Способ получения двуслойного материала

ЕТЕН ПАТЕН 44йловна; Сачкова Ири Я ДВУСЛОЙНОГО едицине, а именно при тканей. Сущность. смеульфат и хондроитин- (1: 100) - (100: 1). К ют коллаген при соотно- (1: 1) - (1: 100). Массу Г) же Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам(46) 30.11.93 Бюл. Кю 43(76) Ильина Татьяна МихаАнатольевна(57) Использование: в мпластике дефектов мягкишивают хондроитин-6 - сульфат в соотношениполученной смеси добавлшении смеси и коллагена СВ) Ю 0 (11) 20 ОЗЗ(Я 1) 5 А 61 Е 15 44 гомогенизируют, замораживают и лиофильно высушивают. Полученные губки обрабатывают гпутаро - вым альдегидом, повторно лиофипьно высушивают. Затем совмещают с силоксаноеой пленкой с паропроницаемостью 0.01-50 мг/см /ч. Готовый продукт упаковывают и стерипизуют. Двухслойные ма - териалы, получаемые заявленным способом, ускоряют прорастание их грануляционной тканью, а именно увеличивают содержание ДНК до 1.602+ 0.03 мг по сравнению с 1230+ 0.02 мг у прототипа и сокращают частоту отторжения в среднем в 5 раз.Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к способам получения материалов медицинского назначения, которые могут быть использованы для пластики дефектов мягких тканей,Известен способ получения двухслойного покрытия. Способ состоит в том, что получают коллагеновый слой, на который наносят силикон, Коллагеновый слой получают следующим. образом: 0,55 г коллагена добавляют к 200 мл 0,05 М уксусной кислоты при перемешивании, 0,044 г хондроитин- сульфата растворяют в 40 мл 0,05 М уксусной кислоты и добавляют к коллагену, смесь гомогенизируют, центрифугируют 1 ч при 1500 об/мин и 4 С. Сливают 140 мл центрифугата, остаток центрифугата и осадок гомогенизируют, замораживают при -450 С и лиофильно высушивают 24 - 48 ч, На полученные коллагеновые губки наносят раствор силикона, который полимеризуется в течение 24 ч при 24 С, Двухслойное покрытие стабилизируют в растворе глутарового альдегида и хранят в 700/О-ном растворе изопропилового спирта при 4 С,Недостатком указанного способа является низкая скорость прорастания материала (по уровню накопления ДНК, РНК, неколлагеновых белков и частоте отторжения),Целью изобретения является ускорение прорастания материала. Ускорение и рорастания материала достигается за счет использования в качестве 1-го слоя смеси хондроитин-сульфата и хондроитин-б-сульфата, которая в процессе фибриллообразования с коллагеном формирует структуру, соответствующую по составу и функциональным свойствам межклеточному матриксу, стимулирует миграцию в эту структуру клеток, их пролиферацию и повышение биосинтетической активности; за счет исйользования в качестве 2-го слоя синтетической полимерной пленки путем оптимизации скорости испарения раневого эксудата, т,е. такого уровня паропроницаемости, при котором не нарушается контакт материала с тканями дефекта, как из-за дегидратации материала, так и из-за избыточного скопления раневого эксудата под ним. Способ осуществляется путем смешивания хондроитин-сульфата и хондроитин-б-сульфата, взятых в соотношении (1:100) - (100:1), к этой смеси добавляют коллаген при соотношении смеси и коллагена (1:1)-(1;100), полученную массу лиофильно высушивают и совмещают с синтетической полимерной пленкой, паропроницаемость которой составляе 0.01 - 50 мг/см /ч.2ну и фиксировали повязкой в течение одних 40 суток, затем повязку снимали. Процессыпрорастания двухслойного материала оценивали по результатам биохимического анализа ДНК, РНК и неколлагеновых белков в грануляционной ткани, прорастающей в ма териал на 10 сутки, а также по частоте отторжения материала от тканей дефекта в течение 10 суток от момента операции (в процентах). Терапевтическое действие двухслойного материала сравнивали с по крытием-прототипом. Полученные результаты статистически обработаны и представлены в таблице.