывно отводить перегонкойцина, так как в этом случае не применяется вода,Бэльшинствэ эснэваний арилиденлинкомицина можно эчистить растворением соединения в ацетоне, разбавлением раствораэфиром, добавлением гексана дэ помутнения для инициирования самэпроизвольнойкристалли.зации.Тритиловые эфиры 3,4-0-арилиденлинкомицина получают путем взаимодействия избытка тритилгалэида или замешенного тригилгалоида с 3,4- арилиденлинкомицииомв присутствии сильнэгэ оснэвания и растворителя. Мэлярнэе соэтнэшение тритилгапоида или замешенного тритилгалоида к3,4-арилиденлинкэмицину сэставляе: 4; 1.Можно применять и более высэкэе соотношение, вплоть дэ 10:1, но при бэльщом избытке тритилирующегэ реагента эбразуютсябольшие кэличества ддтритилчрэваниых побочных продуктов, Меньшие соэтнэшения(ниже 1:1) приводят к неиэлнэй реакции,его периодически свежим сухим растворителем. Воздух можно также удалять конденсацией и отделением ловушкой для воды или осущителем с возвратом сухого растворителя в реактор.Время реакции конденсации гидрохлорида линкэмицияа с ароматическим альдегидом меняется в зависимости от сэстава растворителя и эффективности удаления воды. При использовании азеэтропообразую- О щих растворителей за ходом реакции можно проследить измерением количества выделяющейся воды. Можно также периэдически отбирать пробу из реактора и хроматографировать ее, В случае комбинации бен- И зола и диметилформамида время реакции может составлять 1-16 ч, оптимальнэе время 2-3 ч. Если применяют безводный гидрохлорид линкомицина, то время реакции сокращается наполовину, поскольку выделяет ся только половина воды пэ сравнению с моногидратэм гидрохлорида линколФицина, Согласно изобретению можно применять различные ароматические альдегиды, например фурфурэл, 5-метилфурфурол, бензаль дегид, салициловый альдегид, м- толуолальдегид, о- тэлуолальдегид, и- толуолальдегид, о- хлорбензальдегид, м- хлэрбензальдегид, м- бромбензальдегид, и- бромбензальдегид, и- метоксибензальдегид, м-метоксибензаль дегид, о-метокснбензальдегид, 3,4-диметоксибензальдегид (альдегид вератровой кис лоты), салициловый альдегид, и-оксибензальдегид, 3,4,5-гриметэксибензальдегид, ииперонал, э-нитробензальдегид, и-хлорбенз альдегид, фталевый альдегид, м-нитрэбензальдегид, п-нитрэбензальдегид,-нафталь дегид, и-брэмбензальдегид, о-брэмбензальдегид, 2,4-дихлэрбензальдегид, ванилин, метальдегид, терефталевый альдегид, кэрич-,фО ный альдегиц.Г 1 ригодны те альдегиды, у которых карбонильная группа отделена эт ароматической части одной или более двэйными связями, образующими сопряженную структуру 4 б формулы где Е и и имеют значения, обозначенные в формуле 1.Г 1 элученные указанным способом ацетали сначала выделяют в вице кристаллических гидрэхлэридэв, В случае стойких ацета лей, например 3,4- бензиллинкэмицина или 3,4- хлорбензилидеилинкэмицииа, перекристаллизацию мэжнэ вести в горячем метилцеллозэльве, диме тилфэрмамиде, хлороформе и т, н, Менеестойкие нетали, например 60 3,4-п анизилиденлинкомицин, 3,4-циналилидеилинкомицин и 3,4-толуилиденлинкомицин, дэ выделения нужно перевести в свободное эснэвание.Гидрохлориды арилиденлинкомицина можно превратить в свободное основание путем смешения соли со щелочью, например с вэдным раствором едкого натра, гидро- окисью четвертичного аммэниевого основания, гидроокисью аммония или сильным аминовым основанием. Можно использовать основные ионообменные смолы, Нерастворимое арилиденлинкомициновое основание отделяют фильтрэванием или экстрагируют водонераствэримыми растворителями, например хлэрэформом, метилхлэридом, дихлорэтаном, эфиром. Гидрэхлорид арилиденлинкомицина мэжно перевести в свэбодное основание, сначала нейтрализовав соль основанием,. затем обработав егэ хлэрэфэрлэм, циметилформамидэм, диметилацетамидом, ирэииленгликолем