Способ получения биомассы

ОП ИСАНИЕ Союз Советских Соцналистнческих Республик(23) Приоритет (31) 20317/75 ГосударствеииыИ комите СССР по делам изобретеииИ и открытиИ6839,2 088,8) юллЕтЕнь21сания 050679 публиковано 0506.79. ата опубликования о 2) Авторы нзобретенн Иностранцы Филип Альберт Майерс, ЭнтПол Рей ранная Фирмаетролеум Компани Лимиикобритания) Ино Дзе Бритиш(71) Заявнтел ОМАС 54) СП ОЛУЧЕ к техникетательнойв качестве 10 ьтуры,ещества,Адго-В Изобретение относитсяполучения биомассы на писреде, содержащей метанисточника углерода.Известен способ получения биомассы, предусматривающий выращиваниесмешанной культуры бактерий на питательной среде, содержащей метан вкачестве источника углерода, источник азота и необхоцимые минеральныесоли, в условиях аэрирования газообразной смесью, содержащей свободныйкислород и метан, с использованиемв качестве метан-потребляющих микроорганизмов бактерий иэ родов МеСЬу1 ощопая, Ме 1 Ьу 1 оЬас 1 ег, Меспу 1 ояЫцяили МеЮу 1 ососсця 11.Недостатком известного способа является повышенное образование пеныв процессе выращивания,Целью изобретения является снижение пенообраэования в процессе выращивания микроорганизмов.Это достигается тем, что в предла"гаемом способе получения биомассыосуществляют одновременное выращивание культуры, бактерий, потреблюощихметан, с одной или смесью бактериальных культур из родов Ас 1 пеоЬас 1 ег,А 1 са 11 депея, АдгоЬасег 1 цп 1 Мсйахе 11 а,Ряецдовопая, Р 1 ачоЬасТег 1 цщ, Вас 111 цз,М 1 гососсця или Рес 11 ососсця не потребляющих метан и использующих пенообразующие продукты метаболизма культурыбактерий, потребляющих метан.При этом в качестве культуры,потребляющей метан, используют бактерии вида Метпу 1 ососсця саряц 1 аСця.Кроме того, в качестве культуры,потребляющей метан, используют штаммЫС 1 В 910856 М.саряц 1 аця,Кроме того, в качестве культуры,потребляющей метан, используют штаммАТСС 919069 М.Сарвц 1 а 1 ця,При этом, в качестве культуры,потребляющей пенообраэующие вещества,используют штамм Могахе 11 а ИС 1 В911135.Кроме того, в качестве кулпотребляющей пенообразующие виспользуют штамм А 1 са 13.депея,.ЬасСег 1 цщ или Ряецйощопая НС 1911136.Кроме того, в качестве культуры,потребляющей пенообраэующие вещества,используют штамм А 1 са 11 депея, Адго .Ъас 1 ег 1 цщ или Ряец 4 овопая ВС 16911137.Кроме того, в качестве культуры,потребляющей пенообразующие вещества,667154 20 60 19опри 30 С,на скошенном питательном - агаре, Основание жидкого скошенногоагара помещают в стерильную дистиллированную воду, Рост культуры послеинкубации оценивают на поверхностираздела воздух-вода при помощи фаэово-концентрационной микроскопии. 8Марганцевая среда для споруляциичашки со скошенным питательным агаром,в который добавляют 2 мг/мя ионовееМп в виде сульфата марганца, Культуры инкубируют до 14 дней при 30 С )Оа затем инокулируют спорами. Культуры также оценивают на жизнеспособ.ность йосле воздействия температуры80 С 10 мин.