П р и м е р 1, Смешивают 1 г хондроитин-сульфата и 100 г хондроитин-б-суль фата при соотношении 1:100. К 100 гполученной смеси добавляют 100 г коллагена. Соотношение смеси и коллагена 1:1, Массу гомогенизируют 15 мин, замораживают при -40 С и лиофильно высушивают в течение 8 ч, Полученные губки обрабатыва 1020 2530 35 Отличительными признаками способа по изобретению являются: использование смеси хондроитин-сульфата и хондроитин-сульфата; применение синтетической полимерной пленки с паропроницаемостью 0,01 - 50 мг/см /ч; новая последователь 2ность процесса, а именно совмещение 1-го и 2-го слоев проводят после обработки глутаровым альдегидом.Сущность способа состоит в том, что смешивают хондроитин-сульфат и хондроитин-сульфат в соотношении (1:100) - (100:1), К полученной смеси добавляютколлаген при соотношении смеси и коллагена (1:1) - (1:100), Массу гомогенизируют, замораживают при -40 С и лиофильно высушивают 8 ч, Полученные губки обрабатывают глутаровым альдегидом, повторно лиофильно высушивают 8 ч. Затем совмещают с синтетической полимерной пленкой с паропроницаемостью 0,01-50 мг/см /ч. Го 2 товый продукт упаковывают и стерилизуют,В качестве синтетического слоя могут быть использованы пленки на основе уретанового или силоксанового каучука, например пленка уретановая модифицированная СКУ-М ЕДТУ-103651-88 и пленка силоксановая медицинская для замещения твердой мозговой оболочки ТУ-103663-88.Медико-биологическое изучение репаративного действия двухслойного материала проведено на 190 морских свинках массой 3000 г по 10 животных в каждой группе. Животным под наркозом в асептических условиях на спине в межлопаточной области наносили полнослойную кожную рану площадью 400 мм (по трафарету).2Двухслойный материал накладывали на ра 2003348ют глутаровым альдегидом, повторно лиофильно высушивают 8 ч, Затем все количество губок делят пополам: одну половину губок совмещают с силоксановой пленкой 510 ТУ-103663-88, другую половину - с уретановой пленкой СКУ-МЕДТУ-103651-88. Паропроницаемость синтетических пленок 0,01 мг/см /ч. Двухслойный материал упаковываютт и стерилизуют.20 морским свинкам под наркозом в эсептических условиях на спине в межлопаточной области наносят полнослойную кожную рану площадью 400 мм (по трафарету),210 животным (1 группа) накладывали двухслойный материал, совмещенный с силоксановой пленкой, и 10 животным (2 группа) - двухслойный материал, совмещенный с уретановой пленкой. Двухслойный материал фиксировали повязкой в течение одних суток, затем повязку снимали. На 10 сутки двухслойный материал иссекали из области дефекта, снимали с него синтетическую пленку, гомогенизировали коллагеновый слой и проводили биохимический анализ 15 20 25 30 полученного гомогенэта,В 1-й группе содержание составило; ДН К,586-ф 0,05 м г; РН К,427+0,038 мг; неколлагеновых белков (НКБ) = 84.1+5,1 мг.Во 2-й группе содержание составило: ДНК = 1,5410,04 мг; РНК = 1,398-0,03 мг; НКБ = 86,2+4,7 мг.