и т. и, В качестве основания мэжно применять алкоголят,амин, аммиак или твердое неорганичесоке основание, например едкий натр, едкое кали, Полученный раствор арилидэнлинкэлпщинэвого основамя можно выделить из смешиваю шихся с водой растворителей разбавлэнием водой дс слабой кристаллизации ацеталей. Растворы арилнденлинкомицина в несмешивающихся с водой растворителях можно выделить разбавленном непэлярным растворителем, например гексаном, изэмерным гексанэм, или иростэ выпариванием растворителя. Последний сиэсэб получения сво-одного оснэвания из гидрохлорлдов арилиденлинкомипииа пригоден для выделения очень лабильных ацеталей линкомиа также к образованию неидентифицируемых побочных продуктов.Лучшим тритилгалоидом является тритилхлорид, но можно применять и другиетритилгалоиды и замешенные тритилгалоиды формулы ПЛучшим растворителем для тритилирования является ацетон; Другие применяемыеРрастворители - 2-бутанон, З-пентанон, 3 аентанон, эФир, бензол,й,й-диметилформамид, 19К, И -диметилацетамид, диметилсульфоксид,метилацетат, этилацетат, пиридин и т. п.Однако применение высококипящих растворителей приводит к образованию дополнительных побочных продуктов, а применение рнизкокипящих растворителей не позволяетзавершить реакцию.Наилучшим основанием является триэтиламин. Можно применять и другие сильноосновные триалкиламины, например триэтилендиамин, К -алкилморфолиновые производ.ные, трипропиламин, трибутиламин.Третичные основания с рКа больше 8позволяют быстрее. закончить реакцию, таккак обеспечивают лучшую, растворимость р 5арилиденлинкомицина. Более слабые основания., например пиридин, требуют большеговремени для реакции, поскольку арилиденликомиции в присутствии такого основания менее растворим, чем гидрохлорид, 30Время реакции определяется несколькимифакторами, например температурой кипениярастворителя, силой основания, концентрацией и отношением тритилгалоида к 3,4-ари;,лйденлинкомицину и полярностью растворите- Фля,Например,соотношениетритилхлорида,анизилиденлинкомицина и триэтиламина и ацетона 7 2: 15: 16: 34 является лучшим времяреакции при температуре кипения с обратнымхолодильником составляет 24 ч. Время реакции можно увеличить до 48 ч, хотя приэтом получают большие количества 2,7-диО-гтритил,4- 0 - анизилиденлинкомицина.При времени реакции менее 6 ч получаютбольшие количества непрореагировавшего 5анизилиденлинкомицина. При других молярных соотношениях время реакции может составить 1-100 ч,По окончании реакции тритилированияполученный 7-0-тритил,4-0-арилиденлин- ф 0комиции осаждают добавлением неполяулного растворителя, например гексана, гептана, пентана, циклогексана, бензола. Сырой продукт повторно перекристаллизовывают из ацетонитрила и, наконец, из горя- фбчей смеси ацетон-вода (1:1 ) и получаютчистый 7-0-тритил,4-0-арилиденлинкомицин, Для перекристаллизации можно такжеприменять 2-бутанон, З-пентанон, н -пропанол, 2-пропанол, бутилацетат, бензол, 60 8бутиронитрил, смеси М, К -диметилформамидвода, Я, М -диметилацетамид-вода, метанол-вода, этанол-вода и т. п,7-0-Тритил,4-0-арилиденлинкомицинможно фосфорилировать известным способом,например реакцией с фосфорилируюшим реагентом в присутствии связываюшего кислоту вещества, например третичного амина, с получением 70-тритил,4- 0-арилиденлинкомицин-фосфата. К фосфорилирующим реагентам относятся хлорокись фосфора (РОС 1 ), дианилинфосфорхлорид, анилинфосфорхлорид ди-трет-бутилфосфорид, диморфолинфосфорбромид и цианэтилфосфатплюс дициклогексилкарбодиимид. К третичным аминам относятся пиридин, хинолин иизохинолин, триметиламин, триэтиламин,триизопропиламин, Й, К диметиланилин, диэтиланилин, К -этилпиперидин, й -метилпиперидин и т. п. Лучшим основанием является пиридин,фосфорилирование ведут путем обработ-.