П р и м е р 2. В стерильный бродильный чан емкостью 7 л помещают4500 мл стерильного водного питательного раствора. Состав водной питательной среды, как описано впримере 1, с добавлением:1,770 г/л азотной кислоты.20В бродильный чан вводят 500 млактивно растущей культуры микроорганизмов Ме 1 йу 1 ососсцв сарзц 1 а 1 цзОТСС 919069, использующей метан иэлементарный азот, обеспечивают егопериодическую работу в асептическихусловиях со скоростью перемешивания500 об/мин, скоростью аэрации10 об/об час, расходом метана10 об/об час, рН поддерживают на 30уровне 6,5 добавлением 1,0 г/л раствора гидроокиси натрия или 3,6 н.раствора серной кислоты взавиоимости от условий. При достижении клетками плотности 1,0 г/л скорость перемешивания повышают до 1000 об/мин.Затем работу чана переводят на непрерывный режим при скорости разбав-.ления 0,05 .часЧерез 12 ч непрерывной работы скорость разбавления повышают до 24, об/обчас, а расходметана в . До,6 об/обчас. Еще через15 час скорость разбавления повышаютдо 0,18 час" Йлбтность клеток составляет".3",3 галл, а скорость образования.прииерно 0,59 г/лчас.Режим:"работы нестабильный из-запеныобразующейся при росте культуры, Пена препятствует стациойарномурежиму работы, На этой стадии асептические условия нарушаются, а через 50два часа неасептической раббтй образованне пены снижается-и в культуреобнаруживают некоторые другие видыбактерий.Через 24 час режим работы устанавливается при плотЙости клеток3,4 г/л, а скорость образования составляет 0,61 г/лчас. Образованиепены больше не наблюдается.При анализе бульонной культурыобнаруживают бактериальную культуру,как в примере 1.Пример 2 показывает, что пенообраэование можно эффективно снизить вприсутствии смеси микроорганизмов,П р и м е р 3. В семилитровый бродильный чан помещают 4,5 л водной питательной среды следующего состава, мг: НИО - 3500,0 у КН РО - 350,0 р Ыа 2 РРО 412 НО - 300,0; МЯЛО 7 НО - 170; СаС 6(безводный) - 40,1; СцЯО, 5 Н 20 - 4,0 р РеЯО 7 Н 10 - 15,0 р ЕпЯО 47 Н О - 1, 0 у СоСЙ 6 Н, О - О, 04; МпЯО 4НЪ - 1,0 ю Иа 2 ИоО 4 2 НО - 0,4 Р дистиллированная вода до 1 л.- рН среды доводят до 6,4 добавлением 2,0 н.водного раствора гидроокиси натрия, затем в бродильный чан вводят 500 мл выращенной в асептических условиях культуры Ме 1 Ьу 1 ососсцз сарзц 1 а 1 ця ОТСС 919069 и обеспечивают его работу по периодическому режиму со скоростью перемешивания 1000 об/мин при 45 С, расходе воздуха - 10 об/час и метана - 10 об/обфчас.рН среды поддерживают на уровне 6,4 добавлением 2,0 н.водного раствора гидроокиси натрия или 3,6 г раствора серной кислоты, используя устройство для автоматического титрования. По достижении плотности клеток 2,0 г/л режим работы переводят на непрерывный, вводя водную питательную среду Непрерывно в бульонную культуру и отводя ее со скоростью, обеспечивающей постоянство рабочего объема в бродильном чане объемом 5 л, Начальная скорость разбавления сосжтавляет 0,05 час . По мере повышения плотности клеток скорость перемешивания, расход метана и расход: воздуха постепенно повышают и через 36 час, скорость разбавления составеляет 0,18 час, скорость перемешивания - 2000 об/мин, расход воздуха - 48 об/об час и расход метана - 12 об/об фчас.На этой стадии к водному раствору, не содержащему азотной кислоты, добавляют водную питательную среду. Новый раствор имеет следующий состав, мг: КНРО 4 - 700; ИаНРО 4 12 Н О - 600 у МдЯО 47 НО - 340 у СаС 11 1 безводный) - 80; СцБ 04 5 Н 10 - 8; ГеЯО 4 7 НО; пБО 4 7 НО - 2; МпБО 4 НО 2; СоС 12 6 НО - 0,8; МаМоО "2 Н О -4 2 0,8; дистиллированная вода до 1 л.