4, 6-3-капронилгидразон-прегнадиен17 -ол-20-он-ацетат, обладающий гестагенным действием

745907 Союз СоветскккСоц 1 иалистическкхРеспублик О ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТО РСХОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(21) Приоритет по девам изобретений н открытийОпубликовано 07.07.80, Бюоллетень .% 25 Дата опубликования описания 07.07.80(71) Заявитель Харьковский научно исследовательский институт эндокринологии и химии гормонов-ОЛ-0 Н-АЦЕТАТ, ОЬ 31 АДА 101 цИЙ ГЕСТАГЕНЫМ ДЕЙСТВИЕМ Сн,СО О-л".ОСИз С Н -С 0-11 Н.1 чБ лл обладающему гестагенным . действием.Известно, что в молекуле прогестерона, представляющего собой ненасыщенный стероидный дикетан прегнанового ряда - Ь -прегнен. дион,20, гестагенную активность обусловливает наличие Ь.З-кетогруппировки в кольце А 1). Замена указанной группировки на любую другую лишает вещество гестагенных свойствИзвестно также, что для андростановых 3-кетостероидов замена у Сз.кетогруппы на Изобретение относится к получению новыхстероидных соединений, конкретно к Ь4,6.3-капронил-гидразон- прегнадиен 7 а -ол-он-ацетату общей формулы 2С-группу усиливает некоторые биологическиесвойства соединений 2.1 ель изобретения - расширение ассортиментастероидных соединений ряда прогестерона, обладающих высокой гестагенной активностью.Поставленная цель достигается описываемымЬ"ф-З-капронилгидразон.прегнадиен-,17 а -ол-он-ацетатом формулы 1, проявляющим гестагенное действие.Целевой гидразон формулы 1. синтезируют 10по известному методу 31 при вэаимодеиствиигндразида капроновой кислоты с Ь -прегнадиен 4,6-1 7 а -ол,20-дион- ацетатом в спиртовом растворе с дальнейшим выделением продукта обычнымиприемами.15П р и м е р. Смесь 2 г Ь -17 а -ацетоксипро 6гестерона, 3 г гидразида капроновой кислоты,50 мл этиленгликоля нагревают в теченйе 5 чпри температуре банФ 195-205 С, Полученныйрассвор выливают вл насыщенного раствора 20ИаС 1, выпавший осадок отфильтровывают, лро.мывавг водой и высушивают при комнатной4,6температуре. Выделяют 5 г сырого Ь .капронилгидразона прегнадисна -ол-он-ацетата,-1 О 47 10 0 0 нтроль рентеральном, нонии, мало токсичн обретенияазон-прегнадиен 17рмулы6 н ормула и Л 46 3. Капронил20 он-ацетат обще О-АТОС С т -СО-НН обладающий гестагенныИсточникипринятые во внима1. Физер Л., Фиэер1964, с. 570.2. Р,Ниццег 1, 6.6 аппе пепл Йее чоп ЗтегапаЬо 1 аеЬег Ю/гопы, 8Ярегт 38,985 (1962).3. Воловельский Лприродных соединений,ментов, 103 (1965),м действием,информации,ние при экспертизеМ. Стероиды. М"Мир",ОН, О.СЬагопюп 6.одев пИ Рготеи -о 11.8 ос, та.8 о 1,вес Таким образом фического дейсгви иилгидразон-прегна установлено, что ц тагенным свойство своей эффективно вышающим последн действия. Веществ т дионелев м Н. ЖОХ, сб. Синтез х аналогов и фраги актив Составитель О. МинаеваТехред Ж,Кастелевич Редактор Л. Ушакова РРектор М. Демчик Заказ 3889/ Тираж 495 1 ИИПИ Государственного по делам изобретений иПкомитета СССРоткрытийкая наб., д. 4/5 свое 113035 Ужгород, ул.П Филиал ППП "Патент" 4 Повьпцение дозы испытуемого вещества до 2500 мг/кг веса вызывает гибель 33,3% живот. ных. Последующее увеличение количества введенного вещества до 3750 и 5000 мг/кг веса способствует гибели соответственно 50 и 66,6% мышей. Применение вещества в дозе 10000 мг/кг веса вызывает гибель всех подопытных животных. Гибель наблюдается как правило на протяжении первых 2-3 дней после введения. Летальному исходу предшествуют явления общего угнетения, которые сменяются адинамией, прерывистым дыханием. Наблюдение за весом выживших животных не выявляет существенных изменений у подопытных