ки раствора 7-0-тритил,4-0-арилиденлинкомицина или 3,4,-0- арилиден-галодеоксилинкомицина или их аналогов в третичном амине, например пиридине, фосфоралирующим агентом, например хлорокисьюфосфора, с охлаждением реакционной смесидля предотвращения побочных реакций, Лучшевести реакцию в пиридине при температуреоот -38 до -42 С. Допустимы температурыот -50 до +10 оС, но иногда при болеевысоких температурах образуется значительное количество побочных продуктов,Полученный 2-фосфордихлоридат гидролизуюводой до соответствующего фосфорного эфира при температуре от 40 до +10 оС.Предпочтительны низкие температуры,при которых образование побочных продуктов минимально. Так, по реакции 7-0- тритил,4-0- анизилиденлинкомицина в присутствии третичного амина не менее, чемс 1 молемфосфорилирующего агента получают7-0-тритил,4-0-анизилиденлинкомицин-2- фосфат,Линкомицинфосфат можно получитьиз 7-0-тритил,4- арилиденлинкомицин 2- фосфата селективным удалением тритиль.ной и арилиденовой групп; 7-галоид деоксилинкомицин-фосфат из 3,4-арилиден 7-галоид-деоксилинкомицин- фосфата селективным удалением а.илиденовойгруппы. Удаление этих защитных групп осушествляется гидролизом в слабой кислоте,Например, 7-0-тритил,4- 0-анизилиденлинкомицин-фосфат и 3,4- 0- анизилиден 7- хлор-деоксилинкомицин при нагревании9с 80%-ной уксусной кислотой при 100 Св течение 0,5-1 ч дают соответственно линкомицин-фосфат и 8- хлор- деоксилинкомицин-фосфат. Можно применять такжемуравьиную, пропионовую, разбавленную со- Ьляную и разбавленную серную кислоты,Нужный 2- фосфат можно выделить изреакционной смеси различными способами илиспециальным:,способом, показанном на примере пинкомицин- фосфата. Этот способ 10состоит в ионообменной хроматографии насмоле четвертичного аммониевого основания Дауэкс 1-Х 2 со ступенчатым элюированием, при этом пинкомицинфосфатотделяется от побочных продуктов, Линкомицин- фосфатный слой собирают и сушатвымораживанием. Лцетат аммония удаляютпри нагревании, а органические фосфатыуделяют насыщением водного раствора линкомицин- фосфата газообразным аммиа- Мком для осаждения диаммонийфэсфата. Линкомицин" 2-фосфат получают вымораживаниемуказанных водных растворов с получениемсмешанных аммонийных. солей, Попуаммониевый линкэмицин-фэсфат получают нагрева- Внием указанной соли при 100 оС в течепие,3 ч, Пвиттериоцную форму пипкэмицинфосфата, не содержащую аммиака, получаютпри нагревании аммониевой соли до 118120 С в течение 8-24 ч в высоком вакууме с последующей кристаллизацией пвиттерионной формы,Другим способом является удаление неорганических фосфатов дэ кислотного гцд 85 ролиза. Этот способ имеет то преимушество, что линкомицин- фосфат иногда можно кристаллизовать прямо без прохождения через аммониевую соль.4 ОНовые соединения согласно изобретению зфедстйвпяют сОбОй аминокислоты, которые могут существовать в протонированнэм ипи иепротонированном виде в зависимости от рН среды. При малых рН соединения существуют в виде солей, при более высоких рН в ивиттерионнэм виде, а еще при более высокик рй в виде озпей металлов. Последиие могут бытьнейтральнымисолями 12 экв осиоваийя иа 1 моль линкомицин-фосфата),ЬО кислыми или моиосолями (1 экв основания иа 1 моль лиикомицин-фосфата), полу- солью (0,5 экв основания на 1 моль пинкомвции-фэсФата), При добавлении соответствующих количеств кислот или эсйэваний ь 5 можно выделить любую из этих форм,В приводимых примерах части и проценты двии весовые, если иначе ие указано, 6010П р и м е р 1, Липкомицин-фосфат.