К бульонной культуре отдельно добавляют азот в виде гидроокиси аммония в количестве 95 для роста микроорганизмов, Скорость введения определяют устанавливая плотность клеток растущей культуры .1 методом оптической плотности) и используя плотность клеток для измерения скорости связывания азота биомассой. Остальные 5 азота вводят вместе с элементарным азотом воздуха, подаваемого в бродильный чан.Еще через 60 час достигают стационарного состояния при плотности клеток 11,67 г (сух,вес) на литр и ско. - рости образования 2,1 г/л час. Прн росте культуры пенообраэования не667154 Таблица 3 актерист биомассы вьтуре, поснтрифугу,клеток на Концентраци бульонной к тупающей в г;веса сухи литр 2,90 0,5 11,67 3,14 0,001,0015 биомассы изой культуры,х клеток на Количеств1 л бульог.веса сулитр 12,9 1,38 13, 147,56 100 97,48 ечени Процент 2,2 ерь цен вид МеСЬу Р 10856 об во капсули ат ери аловпо сравне ососсцваэует меованныха единицию с иэ арвц 1ьшееолисавесастными Новы1 цв МС 1количесридныхбиомассывидами. аобретения ор биомассы,ванне смешана питательнойв качестве исик азота и неоли,в условиэной смесью,слород и ме- качестве кже произ ова- знаэвест" полученияющий выращибактерий нщей метанода,источнеральные ся гаэообраободный киэованием в 1. Спосопредусматриной культурсреде,содерточника углобходимыеях аэриросодержащетан, с испо 60 ми ван й с а имену побб роме того, н олее высокий нению с изве й вид штаммход по мета ет ср наблюдается, Бактериальный анализ бульонной культуры показывает наличие того же вида, как в примере 1.П р и м е р 4, Полностью повторяют методику, как описано в примере 3, но используют штамм МеЮу 1 ососсцз сарвц 1 а 1 цв МСХВ Р 10856. Новый штамм 5 выделяют из образца грунта. Стационарное состояние процесса достигаютпри плотности клеток 13,14 г (сух, вес) на л/час, что соответствует скорости образования 2,4 г/л час. 10 Образования пены не наблюдают вид бактерий аналогичен виду примера 1, эа исключением того, чтоиспользующим метан видом микроорганизмов явля ется МеЮу 1 ососсцв сарвц 1 а 1 цв БС 1 В Р 10856. Концентрация биомассы впотоке, выходящем иэцентрифуги, г.веса сухиклеток на литр Иэ результатов табл. 3 видно, чтобиомасса эффективно извлекается прицентрифугировании бульонной культуры, содержащей новый вид микроорганизма МеЮу 1 ососсцв сарвц 1 а 1 цв ЮС 1 ВР 10856, тогда как из бульонной куль"туры, содержащей известный штаммАТСС Р 19069, извлекается только97,5 биомассы,Из представленных данных тавидно, что при равных условияхводительность в случае использния нового штамма БС 1 В Р 10856чительно выше по сравнению с иным штаммом АТСС Р 19069,22Выращенную в стационарных условиях бульонную культуру из бродильного чана помещают в центрифугу йепрерыв=" ного действия (Шарплесс тип 16) с загрузкой 17 кг, центрифугирование осуществляют при двух различных расходах:571 мл/мий и 774 мл/мин. Концентрацию биомассй в потбке;выходящем иэ центрифуги измеряют в пересчете на вес сухих клеток на литр. Затем на основе веса сухих клеток определяют вес биомассы, выходящей иэ центрифуги.