Штамм pseudomonas acruginosa серотип 11 n 48, используемый для изготовления псевдомонозного антигена

Штамм Pseudomonas acruginosa серотип 11 N 48 (коллекция Всесоюзного государственного научно-исследовательского института ветеринарных препаратов), используемый для изготовления псевдомонозного антигена.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к получению штаммов, используемых при изготовлении препаратов для профилактики и лечения псевдомоноза животных.
Псевдомоноз пушных зверей, в том числе норок, острое инфекционное заболевание, проявляется энзоотически, сопровождается геморрагическим воспалением, отеком легких, что чаще всего ведет к гибели животных. В настоящее время это заболевание зарегистрировано в странах, занимающихся клеточным разведением пушных зверей, в том числе и в СССР.
Возбудитель псевдомоноза обладает серотиповой вариабильностью. Данные эпизоотологических наблюдений и результаты типирования культур возбудителя псевдомоноза, выделенных от норок в разных регионах страны, показывают, что в СССР зарегистрированы преимущественно четыре серотипа возбудителя псевдомоноза, а именно 5, 6, 8 и 11 (по схеме Хабе).
В настоящее время известны штаммы Pseudomonas aeruginosa используемые для изготовления иммунных препаратов для профилактики и лечения псевдомоноза человека.
Известен также штамм Ps. aeruginosa N 202 серотипа 6, используемый для изготовления моновалентной вакцины против псевдомоноза норок.
Производственный штамм N 202 возбудителя псевдомоноза имеет нестабильные вирулентные свойства. Моновалентная вакцина, изготовленная из данного штамма, обеспечивает развитие у привитых норок устойчивость к возбудителю псевдомоноза серотипа 6, но против других серотипов этого вида возбудителя вакцина не создает иммунитета.
Целью изобретения является получение штамма Ps. aeruginosa серотипа 11 N 48, обладающего стабильными свойствами вида, используемого для изготовления псевдомонозного антигена при получении гипериммунных сывороток и вакцин.
Штамм 48 Ps. aeruginosa серотипа 11 выделен из патологического материала павшей норки в 1978 г. Штамм хранится в коллекции микроорганизмов лаборатории контроля и стандартизации препаратов, применяемых в аэрозольном состоянии Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов.
Штамм Ps. aeruginosa N 48 (лабораторный номер 1) характеризуется следующими свойствами.
Морфологические свойства. Грамотрицательные палочки со слегка закругленными краями 1,0-1,4 ммк длины и 0,6-0,8 ммк ширины расположены в хранившихся культурах по одной, а в свежепассированных встречаются в виде коротких цепочек, подвижные, спор и капсул не образуют.
Культурально-биохимические свойства. Хорошо растут на обычных (МПБ и МПА) и специальных (бульон и агар Хоттингера и Мартена) питательных средах. На плотных питательных средах в чашках Петри растет в виде круглых с сероватым оттенком колоний, вокруг которых образуется сине-зеленая зона за счет выхода в питательную среду продуцируемого пигмента пиоцианина. Штамм продуцирует слизь. Температура 37-37,5^оС является оптимальной. Культура может расти при 1-41^оС.
При культивировании на жидких питательных средах культура вызывает образование поверхностной пленки серо-белого цвета, продуцирует пигмент пиоцианин, за счет которого среда через 18-24 ч культивирования приобретает сине-зеленую окраску. Культура штамма обладает гемолитической, желатиназной, лецитиназной, каталазной активностью, ферментирует без образования газа глюкозу, пептонизирует молоко.
Потребность в кислороде. Строгий аэроб.
Антигенные и серологические свойства. Культура штамма имеет жгутиковые "Н" и соматические "0" антигены. При идентификации с сыворотками по классификации Хабс относится к серотипу 11. Иммунологическим фактором, определяющим серотип, является термостабильный антиген микробной клетки.
Вирулентные свойства. Культура штамма Ps. aeruginosa N 48 одиннадцатого серотипа обладает стабильными вирулентными свойствами. 50%-ная летальная доза (ЛД₅₀) суточной суспензии агаровой культуры составляет: для нелинейных белых мышей массой 16-18 г 86-95 млн. микробных клеток, для морских свинок массой 220-250 г 300-350 млн. микробных клеток, для тхорзофреток и норок 3-9-месячного возраста 1,5-2,0 млрд. микробных клеток.
Иммуногенные свойства. При внутримышечном способе введения анактивированная 0,3%-ным формалином суточная суспензия агаровой культуры предохраняет от контрольного заражения 50% подопытных животных: морских свинок массой 220-250 г, иммунизированных в дозе 0,063 млрд. микробных клеток, норок и тхорзофреток 3-9-месячного возраста, иммунизированных в дозах 0,25-0,5 млрд. микробных клеток.
Превентивные свойства гипериммунных сывороток, полученных к штамму. Гипериммунные сыворотки крови волов-продуцентов, полученные как к моновалентному антигену штамма Ps.aeruginosa N 48, так и при использовании его в ассоциации с другими серотипами штаммов возбудителя псевдомоноза, достигают титра 1:3200-1:6400. Защитный титр при контрольном заражении составляет для подопытных животных 1:400.
Предлагаемый штамм Ps. aeruginosa N 48 может быть использован в ветеринарной практике для изготовления моновалентной и поливалентной сыворотки против псевдомоноза сельскохозяйственных животных и пушных зверей, в том числе и норок, а также моновалентной и поливалентной вакцины для профилактики псевдомоноза норок и других сельскохозяйственных животных.
Штамм апробирован в лаборатории контроля и стандартизации препаратов, применяемых в аэрозольном состоянии, Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветпрепаратов при получении моновалентной гипериммунной сыворотки и моновалентной вакцины.
Моновалентная гипериммунная сыворотка крови волов-продуцентов при подкожном введении белым мышам массой 14-16 г в дозе 0,1 мл, морским свинкам массой 220-250 г в дозе 0,5 мл, тхорзофреткам и норкам 3-9-месячного возраста в дозе 3-5 мл предохраняет от контрольного заражения летательной дозой штамма Ps. aeruginosa N 48. Моновалентная вакцина из штамма Ps.aeruginosa N 48 возбудителя псевдомоноза при внутримышечном введении морским свинкам массой 300-350 г в дозе 0,063 млрд. микробных клеток, тхорзофреткам и норкам годовалого возраста в дозах 0,125 млрд. микробных клеток предохраняла от контрольного заражения подопытных животных летальной дозой штамма N 48.
Использование штамма Pseudomonas aeruginosa N 48 при изготовлении препаратов для профилактики и лечения псевдомоноза норок позволит предупредить возникновение, а в случае возникновения распространение псевдомоноза среди пушных зверей, в том числе среди норок и других сельскохозяйственных животных в очаге инфекции, а следовательно, сохранить высокоценных пушных зверей и других сельскохозяйственных животных для народного хозяйства.