А. Гидрохлорцд 3,4,0-анизилиденлинкомицина и основание 3,4,-0-анизилиденлинкомиципа,Раствор 47 г (0,1 моля) полугидратагидрохпорида линкомицина растворили в смеси 125 мл диметилформамида, 75 мл анизальдегида и 160 мл бензола, нагревалиона бане при 140 С. Бензол-водный азеотропоотгоняли при 105-110 С и после отборакаждого дистиплята по 50 мл добавилиеще 50 мл сухого бензола. Кристаллизация гидрохлорица 3,4-0-анизипиденпинкомицина началась после отбора 100 мл дистиллята, после отбора еше 250 мп дистиллята реакционной кэпбе дали охладиться дэ комнатной те;,1 пературы. Светло-коричневую реакционную смесь эбрабэтапи200 мп эфира, осадок этделцпц ц прэмьииэфиром. После сушки осадка в вакууме при40 С выход сырогэ белого гидрэхлорида3,4 -0-анизилцденлинкомцццна составил43,0 г, 1 асть этого гидрэхпорида превратили в свободное основаниеследующим.способом: суспензию 21 г гцдрохлэрцда3,4-0-анизипиденлинкэмццина в 150 мпводы взбалтывали с 15 мп 2 н, едкогонатра в целительной вэронке, Сырой продукт основания 3,5-0- анцзипиденпинкомицина экстрагцровалц четырьмя порциями по 400 мл эфира, Эфирные вытяжкисэединили, сушили над сульфатом натрияи упарили до 100 мп. Посла выдержки вхолодильникев течение ночи, отфипьтро .вали выпавшие белые цгпээбразные кристаллы 3,4-0-анизипцденпипкэмццинэвогооснования и промыли их смесью эфира игексана (1;1), Кристаллы сушили в вакууме, выход 13,2 г. Дополнительно 4.,7 госнования 3,4 -0-анцзипиденпинкэмицинаполучили добавлением гексана к маточномураствору, получили общий выход 17,9 г,Вычислено%: С 59,.53 Н 7,69И 5,34 Ь 6,10; экв, вес,524,63; вода О.2 Ь 40 т 7СНМ 05Найдено, %; С 59,77; Н 7,66; М534о 6,17; экв. вес 524; вода О.1 А 3=+ 96 (1,08%, Ион),, Р 5% ЕВОН) 226,5 нм, (б 14,775).Б, 7-0-тритил,4-0-анизипиденлинкомидииРаствор 8 г (152 моля) 3,4-0-анизипиденлинкомицина, полученного по и. Л,мл ац тона обработали 16 г триэтипамина ц 20 г (72 ммопя) трцтилхлорида в указанном порядке. Реакционную колбу снабдили холодильником и хпоркапьциеффвэй трубкой, смесь ки-пятили с обратнымхолодильником 24 ч. Тритилхлорид раствэ11рнлся прн кнпячении с обратным холодильником, гидрохлорид трнэтнламина медленнокристаллизовался, посдеднйй удалили изреакционной смеси фильтрованием,.оставшийся коричневый фильтрат разбавили сначала 100 мл циклогехсана, а затем.350 млгексана до стойкой мутности, Смесь вьтдерживвли в течение ночи при комнатной температуре. Полученные желтые кристаллысырого 7-0-тритил,4-0-аннзиднденлвнкомнцена отделили фндьтрованирм промыли гексаном и сушили на воздухе,Выход 9,4 г.9,3 г этого вещества растворили в 100 мдацетонитрата, раствор частично обесцвети,ли 1 г актнвированного угля, После упари квання раствора отгонкой до 30 мл началасьсамопроизвольная кристаллизация 7-0-тритил,4-0-анндизиденлннкомицина. Этикристаллы отделили фильтрованием и дваждыперекрнсталднзоввлп нз ацетоннтрилв; вы- . чвход 6,45 г жедтьпт кристаллов 7-0-тритнл 3,4-0-анизндиденлинкомицинв. Этот продуктрастворили в 160 мл горячего ацетона,раствор разбавили 140 мл горячей воды(50 С) до.,постоянной мутностя. Быстро уначалась ристалдизвцня 7-0-тритил,4-0.Йнйзидцдендинкомщйнв, После охлажденияреакционной смеси прн 0 С в течение 1 чфильтрованием выделены белые кристаллы7-0-тритил,4-0 низнлиденлинкомнцина,. Э)их промьтдн смесью ацетон-вода (1:2), сушили на воздухе, выход 6,2 г, т. пл. этихкристаллов 203-204 С,Вычислено,%: С 70,47; Н 7,10;:МЗр 6.)в б 4 в 18 ф. 65С+Н, Й 0 б (экв, вес 767,01),Найдейо, %: С 70,58; Н 7,41; М 3,70,б 4,39,В. 7;О-трнтнд,4,-0-анизилиденлинкомицнн 2-фосфат. 40Раствор 18,4 г РОС 1 в 200 мд сухогопирццина поместили в трехгорлую колбу,снабженную пропелдерной мешалкой, тер-мометром, капельной воронкой и хлоркадьциевой трубкой.Пнрнднновый раствор охладиолн до,-40 С и в течение 10 мнн добавилираствор 76,7 г 7-0-тритнд,4-0-анизилиденлннкомицинв в 200 мл сухого пнриднна,Температуру в реакторе поддерживали от-38 до -42 С с помощью бани,"изсухого 50ольда и ацетона, Розовому раствору дали наогреться в течение 25 мнн до - 20 С., затем охладили до - 45 С и добавили раствор 36 мд воды в 150 мд пйрндннв (предоваритедьно охлажденного до С). Раствор сразу окрасился в оранжевый цвет и темфпервтурв поднялась до - 30 С.