Сравнительные данные центрифугирования культур, содержащих штаммы МеЮу 1 ососсцв сарвц 1 аТцв АТСС Р 19069 (пример 3) и штамм МеЮу 1 ососсцв сарвц 1 ацв БС 1 В Р 10856 (пример 4) приведены в табл.3.667154 24 40 23метан-потребляющих микроорганизмовбактерий иэ родов МеЮу 1 ошопав,1 е 1 Ьу 1 оЬас 1 ег, Ме 1 Ьу 1 ов 1 пцв илиМе 1 Ьу 1 ососсцв, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью снижения пенообразования в процессе выращивания,осуществляют одновременное выращивание культуры бактерий, потребляющих метан, с одной или смесью бактериальных культур иэ родов Ас 1 пеоЬас 1 ег, А 1 са 11 депев, АугоЬас 1 ег 1 цш,Могахе 11 а, Рвецйошопав, Р 1 ачоЬас 1 ег 1 цв, Вас 111 цв, М 1 Ьгососсцв илиРей 1 ососсцв не потребляющих метан - й йспользующих пенообразующие продукты метаболизма культуры бактерий,потребляющих метан.2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, чтов качестве культуры, потребляющей метан, используютбактерии нида МеЮу 1 ососсцв сарвц 1 а-.ацз3. Способ по пп, 1,2, о т л ич а ю щ и й с я тем, что в качествекультуры, потребляющей метан, используют,штамм ИС 1 В 910856 М,сарвц 1 а 1 цв.4. Способ по пп. 1,2, о т л ич а ю щ и й с я тем, что в качествекультуры потребляющей метан, используют штамм АТСС 9 19069 М,сарвц 1 аСцв.5. Способ по пп. 1-4, о т л ич а ю щ и й с я тем, что в качествекультуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм Мота- .хе 11 а ЮС 1 В 911135.б. Способ по пп. 1-4, о т л и "ч а ю щ и й с я тем, что в качествекультуры, потребляющей пейообраэующие вещества, используют штаммА 1 са 11 депев, АдгоЬас 1 ег 1 цш илиРвецйовопав БС 1 В 911136.7. Способ по пп. 1-4, о т л ич а ю щ и й с я тем, что в качестве культуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штаммА 1 са 11 депев, АугоЬас 1 ег 1 цш илиРзецйовопав ВС 1 В 911137,8. Способ по пп. 1-4, о т л ич а ю щ и й с я тем, что в качестве 5 культуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штаммА 1 са 11 депев или Рзецйошопаз МС 1 В911138.9, Способ по пп. 1-4, о т л и 10 ч а ю щ й й с я тем, что н качествеКульгтурй, потребляющей пенообразую,щие вещества, используют штаммА 1 са 11 депев ИС 1 В 911139.10. Способ по пп. 1-4, о т л ич а ю щ и й с я тем, что н качествекультуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штаммАс 1 пеСоЬасег БСХВ 911140.11, Способ по пп; 1-4, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что в качествекультуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штаммА 1 са 11 депез, АдгоЬас 1 ег 1 цв илиРвецйощопав ИС 1 В 911141.12. Способ по пп. 1-11, о т л и 25 ч а ю щ и й с я тем что процессвыращинания бсуществляют при рН5,5-7,0.13. Способ по пп, 1-12, о т л и -ч а ю щ и й с я тем, что процесс 30 выращивания осуществляют при 30-55 цС.14. Способ по пп. 1-13, о т л ич а ю щ и й с я тем, что концентра- цию ионов аммония в питательной среде в процессе выращивания поддержи вают 2-50 мг/л. Источники информации, принятые вовнимание при экспертизе1, Авторское свидетельство СССР9421199, кл. С.12 0 13/06, 1974.Составитель А. БражниконаРедактор О.Иванова Техред Л. Алферова Корректор А. ГриценкоЗаказ 3155/49 Тираж 525 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб д, 4/5филиал ППП .Патеит 1, г.удгород, ул.