мышей по сравнению с контроль. ными. Все животные равномерно прибавляют в весе.1 ОНа основании полученных результатов можно считать, что изученное вещество мало токсично - его ЛД 5 о составляет 3631 (1815-7262) мг/кг ультате изучения специ оксичности Лб-капро 17 й -ол-он-ацетатавещество обладает гес. иближающимся по силе прогестерону, но пре по продолжительностино не только при паи при пероральном применео в острых опытах на мышах,Таблица 1 Специфическая активность Ьф-капронилгидразон-прегнадиенй-ол 20-онацетата спустя 3 дня после однократного внутримышечного введения в дозах,эквивалентных прогестерону. О 1 Д Вес полового аппарата Геста. генная актив- ность Вес тела, г оза,кро. лика мг/кгвеса исход.ный оконча. тельный менев мг о К онтЛю 1 0,2 780 1300 1440 1650 11001600 1600 900 2 02 910 1500 810 1000 3 0,2 853,3 1516,6 1381,3 +88,6 ( 0,05 1133,3 81,2 1 Зх 85,6 171,2 205,5 3 74,который растворяют в ацетопе и высаживаютв гексан, Получают 2 г целевого, продуктас т, пл. 126-128 С.Найдено,%; С 71,9; Н 8,85; М 5,93;С 2 9 Н 42 2 О 4Вычислено,%: С 72,2; Н 8,71; М 5,81ИК.спектры: 3170 (чН), 1730 (С=О),670 (С=О, 1600 (С=И),Изучение специфической активности синте.зированного вещества проводят иа 60 инфантильных кроликах самках весом 0,8-1,0 кгпо методу С.СаиЬегд и модификации К,АпМпзапп, основанной на структурных изменениях слизистой оболочки матки под влияниемпрогесте рона.Животные подвергаются предварительному(в течение недели) эстрогенному воздействиюпутем ежедневного подкожного введения фолликулина в дозе 10 МЕ в 0,2 мл косточковогомасла. На восьмой день от начала опыта кроликам однократно внутримышечно вводят ис.пытуемое вещество в дозах, эквивалентных0,2-0,6-0,8 и 1,0 кг прогестерона, с последую.шими ежедневными инъекциями поддерживающих дозу фолликулина (1 МЕ) вплоть до за.боя,Испытания заканчивают спустя 3,7 10 и 14дней после введенич вещества умерщвлениемкрольчих путем внутривенного введения воздухав краевую вену уха. Тело и рога матки тщательно отсепаровывают от соединительной ткани 5907 ,фи жира, взвециваюг, фиксируют в 10%.номрастворе формалина и подвергают гистологичес.,кой обработке. Матки заливают в целлоидин.парафин с последующим получением серийныхсрезов толщиной 5 мкм, которые окрашиваютгематоксилин.зозином, Полученные гистологические препараты изучают с помогцью микро.скопа МБИ.Оценку гестагенной активности проводят поО четырехбальной шкале:Чистая зстрогенная пролиферацияЯвная гестагенная активность ,Сильная гестагенная активность ,.Очень сильная гестагенная активность .,Каждую дозу испытуемого вещества изучаютне менее чем на 3-5 животных, В качестве конт.роля используют кроликов того же веса, нахо.дивщихся в одинаковых условиях с подопытными, но подвергавшимся лишь эстрогенной подго.товке фолликулином.Действие изучаемого вещества сравнивают слрогестероном, международная единица действиякоторого составляет" 1 мг. Для этого в равноценных условиях проводят серию опытов на33 кроликах, применяя различные дозы прогесхерона (от О,1 до 1,0 мг) и проводя наблюденияпосле однократного воздействия в разные сроки(3,7, 10 и 14 дней),Результаты изучения специфического действиязо Ь-3-капронилгидразон-прегнадиена -ол,б1Вес тела, г Вес полового аппарата Срокиссле. Доза,Гестаген.ная актив. кро- лика исходч.7 745907 8Как видно из табл. 1, спустя 3 дня после в дозах 0,2 и 0,6 мг, сопровождаются повьппеоднократного внутримышечного введения испы- нием веса матки по сравнению с центральными туемого вегцества в дозе, эквивалентной 0,2 мг животными в среднем на 77-89% (Р0,05), прогестерона, гестагенная активность выявлена Применение Ь-З.