оПосле отстаивания в течение 4 ч прикомнатной температуре рвстворитель отогнали в вакууме при 55 оС, добавили 100 мд12этилового спирта и повторили отгонку, получили 7-0-ггритнл,4-0-аннзилнденлинькомнцин-фосфвт в виде вязкого остатка.Г. Лннкомнцин-Ъфосфат (сырой).Вязкий остаток растворили в 400 млуксусной кнсдоты при энергичном взбалтывании, затем разбавили 80 мл воды, Раствор нагревалн на паровой бане в течение,н отогнали растворцтель в высокомвакууме при 55 С до получення вязкого оо .татка, который перемешалн с 200 мл воды еПосле повторного выпаривания получилнжелтый вязкий остаток, который взболтали с 700 мл воды, затем добавилн 100 млконцентрированной гидроокиси аммония и суо. пензию экстрвгировали 1 л хлороформа. Водный слой упарнли до небольшого обьемадля удаления аммнака, разбавили водой до500 мл н сушили вымораживанием. Подучидн 75 г светло-желтого лннкомицин-фосфата.Полученный линкомнцин-фосфат рвствоворидн в 750 мл воды н пропустили соскоростью 750 мл/ч через колонну Зх 14,заполненную смолой Двуэкс 1-Х 2 (ацетат),представляющей собой поднстнролтрнметнлбензиламмонийацетатную квтыонообменнуюсмолу, связанную 2% дивннилбензолв прирН = 9, Эдюирование велось при рН 9 ацегатом аммония со скоростью 1500 мл/чи 7 л 2 н. ацетвта аммония, Выходящую изколонки жидкость контролировали записывающим поляриметром Бенднкс, Первые 7 лжидкости отбросили, пиковый продукт собрали отдельно,Бесцветный пиковый элювт упврилн донебольшого . объема ( 10-15% от начального обьема) для удаления большей части аце.тата аммония. Бесцветный раствор разбавили до 4 л водой и сушили вымораживанием.оПолученный осадок нагревали до 100 С подвысоким вакуумом для удаления оставшихсяследов вцетатв аммония.Д. Днаммониевая соль линкомнцнн 2-фосфата, Лиофилат, полученный по и. Г, растворили в 200 мл воды н разбавили 200 млэтилового спирта, Раствор охладили на ледяной бане и затем насытили газообразнымаммиаком. Белый осадок дивммонийфоа)атвотфнльтровали, фндьтрат упарилн досухапод высоким вакуумом прн 39 С, остатокрастворяли в 200 мд метилового спиртан разбавили 1500 мл эфира ддя осаждения,линкомицнн-фосфвтв в виде ат монневойсоли, Выход белого продукта 18,9 г.Е. Полуаммониевая соль дннкомицинфосфвта. Эту соль получили следующимобразом, Раствор 16,5 г вммонийдинкоми13цип-фэсфата, полученный по и, 3, растворили в 66 мл воды, Бесцветный раствор разбавили 3,6 мл уксусной кислоты, затем разбавили 450 мл ацетона (точка постоянной мутности). Кристаллизация началась очень быстро, После охлаждения в холодильнике в течение 8 ч кристаллы отфильтровали, промыли 20 мл смеси ацетон- вода (95;Б), а затем 200 мл ацетона.Белое кристаллическое вещество сушиоли при 100 С 3 ч в чистом вакууме, затем привели в равновесие с лабораторной атмосферой в течение ночи. Полуаммониевая соль представляет собой игольчатые красивые кристаллы, которые легко пере Ь кристаллизовываются,.. Вычислено, %: С 43, 67; Н 7,43;Й 7,07; Р 6,26; экв. вес 245,02.с Н й о, Р 5 (990,10).Найдено (с поправкой на 6,91% НО и й0,87% неорганических фосфатов в видеМН Н РО),%: С 42,22; Н 7,90;й 7,07; Р 5,77; акв. вес 237,Ж. Линкомицин-фосфат.Полуаммониевую соль из п. Е нагревалиИ при 118-120 С в течение 8-24 ч в высоком вакууме, пэлучили линкомицин-фосфат.После смешения 7-хлор- и 7-бром-диоксилинкомицинэв, обоих 3 (ректусной) и 5(синистернэй) конфигураций, для лцнко- . мицина из п. А (без п. Б) получили 7-(Я - хлор-, 7- ( 5 )-хлор-, 7-(3 )-бром-, и 7-( 5 )-бром-деоксилинкомицин-фосфа - ты в виде полуаммонийных солей и в виде И ;цвиттерионных соединений, Подучили также промежуточные 3,4-0-арилиденлинкомицин фосфаты и 3,4-0- арилиденэпилинкомицин- "2-фосфаты, Это показано в нижеследующем примере, 40П р и м е р 2. 