Штамм энтерококков sтrертососсus fаесiuм, используемый для приготовления бактерийных препаратов

"С 1; 31"Г ПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ исбакретецзщнй воичи(56) Патент США Р 3 кл, А 23 К 1/00, 19Руководство по в вороточному делу,/11 гасова, М.: 1978, с 1383 цинному и сыред. П.Н.Бур-101 е с ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЦТИЯМПРИ ГКНТ СССР Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) 2-й Московский государственный медицинский институт,(54) ШТАММ ЗНТЕРОКОККОВ БТЕЕРТОСОСС 118РАЕСТК 1, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙНЫХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использованодля изготовления бактерийных лечебных препаратов, применяющихся с Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при:изготовлении бактерийных лечебных .препаратов, применяющихся для профи-лактики и лечения дисбактериозов ки,шечника.Целью изобретения является штаммЯйтерососсиз йаесицп УДС, обладающий высокой антагонистической,кислотообразующей активностью, естественной не плаэмидной устойчивостьюк антибиотикам, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры,Штамм Згерососсиз йаесюш УДС выделен иэ кишечника здорового человека и депонирован в коллекции(51)4 С 12 Б 1/20, А 61 К 39/09 // (С 12 И 1/20, С 12 й. 1:46) целью профилактики и лечения д териозов кишечника. Целью иэоб ния является штамм Бсгерсососс йаесжш ВКПМ 9 В, обладаю высокой антагонистической акти ностью, эффективный для коррек кишечной микрофлоры. Штамм обл естественной не плазмидной уст востью к акнтибиотикам, Для получения препарата штамм засевают на жидкую среду Калины. Выросшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при 3,5 тыс, об/мин при4 С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой воде или физиологическом растворе до концентрации1 х 10 клеток в 1 мл. 0,5 мл такойсуспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека. Штаммбезвреден, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах. 3 табл. айкультур промышленных микроорганизмов црВНИИгенетика под номером В.Штамм Бгерйососсиз Гаесцш ВКПМ. Вхарактеризуется следующимиваЬсвойствами,Культурально-морфологические свой- фства. Клетки кокковидной формы, рас"полагаются в мазке попарно или короткими цепочками, грамположительны,спори капсул не образуют.При росте в мясо-пептонном бульо- ейне с глюкозой и дрожжевым экстрактом,(МПБ) дают равномерное помутнение иосадок. На плотной среде (кровянойагар, мясо-пептонный агар) растут ввиденепрозрачных сероватых колонний1 л10 г20 г 50 20 г 3 1497211с ровными краями диаметром 1-2 мм.Колонии легко снимаются с агара,равномерно эмульгируются в физиологическом растворе хлористого натрия.На среде Калины растут в виде голубых непрозрачных колоний с равнымикраями.Физиологические свойства. Аэробы,при культивировании в МПБ при 37 Счерез 18-20 ч после посева в 1 млсреды вырастает 5 х 10 З - 1 х 10живых клеток. По мере роста культурыснижается рН среды, кислотность поТернеру за 24 ч культивирования достигает 250-270 Т.Биохимические свойства. Сбраживает мальтозу, целлобиозу, сахарозу,лактозу, маннит, салицин, маннозу,1-арабинозу, не сбраживает Д-арабинозу, сорбит, рафинозу, рамнозу, глицерин, ксилозу, инозит, дульцит.Штамм хорошо растет на средах сдобавлением желчи.Не дает гемолиза при росте на кровяном агаре,Устойчивость штамма БсгергососсцзЕаес 1 цш ВКПМ МВк антибиотикам.