капронилгндразон-прегна. у двух из трех подопытных животных, Гисто диен.17 й .дл.он.ацетата в дозе, эквивалент- логическая картина слизистой оболочки матки ной 1 мг прогестерона, вызывает у болыпей кроликов при этом свидетельствует о значи. части подопытных животных резкую пролифе. тельном ее разрастании и выраженном развитии рацию слизистой оболочки матки, сопровождаю- маточных желез. Отмечается также утолщение щуюся развитием большого числа глубоких мышечного и соединительнотканного слоев. 16 складок слизистой и увеличением количества Выявленные изменения соответствуют согласно желез, что соответствует по схеме очень силь- схеме Клуберга явной гестагенной активности ной гестагенной активности . У двух . Прн анализе структурных изменений в подопытных животных гестагенная активность матке третьего подопытного кролика выявлена соответствует сильной гестагенной реакции, лиць эсгрогенная пролиферация, обозначаемая 15 Вес полового аппарата подопытных животных согласно общепринятой классификации (+). значительно увеличивается по сравнению с конт. Подобные изменения в структуре слизистой рольными кроликами (на 255,8%). оболочки матки возникают у контрольныхживотных, подвергавшихся воздействию одного Следовательно, спустя 3 дня после однократ фолликулина. ного внутримышечного введения лф 3-капроС увеличением дозы вещества до 0,6 мг нилгидразон.прегнадиенй .ол.он-ацетата специфическая активность становится более вы- выявлено наличие сильного и очень сильного раженной и соответствует явной гестагенной гестагенного действия при воздействии дозы, реакцииу двух из трех подопытных кро. равной 1 мг прогестерона, сильный и явной ликов и сильнойу одного животного. з 5 гестагенной реакции - 0,6 мг и явной спе. Гистологическая картина слизистой оболочки цифической реакции - 0,2 мг, рогов матки свидетельствует о выраженном ее .разрастании, развитчи складок слизистой со Сопоставление активности испытуемого везначительным увеличением количества желез, щества с действием прогестерона (см. табл, 2), Ввиду укаэанных изменений поверхность матки Зп для которого установлена международная приобретает выраженную складчатость с высту- единица действия, равная 1 мг, позволяет запающими в просвет ее древовидными выроста- ключить, что испытуемое вещество по своему ми, имеющими сложный извилистый койтур специфическому действию спустя 3 дня после (+н) . внутримышечного введения приближается кГистологические изменения, отмеченные прогестерону, оказьаая аналогичное влияние в матке под влиянием испытуемого вещества на структуру слизистой оболочки матки,Та блица 2Специфическая активность прогестерона послеоднократного внутримышечного введения,0 573,0 -21,7876,6 17,1 556,3,9 м е ч а н и е: Достоверность результатов определяют по отношению к контрольной группе животных, приведенной в табл, 1 ви ерона в тех же у шь явная гестаге ая ак опыт лового аппарата авших импытуемоченным по сравн 3% ГР005), п вес полового ап рно от веса поло животных, т. е,я ар огонормали не отличается достове аппарата контрольныхзуется. Табл канронилгидразонного внутримьпцеч-, гестерана Длительность специфическОй ак регнадиена.ол-он-ацетата ного введения в дозе, эквивал ивности Ьфбпосле однокнтной 1 мг Я СрокВкро-, исследоликавания,день ес полового аппарата тела,естагеня актив окончательный3 48 852 8 8 1100 С целью выяснения вопроса о длительности действия испытуемого вещества проводят серию опытов, в которой животных забивают спустя 7, 10 и 14 дней после однократного внутримышечного введения вещества в дозе, равной 1 мг, Полученные при этом результаты (см. табл. 3)35 свидетельствует о том, что через 7 дней после однократного применения вещества у всех подопытных животных обнаруживается сильная гестагенная активность,(+1+), в то время как под влиянием прогест опьгга имеет место лн тивность . Вес по ных животных, получ во, сохраняется увели контрольными на 132 нием же прогестерона745907 Таблица 4 Острая токсичность Ф.