7-(5 )- Хлор-деоксилинкомицин-фосфат.А. 3,4-0- и-ацетамидобензилиден-( Ь )- -хлор-деоксилинкомицин.Раствор 10 г 7-( 5 )-хлор-деоксилин комицингидрохлорида в 20 мл М,й-диметилформамида и 170 мл бензола обработали 15 г п-ацетамидобензальдегида, Раствор нагревали с обратным холодильником в течение 1,5 ч, а воду улавливалц в ловушку,И После охлаждения до комнатнэй температуры небольшое количество нерастворимого вещества отделили фильтрованием. Фильтрат разбавили 400 мл воды, полученный осадок отфильтровали, промыли эфиром, сушили в струе бб азота и получили 7,4 г 3,4-0- и-ацетамидобензилиден-( 5 ) -хлор-деоксилинкомицингидрохлорида, Свободное основание получили при перемешивании 7,4 г гцдрохлорида со смесью 50 мл воды и 10 мл кэн центрированной гидроэкиси аммония, Полученное твердое вещество этфильтровали исушили :в струе азота с получением 5 г3,4-0 -и-ацетамидобензилиден-( Ь )-,хлор 7-деоксилинкомиципэвогсвободиогэ основания с т. пл. 109-114 эС,Б. 7-( 5 )-Хлор-деоксилипкомицин-фосфат. 3,4-0-п ацетамидобензилиден 7-( 5 )-хлор-деоксинкомицин фосфорилировали РОС 1 в пиридине, как в примере1, После удаления защитной группы 80%-нойуксусной кислотой соединение очистилиионообменной хроматографией с получением7-( 5 )-хлор-деоксилинкомицин-фэсфата,Замещением 7-( 5 )-хлэр-деоксилинкомицингидрохлорида 7-(э )-бром-деоксилинкомицингидрэхлэридэм получили 7( 5 )-бром-деэксилинкомицин-фэсфот,7-( 5)-Хлор- и 7-( 5 )- бромлинкомицвьпы получают следующим образом.Гидрохлорид 7-( 5 )-хлор-деоксилинкомиццна,Гидрох,горид линкомцдцна (10 г, 0,0226 моля, 200 мл четыреххлористого углеродаи 10 мл 5 ОС Сперемешивали и нагревали с обратным холодильником в течениео4 ч, Реакционную смесь охладилц до 25 Си этфильтровали. Желтый осадок высушилив вакууме, потом растворили в 10 мл кипящего этилового спирта. Добавили этилацетат дэ помутнения и раствору дали остыть.Получили кристаллы гидрэхлэрида 7-хлор 7-деоксилинкомицина с выходом около 43%,Вычислено, %: С 45,18; Н 7,37;С 6 14,38; й 5,86; 5 6,70; НО 3,77.С 1 НСГМО 5 НС 1 Н О,Найдено, %: С 44,7; Н 7,65; СГ 14,27;Н 5,78; 6,45; Н О 3,85,7- ( 5 ) -Брэм-деэксилинкэмицин иего гидробромид,Раствор реагента Ридона получили пере-,мешиванием сухого раствора 52,6 г (0,2 моль)трифенилфосфина и 800 мл ацетонитрила при 30 оС в атмосфере азота. 10 мл(0,19 моля) брэма добавили в течение20 мин, После перемешивания в течение10 мин добавили 8,2 г,линкомицина в режоционную смесь, перемешивали ири 30 С втечение 18 ч, пэсле чего получили белыйосадок. Этот осадок отфильтровали и выбросили, к фильтрату добавили 100 мл метанолаи растворители отогнали в вакууме, Вязкийостаток растворили и 100 мл метанола,разбавили 1800 мл воды и шесть раз экстрагировали по 200 мл эфира. Эфирные экстракты отбросили, водную фазу подщелочили(рН 11) водным КОН и снова экстрагировали четыре раза ио 200 мл метиленхлэрида. Экстракты сушили и уиарили, получили 11 г желтого осадка, который хроматографировали на 1 кг силикагеля с помощью системы метанол-хлороформ 1:9 (пообьему). После первого отгона в 1200 млсобрали 22 фракции по 56 мл. Последниешесть фракций (17-22) выпарили досухаи получили 2,8 г 7-бром-деоксилинкомицина. Его превратили в гидробромид путемрастворения в воде и,добавления 1 НВр дорН - 1, отфильтровали и лиофилиэировали 1 рфильтрат. Йидробромид имел 1 с 1, = +114(с в 0,9314, НО),Вычислено, %: С 39,28; Н 6,23; 85,09;65 ю 83 Вф 29 ф 04,С 1 а Н уф В аИ 20 бф 11Найдено, %: С 39,64; Н 6,19; М 5,07;56,04; В 1 ф 28 э 59.Если бром заменить хлором, то получают7.-( Ь )-хлор-деоксилинкомицин, идентич-,ный продукту, полученному при хлорировании йрлинкомицина тионилхлоридом, Вместо трифенилфосфина можно замещать трифенилфосфитом. В этом случае можно также использовать вместо галоида метилгалоид.