дроектеая,атарный азот, и бактерии, потребляющие пенообраэующие вещества, образованные этими бактериями, культивируют в 5 л (рабочий объем) бульона, содержащегося в семилитровом ферментере. Процесс ведут непрерывно не асептически,температуру поддерживают 45 С, перемешивание проводят смесителем при скорости вращения 1000 об/мин. К бульону добавляют питательную сре- ду при степени разбавления 0,18 час следующего состава, мг: КН НРО -й 175,0; ИаНРОф 12 НО - 150,0; МдЯО 47 НО - 85,0; СаС 1(безводный) 20,0; СцЯО 4 5 НО - 20,01 РеЯО 47 НО - 7,5; ЕпЯО 47 Н О - 0,5; МпЯО 4Н О 0,5; СоС 16 Н 0 - 0,02; Иа МоО 2 Й О- :0,2;,:дистиллированная вода до 1 л,рН регулируют 6,4, используя 2,0 н.раствор гидроокиси натрия, азот вводят в виде гидроокиси аммония и воздуха, при этом количество гидро- окиси аммония вводят из расчета удовлетворения потребности в азоте присутствующих бактерий на 95; а -оставшиеся 5 удовлетворяют азотом воздуха.Метан подают при скоростиб об/об час и воздух -при скорости24 об/об час. Ферментация идет стабильно, при этом получают плотностьклеток 3,4 г/л при производительности 0,61 г/л час.Во всех примерах вес клеток выра-,жен через сухой вес. Образование пе-,ны бактериями не обнаруживают.Затем концентрацию водной питательной среды и гидроокиси аммония удваивают, что приводит к увеличениюплотности клеток до 6,5 г/л и производительности до 1,7 г/л час. Пенане образуется.40 Бактерии, присутствующие в бульонесостоят из 85 клеток штамма АТСС19069 "потребляющих метан и элементарный азот бактерий МеСЬу 1 ососсцясаряц 1 аФцв, и из 15 клеток смеси, 45 не потребляющих метан бактерий. Последние выделяют путем разбавления образцабульона до 10 , нанесения разбавленного образца на агар в чашкеПетри и инкубирования 48 час при 50 45 С в аэробных условиях в отсутствии метана. Отдельные колонии снимают; с агара .и непрерывно пересеваютв свежую среду до получения чистойкультуры. Полученные культуры быливнесены в национальную коллекциюпромышленных бактерий Аберден (Шотландия) под номерами: 11135, 11136,11137, 11138, 11139, 11140 и 11141,Затем бактерии идентифицируют всоответствии с существующей класси-60 Фикацией. Данные приведены в табл.1.Смесь не потребляющих метан бактерий состоит иэ 3 клеток неидентифицированных гРаммизменчивых бактерий в Форме палочек штамм ИС 1 В 65 911134 и 12 смеси, состоящей из 3 667154йспользуют штамм А 1 са 11 депев илиРвецс)оп)опав ИС 1 В Р 11138.Кроме того, в качестве культуры,потребляющей пенообразующие вещества,используют штамм А 1 са 11 депевИС 1 В911139,Кроме того, в качестве культуры,потребляющей пенообразующие вещества,используют штамм АсХпе 1 оЬас 1 ег ИС 1 ВР 11140.А также, кроме того, в качествекультуры, потребляющей пенообраэующие вещества, используют штамм,Рвецйопюпая ИСХВ 911141.При этом процесс, выращиванияосуществляют при рН 5,5-7,0 и 30- 1555 С.Кроме того, концентрацию ионов ам мония в питательной среде в процессевыращивания поддерживают 2-50 мг/л.Способ осуществляют следующимобразом.Смешанные культуры бактерий из родов МеЖу 1 ощбпая, МеЖЬу 1 оЬас 1 ег,Ме 1 Ьу 1 оя 1 пця или МеЮЬу 1 ососсцв выращивают на питательной среде, содержащей метан в качестве источникауглерода, источник азота и необходи" мые минеральные соли.. Для сниженйя пенообразования впроцессе выращивания осуществляютодновременное выращивание культурыбактерий, потребляющих метан с однойили смесью бактериальных культур изродов Ас.