З-капронилгидразон-прегнадиенй-ол-он-ацетата при внутрибрюшинном введении Доза,мг/мышь Смертельнаядоза,(смг/кг) Гибель,в% Количество животных зятых поги опыт выжив мг/кг1 веса 500 500 6 0 50,0 ПН 1- 1 бб 3750 Л 31, 363 17При увеличении нромежугка времени после воздействия испытуемого вещества до 10 дней со стороны слизистой оболочки матки отмечается явная гестагенная реакция (у двух кроликов) и у одного животного - сильная. Вес по 5 лового аппарата при этом сохраняется увеличенным на 155,1% (Р ( 0,05). Под влиянием прогестерона в те же сроки наблюдения изменения структуры слизистой оболочки матки соответствуют лишь эстрогенной пролиферации 10 (+), т. е. гестагенная реакция отсутствует:В группе животных, забитых спустя 14 дней, после однократного внутримышечного,введения вегцества в указанной дозе, явная гестагенная реакция отмечается лищь у одного кролика ), у остальных животных специфическая реакция слизистой оболочки матки соответствует +).опоставление длительности действия испы. туемого вещества с активностью прогестерона свидетельствует о том, что Ь-3-калронил 4620 гидразон-прегнадиена -ол-он-ацетат обла. дает более выраженным пролонгированным Уэффектом. Так, если прогестерон спустя 7 дней после введения.оказывает лишь явную.25 гестагенную активность +), испытуемое вешество в той же дозе вызывает сильное гестагенное действие ), Спустя 10 дней. прогестерон не оказывает гестагенного влияния, в то время как Ьф-З.капронилгидразон. .прегнациена.ол-он-ацетат вызывает яв 30 ное гестагенное действие. Аналогичные измене. ния отмечены у некоторых животных даже спустя 14 дней после воздействия испытуемого вещества, Следовательно, длительность действия испытуемого вещества составляет в среднем 10-4 дней, в то время как прогестерона - 7 дней. 18С целью выяснения вопроса об эффектив. ности Ь". 3- кап ронилгидразон- прегнадиен.7 й .ол.20-он-ацетата при различных путях воздействия проведены опытЫ на 8 кроликах с введением вешества регоа в дозе 1 мг. Полученные результаты свидетельствуют о том, что соединение обладает явной и сильной гестагенной активностью на протяжении 1 О дней.Таким образом, полученные данные позволяют считать, что предложенное вещество обладает гестагенным действием, приближаюшимся по силе своей эффективности к прогестерону, но превышаюшим последний по длитель ности эффекта, Вещество активно при парентеральном и пероральном применении. Токсичность Ь - 3. калронилгидразон- прег. надиена-ол-он-ацетата изучают в острых опытах на 40 белых мышах самцах массой 20-22 г при однократном внутрибрюшинном введении в оливковом масле в объеме 0;5-1 мл в дозах, равных 10, 50, 75, 100 и 200 мг на мышь, что составляет соответственно 500, 2500, 3750, 5000 и 100000 мг/кг веса. На про. тяжении двух недель после воздействия учитывается выживаемость животных, а также изменения внешнего вида, веса, двигательной и пишевой активности. Результаты изучения токсичности в острых опытах (см. табл, 4) свидетельствуют о том, что введение испытуемого вещества в дозе; равной 500 мг/кг веса, не вызывает гибели животных.В состоянии подопытных мышей на протяжении всего времени наблюдения не отмечается каких-либо отклонений по сравнению с конт. рольными животными;