Минимальная ингибирующая концентра,ция, мкг/мл: линкомицин 1,0, левомицетин 10,0, нитроксолин 100,0; гентамицин 4,0 ф нистатин 100,0; олеандомицин 1000,0, полимиксин 50000,канамицин 10000,0, клафоран 1000,0,ампициллин 1.,0,35Штамм обладает антагонистическойактивностью по отношению к стафилококку, К. 1 еЬзе 11 а, Е. со 11 011, )Б. ЙцЬ 11 пд БЬ. Еоппае, Рг. шхгаЪ.Состав сред для выращивания 40Бг. йаесцш ВКПМ ИВ."Мясо-пептонныйбульонГлюкозаДрожжевой экстракт45рН 7,0-7,4Стерилизация 30 мин при 0,5 атм.Среда Вгап НеагТ Лпйцзоп (Пансо)Среда Вгап Неагг Лпйцзхоп (ЭИсо)с добавлением 23 агара.Мясо-пептонныйбульон 1 лГлюкоза 10 гДрожжевой экстракт55с добавлением 2 Еагата.Среда Калины,Кровяной агар,Лабораторная проверка показаланепатогенность Бг. наес.цш ВКПМБВдля экспериментальных животных (мьпдей, крыс, морских свинок).,а также для людей.П р и м е р 1. Получение бактерийного препарата на основе БгерСососсцз Йаесыш ВКПМ БВ.Штамм засевают на жидкую средуКалины. Выросшую 1-суточную культуруэнтерококков центрифугируют при3,5 тыс, об/мин при 4 С в течение20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой и остуженной до комнатнойтемпературы воде или физиологическом растворе хлористого натрия доконцентрации 1 х 101 кл/мл. 0,5 млтакой суспензии составляет 1 дозупрепарата для взрослого человека прииспользовании его для коррекции микрофлоры.Препарат из энтерококков можетбыть получен в лиофилизированномвиде .(ампулы, флаконы, таблетки)П р и м е р 2. Изучение влиянияБгг. Еаесдцш ВКПМ ИВна микрофлору кишечника мышей при химиотерапевтическом дисбактеризе,Мыши линии СВА быди разделены надве группы: опытную и контрольную.Животным обеих групп вводят интрагастрально ампиокс в дозе 4 мг/мьпдьв течение 5 дней. Опытной группе с1 го по 10-й день от начала эксперимента вводят интрагастрально энтерококк (штамм ВКПМ ИВ) в количестве 5 х 108.клеток на мьппь. Животные контрольной группы вместоштамма энтерококков получают физиологический раствор в соответствующем объеме.1В результате изучения микрофлоры толстого кишечника на 1-й и 6-й день после отмены антибиотика было отмечено,.что пероральное введение животным штамма энтерококков обеспечивает эффективную нормализацию микрофлоры: уровень энтеробактерий на 6-й день составил 1 я 8,573+0,452 кл/г материала, в контрольной группе 1 я 10,028+0, 111 кл/г, в то же время у животных опытной группы увеличивается содержацие лактобактерий в толстом кишечнике - 1 я 8, 176 + + 0,048 кл/г, в то время как у животных контрольной грчппы их число в основном не превьппает 1 я 6,948 + +0,054 кл/г514Результаты представлены н табл.1.П р и м е р 3 Влияние препарата энтерококков ЯгерСососсцз Йаес 1 цщ на восстановление микрофлоры кишечника при химиотерапевтическом дисбактериозе, обусловленном применением высоких терапевтических доз ампиокса.Две группы мышей линии СВА (опытная и контрольная в течение 5 дней интрагастрально получают антибиотик в дозе 20 мг/мышь в сутки. Животным опытной группы с 1-го по 10-й день от начала эксперимента интрагастрально вводят штамм энтерококков ВКПМ ИВв количестве 5 х 10 клеток8 на мышь. Животные контрольной группы вместо энтерококка получают физиологический раствор.На 1-й и 6-й день после отмены ампиокса изучают микрофлору толстого кишечника. Полученные результаты свидетельствуют, что пероральное введение животным штамма энтерококков ВКПМ БВтакже обеспечивает нормализацию микрофлоры; уровень энтеробактерий в толстом кишечнике на 6-й день после отмены антибиотика у опытных животных составил 1 я 8,874+ +0,111 кл/г, в контрольной группе - 1 я 9,702+0, 167 кл/г, увеличивается содержание лактобактерий в толстом кишечнике у животных опытной группы - 18 8,018+0,121 кл/г, у животных контрольной группы их число снижается и не превышает 1 я 6,932+0,286 кл/г.