пе 1 оЬасСег, А 1 са 11 депея,АдгоЬас 1 ег 1 цщ, Могахе 11 а, Рсецйотпопая, Р 1 ачоЬас 1 ег 1 цщ, Вас 5.11 ця, М 1 сго-.соссця или Рей 1 ососсця не потребляю - - щйх метан и использующих пенообразую" щие продУкты метаболйзма культурыбактерий, потребляющих метай. Приэтом в качестве культур, потребляющих метан, используют бактерии видаМег.пу 1 ососсцв сарвцЬа 1 ця, штаммИС 1 В 910856 М,саряц 1 а 1 ця, штамм АТСС919069 М,сарвц 1 а 1 ця.В качестве культур, потребляющихйейообразуюВйе вещества используютштамм Могахе 11 а БС 1 Ы 911135, ИС 1 В911136, ИС 1 В 911137, ИС 1 В 911138 иштаммы Ас 1 пе 1 оЬас 1 ег ИСХВ Р 11140,А 1 са 11 депев ИС 1 В 911139 и штамм БС 1 В911141,Процесс выращивания осуществляютпри рН 5,5-7,0 и 30-55 С, а концентра-" "цию ионов аммония в питательной среде в процессе выращивания поддерживают 2-50 мг/л.Процесс проводят в условиях аэрирования газообразной смесью, содержащей свободный кислород и метан, при-этом количество метана обычно равно16 объемам к 84 объемам воздуха, ономожетбыть также равно от 8 до 40объемов к 92-60 объемам воздуха.П р и м е р 1. Смесь бактерийштамм АТСС 19069 Мегпу 1 ососсця сарвц 1 а 1 цв, потребляющих метан и элемен667154 Таблица 1 Могахе 11 аИСХВ 911135 Палочки 0,35-0,5 хх 1,25-1,5 р параллельные стороны,единичные,Палочки 0,35-0,5 х 1 -1,25 р скругленные концы, края параллельные, некоторые слегка изогнуты, еди ные, некоторые цепочки содержат до 8 клетокоскопический вид Круглые, гладкие, блтящие, диаметр закругленного выступа2-3 мм, край сплошнобежевые с желтоватойсерединой. Круглые, гладкие, блестящие, малая изогнутость при уколе иглой, край сплошной, полупрозрачные светлокоричненые, обширные колонии на агаре. Морфология колонГДСА сКак ГДСА, нс полупрозначные с серымивкраплениями,Как ГДСА, но днаром 1 мм. ОкрашиванГраму етод А Мет/Ф глюкоза Ф Подвижност рген Аммонийные солисахар- мальтоза Аммонийные солисахар-этанол Твин 80 гидролизный 5штамма Могахе 11 а ИС 1 В 11135, штамма А 1 са 11 цепев, Рвецйошопав или Адго.- Ьасег 1 цщ ИС 1 В 911136, штамма Рвецдощопав или А 1 са 11 уепев ИС 1 В 911138, штамма Ас 1 пе 1 оЬасег ИСВ 911139, ,штамма Ас 1 пе 1 оЪас 1 ег ИС 1 В 911140, штамма Рвецйопюпав, А 1 са 11 депев или АугоЬас 1;ег 1 цщ ЮС 1 В 911141.Для сравнения процесс проводят при культивировании в асептических условиях в присутствии микроорганизмов, потребляющих метан и элементарный азот, МеЬу 1 ососсцв сарвц 1 а 1 цв АТСС 919069. Процесс проводят непрерывно при скорости разведения 0,18 час при плотности клеток, на-пример 3,3 г/л, и производительности 0,59 г/л час. Ферментация идет нестабильно иээа образования пены культурой, что приводит к трудностям регулирования уровня в ферментере и достижения стабильности проведения процесса, Пена уменьшает также объемную про пускную способность так, что не обеспечивается постоянный вывод получаемого вещества Затем концентрацию питательной 10 среды удваивают, что приводит к увеличению плотности клеток до 5,5 г/л и обильному образованию пены с последующим прекращением процесса. Характеристики штаммав приведены в табл.1,Характеристики других штаммов приведены в табл2.+ Рост на а 1"ареМак-Конка Маловат Рост в цианисткалииКаталаэа Сербводброд Индол Ацетилметилкарбинол Восстановлен- "йитартаЧувст ницилл йтельность к пе ину 2,5 иммунны дини бнйй рост ГДСА.