П р и м е р 3., Линкомицин-Ъфосфат.А. 7.0-тригил-З, Зр О-анизвтидевлвнкомыцив 2-фосфат. В колбу емкостью 22 л,снабженную хлоркальциевой сушильной трубкой, низкотемпературным термометром, мешалкой и питательной воронкой на 1 л, по- ЗО.местили 3600 мл пиридина и 300 мл хлор окиси фосфора. Полученный раствор охладилис помощью сухого льда и ацетона до - 35 С,оРаствор 1200 г 7-0-трития,4,-0-анизилиденлинкомицина в 11 л пиридина перенесФли в атмосфере азотав питательную воронку .ыорииямипо 1 л и подавали в колбу втечение 25 мнн при температуре от - 25одо - 35 С. По окончании добавления реакционную смесь перемешивали при -30 С фв течение 0,5 ч, а затем при температуреоот -20 до -15 С еще 0,5 ч, Потом реакЙионйую смесь быстро добавили к 12 л пи"риднна в резервуаре емкостью 39,38 лс открытым верхом, причем пиридин предварительно охладили, добавив 3 кг льда и пе, ремешав в течение 5 мин, Полученный растворвыпарили в выпарном аппарате при 55 оС до7 л, Испаритель промыли 4 л этанола, который потом добавили к концентрату в ре- фзервуаре емкостью 107,4 л. Затем концентрат разбавили при перемешивании 35,8 дводы. 7;-О-Тритил,4-0-аниэилиденлинкомицин-фосфат выпал в виде желтого осадка, который отфильтровали и промыли 17,9 Фводы.Б, Линкомицин-фосфат.Остаток на фильтре иэ и, А растворилив 15 л 80%-ной уксусной кислоты и нагре-,60 оли при 85 С в течение 45 мнн, после чего добавили 10 кг льда и смесь перенесли при перемешивании. Выпавший через 10 мин осадок отфильтровали и промыли 2 л воды и отбросили. Промьщные воды и фильтрат соединили и упарили до 4 л, разбавили 17,9 л воды и снова упарили до 2 л. Это раствор с добавкой 7,16 я воды, использованной для промывки колбыв которой вели выпаривание, экстрагировали 3,58 "л хлороформа.; Хлороформенную фазу снова экстрагировали 2 л воды, которую добавили, к водной фазе, Объединенную водную фазу выпарили до 3 л. Водный концентрат откачали из йспарителя и в негб., добавили 4 л 50%-иого этилового спирта, где его упари. ли до 2 л и соединили с водным концентра.4 том. Соединенные концентраты снова упарили в вакууме до 2 л. Затем добавили 3,58 л абсолютного спирта и раствор уйа рили до 3 л. Добавили 3,58 л абсолютного спирта, раствор заразили кристаллами цвиътерионной формы линкомицин-фосфата и дали стоять 2 ч, при этом вйделились крис; таллы пвиттерионной формы линкомщинЬ фосфата. Крйсталлы отфильтровали, промыли 3,58 л абсолютного этилового спирта выоэ сушили в вакууме при 40 С в течение 24 ч. Получили 310 г (выход 32, 4%) линкомипин 2 фосфата в виде белых кристаллов, т.пл, первой порции 215-216,второй порции 214-215 оС. Первую и вторую порции соедйнили и перекристаллиэовали из водного этилового спирта, получили ковисталлы первой порции с т. пл. 216-218 С (из 71,5% ноговодного этилового спирта) н 95 г кристаллов второй порции с т, пл, 216-217 С (из.80%-ного этилового спирта). Кристаллы первой и второй порции соединили и перекристцл-, лиэовали из водного этилового спирта с вы , ,ходом 25 г линкомицин-фосфата в виде белых кристаллов с т, пл. 222-224 С.Вычислено, %: С 44,43; Н 7,25; К 5,76; Р 6,37.С 8 Н О Й 5 Р.Найдено, %: С 44,72; Н 7,35;, И 5,84; Р 6,60 (с поправкой на 4%воды).Цвиттерионную форму можно превратить и и другие формы добавлением перечисленных выше кислот и оснований.Замещением 7-трития,4-0-аниэилиденлинкомицин-фосфата из поимера 1, п. Б 3,4 О-анизилиден 7-( 5)-хлор-, 7-(Я)-хлор-( б )-,бром- и 7-( М )-бром-диоксилинкомицинами получают 3,4-0-внизилиден- -( 5)-хлор-, 7-( Я)-хлор-, 7-()-бром и. 7-( Я ) -бром 7-деоксилинкомицины, а прн обработке этих продуктов по способу и. Б этого примера получают 7-( 5 )-хлор, 7-(3 )- хлор, 7-( Я) -бром и 7-( Я ) -бром-деокси-,.линкомицин-Ь-фосфаты в виде цвиттерионной формы,П р и м е р 4. Линкомицнн-С-З-фосфат.