Частота отторжения двухслойного материала от тканей дефекта в 1 и 2 группах составила 10%.П р и м е р 2. Смешивают 100 г хондроитин-сульфата и 1 г хондроитин-сульфата при соотношении 100:1. К 1 г полученной П р и м е р 3. Смешивают 40 г хондроитин-сульфата и 60 г хондроитин-сульфата при соотношении 4:6. К 1 г полученной смеси добавляют 50 г коллагена. Соотношение смеси и коллагена 1:50, Массу гомогенизируют 15 мин и далее поступают как описано в примере 1, Паропроницаемость пленок 10 мг/см /ч.2 55 смеси добавляют 100 г коллагена. Соотношение смеси и коллагена 1:100, Массу гомогенизируют 15 мин и далее поступают как 40описано в примере 1, Паропроницаемостьпленок 50 мг/см /ч,2В 3-й группе содержание составило;ДНК = 1,602 + 0,03 мг; РНК = 1,461+09,02мг; НКБ = 88,6 6,3 мг. 45В 4-й группе содержание составило;Д Н К = 1,579 +0,017 м г; Р Н К = 1,422 -0,023 м г;НКБ 87,2+5,2 мг,Частота отторжения в 3 и 4 группах составила 10%, 50 В 5-й группе содержание составило:ДН К = 1,613 -0,05 мг; Р Н К = 1,520+0,04 мг;НКБ =- 89,3+6,6 мг,В 6-й группе содержание составило:ДНК = 1,595-0,036 мг; РНК = 1,498+0,047мг; НКБ = 85,0+5,4 мг.Частота отторжения материала в 5 и 6группах составила 10%.П р и м е р 4, Смешивают 0 г хондроитин-сульфата и 100 г хондроитин-сульфата (чистый хондроитин-сульфат) присоотношении 0:100, К 100 г полученной сме-,си добавляют 100 г коллагена. Соотношениесмеси и коллагена 1:1. Массу гомогенизируют 15 мин и далее поступают как описано впримере 1. Паропроницаемость пленок0,01 мг/см /ч.В 7-й группе содержание составило:ДНК = 1,221".0,03 мг; РНК = 1,116+0,017 мг;НКБ = 51,3.+4,3 мг,В 8-й группе содержание составило:ДНК = 1,189-0,02 мг; РНК = 1,110-0,015 мг;НКБ = 48,7 3,0 мг,Частота отторжения материала в 7 и 8группах составила 40%,П р и м е р 5. Смешивают 100 г хондроитин-сульфата и 0 г хондроитин-сульфата (чистый хондроитин-сульфат) присоотношении 100;О, К 1 г полученной смесидобавляют 100 г коллагена, Соотношениесмеси и коллагена 1:100, Массу гомогенизируют 15 мин и далее поступают как описанов примере 1. Паропроницаемость пленок50 мг/см /ч.В 9-й группе содержание составило:Д Н К = 1,200 .0,02 м г; Р Н К = 1,108 +0,011 мг;НКБ = 52,4-3,7 мг,В 10-й группе содержание составило:ДНК = 1,212-0,013 мг; РНК = 1,179+0,01 мг,Н КБ = 54 1 -4 1 м гЧастота отторжения материала в 9 и 10группах составила 40%.П р и м е р 6, Смешивают 1 г хондроитин-сульфата и 100 г хондроитин-сульфата при соотношении 1:100. К 1 гполученной смеси добавляют 0 г коллагена(чистая смесь хондроитинсульфатов), Соотношение смеси и коллагена 1;О. Массу гомогенизируют 15 мин и далее поступают какописано в примере 1. Паропроницаемостьпленок 0,01 мг/см /ч.В 11-й группе содержание составило,ДНК = 0,965.0,01 мг; РНК = 0,883.+0,01 мг;НКБ =46,6-2,8 мг,В 12-й группе содержание составило:ДНК = 0,981.0,01 мг; РНК = 0,891+0,013 мг;НКБ = 48,0,5 мг,Частота отторжения в 11 и 12 группахсоставила 50%, 7 2003348П р и м е р 7, Смешивают 100 г хондроитин-сульфата и 1 г хондроитин-сульфата при соотношении 100:1. К 1 г полученнойсмеси добавляют 150 г коллагена. Соотношение смеси и коллагена 1:150. Массу гомогенизируют 15 мин и далее поступают какописано в приме 2 ре 1. Паропроницаемостьпленок 50 мг/см /ч.В 13-й группе содержание составило:ДНК=1,014+0,012 мг; РНК=0,914+0,01 мг, 10НКБ -47,2+,1 мг,В 14-й группе содержание составило:ДНК =0,978+0,01 мг; РНК 0,903+0,014 мг;Н К.