р + 0,2 глюкозы баэр М аг Рост50-н а агаре МС вм метане Рост на агаре МСпарах бутайолав жидкой МС бездобавок Споруляция в марганцевой среде Палочки0,35-0,5х 1,25,акругленные концы, единичные .или спаренныеКруглые,гладкие,блестящие, малая вы-пуклость1-2 мм,аметр Круглые,несколькорасплывчатые, выделяющиеблестящуюслизь, малый изгиб,бежевые Палочки 0,5 х 1,5- единичные или спаренные, несколько короткоце- почных Круглые, гладкие,блестящие малая изо нутостьпри уколе иглой украя сплсш 11 ые, непрозрачны бежевые Круглые,гладкие,блестящие,- , малый йзгиб 2-3 ммлегко сливаются,: 1 1 ПА Нерегулярные пятна Переменноеокрашивание Переменноенерегулярное окрашивание ПеременноеПеременное нерегуляр- нерегулярное окра- ное окрашивание шивание Переменноенерегулярное окрашивание Метод В О/Ф глюкоза щел щел щел щел щел щел Подвижность(+) Аргенин ьмониевые соли сахаров" мальтоза Этанол Гвин 80гидролиз ОжижениежелатиныОНПГ Оксидусачашка Фильтровальнаябумага Рост на агареМак-Кон- ка Малонат Рост вцианистомкалии Уреаэа Казеиназа Каталаэ а Окрашиваниепо Граму-Метод А Круглые,блестящие,гладкие,1 мм, легко сливаются,полупрозрачные,серые Круглые, Как ГДСА,гладкие, но беловаблестящие, то-серыемалый изгиб 1 мм,сероватые Переменноеокрашивание, биполярнотемное Как ГДСА, но сливаются меньше 1 полупрозрачные, сероватые с опущенным центром Как ГДСА, Сливающий- но центр ся слизисполупрозрач-тый, блесный, встре- тящий, сечаются не- роватый, ровные края случайная,точечная колония, + Анаэробый ростДСА МС агар + 0,2глюкозы а рах метанолаа па- ана рах в па ор ег рахмалда Ацетилметилкарбинол Восстановление нит. рата Чувствительност к пенициллину 2,5 имун ные еди- ницы Рост наагаре МСв 50-номметане Рост на агаре МС в парах бутанола в и рах аце-тонав парах этанола Рост на МС в парах муравьиной кислоты 14Продолжение табл,2(элект-,ропиомикроскопические) 1 или 2 1 полярная НИ 2 или более боковых НИ Споруляция вмарганцовой средефч а н и я к табл. 1 и 2: + положительная реакция Приме отрицательнаяпеременная С слабая н нечетнаяюа ф ферментативная реакцияв среденет реакции нр щел щелочная реакция на аэробную пробу(+) некоторые клетки подвижныни не испытывались о-ф- окисление/ферментацняГДСА глюкоэо-дрожжевой сыпучий агар:глюкоза - 5 г, пептон - 10 г, дрожжевой экстракт - 5 гсычужныйфермент - 10 г, агар - 20 г, дистиллированная вода - 1000 мл, Автоклавирование при 12 Р С 15 мин. ПИ - питательный агар (оксоид СМЭ) МС - минеральная среда (жидкаяили твердая) Рецептура Кислый Фосфорнокислыйкалий КН 2 Р 04Кислый фосфорнокислыйнатрий Иа 1 НР 04 12 НОДистйллированная вода 16 г 11,6 г,100 мл ют мембранным фильтв виде четырех контерильных маточных 50 Нитрат натрия БаБОЗ 11,8 г Дистиллированная вода 100 мл А-Д стерили анием и храня ентрнрованных астворов. Сульфат железаРея 04 7 НОДистиллированйая води В Жидкую минеральную среду готовят,смешивая 10 кл раствора А, 10 млраствора В, 1 мл раствора С и 1,5 млраствора Д и,добавляя воды до 1 л,автоклавируют при 121 С 15 мин,оТвердую минеральную среду готовятпутем добавки 10 г агара к жидкойминеральной среде перед автоклавированием.Подвижность культур определяютпосле вырацивания в течение 18 час,4 г Сульфат магния МЗ 804 7 ИО Нитрат кальция Са(ВО)4 Н О СульФат медй СцБ 045 Н 0