А, Заменив гидрохлорид линкомицина изпримера 1 гйдрохлоридом: линкомицина С,получают линкомицин-С-фосфат этил, 8 дидеокси-(транс 1-метил-пропил,2-пирролидинкарбоксамидо)-1-гио -эритро - 4, - Э -галоктооктопираноэид-фосфат .Б. Линкомицин С получают по реакции 1 алинкомицина с этантиолом (этилмеркаптаном)с образованием диэтилдиацеталя с последую,зим нагреванием реакционной смеси в при,сутствии и-толуолсульфокислоты или нагреванием до плавления. Нижв приводится опи 1 сание этого способа (пп. 1 и П ),Х. 6,8-Дидеокси-(транс-метил-пропил- (, -2 пирролидинкарбоксамндо)-3 эритро) -галактоальдвгидоктодцэтвлдитиоацеталь. 20В трехгорлую колбу емкостью 1 л загру-зилн 150 мл концентрированной солян ой кислотыаи 50 мл предварительно охлажденного до,0 С этантиола, а затем 15 ггйдрохлорндалинкомицина. После перемешивания нри ком- й 5натной температуре в течение 5 ч реакционную смесь разбавили равным объемомледяной воды, экстрагировали сквллисолвом В (технический гвксан) и экстракты отбросили. ЗОБольшую часть кислоты нейтрализовали,осторожным добавлением твердого едкогокали (100 г) при температуре перемешнваемой смеси 20-30 С (охлаждение смесьюацетона и сухого льда). Твердый хлористый йб,калий отделили фильтрованием, хорошо про:мыли хлороформом. К фильтрату добавилиеще хлороформа (около 150 мл) и перемешиваемую смесь доведи до рН 10 добавлением водного едкого натра (2 н.) 49,Хлороформенный слой отделили, водныйслой тщательно экстрагировали хлороформом, соединенные экстракты дважды про,мыли водой, сушили над безводным сульфатом натрия. После отгонки растворителя 4о1 в вакууме при 30 С получили полутвердый,.:остаток, который после перекристаллизациииз ацетона дал 5,41 г 6,8-дидеокситранс-метил-пропил- Ь -2-пнрролидинкарбоксамидо) -Ъ -эрнтро -гапактоальдегидоктоэдиэтнлдитиоцеталя в виде бесоцветных плоских игл с т пл. 130-132 С,После упаривания маточного раствора получили дополнительно 1,5 г вещества с т,пл.129-131 С (общий выход 6,91 г - 42,4%).йВычислено, %: С52,25; Н 8.77;М 5,81; б 13,29.С Н 42 ЯОБ бНайдено, Ж: С 52,38; Н 8,71; 1 Ч 5,93б 13,46, 60П, Циклизация до линкомицнна С,а) 1 ч. диэтилдитиоацеталя иэ и. Х имоногидрат и-толуолсульфокислоты нагревали с обратным холодильником в 25 ч,ацетонитрила до получения существеннойпротнвобактериальной активности, Реакционную смесь охладили и выпарили досуха ихроматографировали на силикагеле с помощью смеси этилацетата, ацетона и водыв соотношении 8 5:1 соответственно,фракции 102-13 1 показали противобактериальную активность. фракции 105-125выпарили досуха и пврвкристаллизовалииз ацетона, подкисленного соляной кислотой, перекристаллизовали иэ воды с добав:,лением ацетона с получением кристаллов,гидрохлорида лннкомнцина С с т. пл. 149153 С,б), Диэтилдитиоацеталь из п, 1 нагревали до 260 С в течение 3 мин, при этомотмечался запах меркаптаяа, Хроматографией (как приведено в п. Ц, а) показано,что получен линкомнцин С.В, Получение линкомипина С ферментацивй.Гидрохлорид линкомицина С был полученследующим образом.Фврмвнтация. Срез почвы б 1 гер 1 омъсей61 псоъвт 1515 чсР61 псО 83 чеп 516 В к к2936 был использован для заражения серии эрлвнмейеровских колб емкостью500 мл, в каждой содержалось по 100 млзатравочной среды, содержащей следующие(потребности)М - 2 -Амин В - пищеварительное средс- до энзимного казвина Шеффилда, рН среды посева до стерилизации был 7,3. Рост про . должался 2 дня при 28 оС на трясучке Гумпа прн 250 об/мин,5"; ную затравку посева (5 мл) добавиливкаждуюиз,30 колб на 500 мл, в которых содержалось по 100 мл ферментатпьной среды следующего состава, г:Моногидрат глюкозы 15Крахмал 40Меласса 20Пвптоновая жидкость Вильсоиа159 (препарат внзиматичвски гидролизованного животного протеина)Кукурузная патокаКарбонат кальция