Б = 48,5,7 мг,Частота отторжения в 13 и 14 группах 15составила 40,П р и м е р 8. Смешивают 1 г хондроитин-сульфата и 100 г хондроитин-сульфата при соотношении 1:100. К 100 гполученной смеси добавляют 100 г коллагена, Соотношение смеси и коллагена 1:1.Массу гомогенизируют 15 мин и далее поступают как описано в примере 1. Паропроницаемость пленок 0,001 мг/см 2/ч,В 15-й группе содержание составило: 25ДНК=1,208 ф 0,02 мг; РНК,181+0,017 мн;НКБ = 45,1+2,2 мг.В 16-й.группе содержание составило:ДНК = 1,187+0,021 мг; РНК,169+О,016 мн,НКБ = 47,3:+2,0 мг. 30Частота отторжения в 15 и 16 группахсоставила 70%,П р и м е р 9, Смешивают 100 г хондроитин-сульфата и 1 г хондроитин-сульфата при соотношении 100:1. К 1 г полученной 35смеси добавляют 100 г коллагена. Соотношение смеси и коллагена 1:100, Массу гомогенизируют 15 мин и далее поступают какописано в примерке 1. Паропроницаемостьпленок 100 мг/см /ч. 40В 17-й группе содержание составило:ДНК,766+0,007 мг; РНК = 0,611+0,004 мг;Н КБ 40,5+1,8 мг. В 18-й группе содержание составило, ДН К = 0,811 4-0,005 мг; РН К = 0,724 М,ООЗ мг; НКБ 41 1 й 1 7 мгЧастота отторжения в 17 и 18 группах составила 60 о ,П р и м е р 10 (прототип). В 19-й группе содержание составило: ДН К = 1,230+0,02 мг; РНК = 1,200+0,017 мг; НКБ = 55,7+3,4 мг,Частота отторжения материала-прототипа в 19 группе составила 60 о .Таким образом, двухслойные материалы, состоящие иэ коллагена, хондроитин- сульфата, хондроитин-сульфата и синтетической (силоксановой или уретановой) пленки и полученные способами, описанными в примерах 1, 2 и 3, приводят к указанной цели, а именно ускоряют прорастание материала грануляционной тканью путем достоверного увеличения содержания клеток (ДНК), их биосинтетической функции (РНК), синтеза неколлагеновых белков (НКБ), а также эа счет сокращения частоты отторжения материала от тканей дефекта до 10%,Двухслойные материалы, полученные способами, описанными в примерах 4 - 10 не приводят к указанной цели, а именно не ускоряют прорастание материала грануляционной тканью, так как не стимулируют накопление клеток (ДНК), их биосинтетическую активность(РНК), синтез неколлагеновцх белков (НКБ),а также за счет высокой частоты отторжения материала от тканей дефекта (40-70 о ) по сравнению с материалами, полученными в примерах 1, 2 и 3 (рО;05).р -достоверность различий результатов в примерах 2-10 по сравнению с результатами. примера 1.сйо оо ол фа лф оь ф о с) о ( о о2003348 сй О) о в со о о д о о ч о со сч Н чН ч с 11а 1 Л Ло о сро со Я о счо Л Л Ж о сч: о о , о о ".о со с о т- сс) с,); иъ сф)о о со о о Жоо вчд Тч ф ч14 2003348 13 М)о сч о Ло во оЧ та л е о М 1 а Д оПроизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 Ф ар мул а и зоб рете н ияСПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДВУСЛОЙНОГО МАТЕРИАЛА путем смешения хондроитин-сульфата и коллагена, лиофильного высушивания полученной смеси, совмещения с силиконом и обработки глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что в качестве хондроитинсульфата используют смесь хондроитин-сульфата и хондроитин-сульфата в соотношении 1; 100 - 100 ; 1, к этой смеси добавляют коллаген при соотношении смеси и коллагена 1: 1 - 100, обрабатывают глутаровым альдегидом, а затем совмещают с силоксановой пленкой с паропроницаемостью 0,01 - 50 мг/см/ч.