Количество энтерококков у животных опытной группы на 6-ой день после отмены антибиотика составляет 1 я 8,013+0,092 кл/г, что в 10 раз превышает количество энтеробактерий у животных контрольной группы 1 я 7,430+0,191 кл/г.Результаты представлены в табл,2.П р и м е р 4. Влияние энтерококков на микрофлору кишечника при постлучевом дисбактериозе.Беспородных мышей облучают. в дозе 700 Р, После облучения животных разделяют на две группы. Животные опытной группы получают взвесь антерококков интрагастрально через день в количестве 5 х 10 клеток на мышь на97216 Таким образом, штамм энтерококков БСгерососсцз наес.цш ВКПМ ИВ обладает полезными свойствами, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах, безвреден и может быть использован в практическом здравоохранении в качестве бактерийного препарата. 40 45 Формула изобретения 50 Штамм энтерококков БСгер 1 ососсцз Йаес 1 цш ВКПИ ИВ, используемый для изготовления бактерийных препаратов. протяжении 15 дней. Животные контрольной группы вместо бактерийнойвзвеси получают физраствор.5На. 10-й день после облучения излучают микрофлору тонкого и толстогокишечника, опытной и контрольнойгруппы животных,Результаты приведены в табл.3.10 Применение штамма энтерококка уоблученных животных приводит к коррекции дисбиотических изменений, развившихся у животных после облучения:снижению количества энтеробактерий15 и стафилококков по сравнению с животными контрольной группы и увеличению у них количества лактобактерий. На 10-й день после облученияу животных контрольной группы в20 толстом кишечнике количество энтеро-:.бактерий, энтерококков, стафилокок 9ков, лактобактерий составляет 10107 - 10 10 - 108, 10 - 10 кл/гсоответственно, у животных опытной25 группы количество энтеробактерий снижается до 10 -10 кл/г, стафилококков7 8до 10 -10 кл/г (что соответствует4показателям нормофлоры), количествоэнтерококков увеличивается до 108109 кл/г: лактобактерий до 10 кл/г.9В тонком кишечнике у животных,получавших энтерококки, на 10-й деньне определяются стафилококкимоло оло СЬ О л Сфо с.Е о о о о о о о и а Э н и У 1х Е х 1 д И х х 6 1 х Е х ЭЭ д Хм 6 Е ох О О о о 4 х Э ф о И И о о а Э х Э Е Е од оц хе х Е а 1о хх Е Э 3 Г) х о 6 о ф М о ж И Е Э о х х 1 6 Е х х Е о г Х 4 х ц 6 л о х о х Е о Э о х 1 х Х 6 И С о о 1оа 4Э:Х ЦЭ дЕЭ3 и ЕП Э .4ооЭ Цл фЭ фя охо ие.х оодх о э ф- фоа оиэ И И ы- о о х и о й х 1 Э 6 К 6 Ю ЦЭ 6 Ъ 6 о е л э о д Х Х 4 Е Л а.й хЭ 0х эх еХФ хо хх оа 3 0дхЯ е.- Е40 аэач Еоя ххо оом оаЭ 0н ос л фо ох хх ао еМо иа аЭ ОЕе оХа 0а ЭИЭ И1497211 Ф Ф ф ФО ООО Х Х Х Х М ММ И е йООООО ФОООЬОФфл юфе м л л л л л) Щс 4 О 1 ОФ О Ж О 34 О ООООО Х И Х К ХсфЪ СЬ Оъ О в л л л л ".М сО Ф О у ф ю файф + Ь ОООО Ф 1 г + О О О О И Й Х Х Х ОЛОР 4 Ф л л л л л ф ф Я) сф (4 ь ь ь Ф чф, О О Ф +бфО О ООО Х Х Х Х,И О Ф ф-ОО Х Х, Хф 4ОсчООф л лф ч лмффб Ффф Дффф л л аС 4 М Ф Ф ф ф )ц О ОООО ХХХХХ ЧОСОФО л л л л лф ММЩО О Вф Х ЮООфЧЮл л л а бф 3 ф ЮфФФ лл лИ сО Ю е - Е, Ф ООООО Ь+ффОООО Х Х Х Х ОИОФ а л л л еЧ с 4 3 . 4 О ФООф 4 л л л л лф г 4 СЧ щ ф о ф фОООО Х И Х 34 фХ Х чР РСЧ О Оюс л й л 4 Ч мф ф Ф ФфИ И Х:К Х ф фф фб фЪ Ю МООО е л в л (Ч ф С 4 цЪ Оййь л л у ди ф Ц И О Ь 3 ь и и о ь вв а ий И Х Хф 4.ЯООООфф" л л л лс, Щ ф 1 ф .фЛ 4 Г м ООООО 4 с 13"э о о о о ХХХХ Э ф чье ОО ОО Х Х И К Хнабы и ОО О,ОО