Средство для определения метаболитов в биологической жидкости

,13 У КП повыше олоск Х ОЕ) арл НИЯ МЕТАБООСТИк биохитупающие эа чатого слоя ы, 1 табл. пределы слоев зоны с на носитель. 2 з.п.ф ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ ССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТ(71) Берингер Маннхайм Пя(72) Анэельм Роте, Адольфи Бернвард Сойка (ОЕ)(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЛИТОВ В БИООГИЧЕСКОЙ ЖИД(57) Изобретение относитс мии. Цель изобретения точности определения. поливинилхлорида накл иэ фильтровальной бум рованной силиконовым накладывают полоску и ного слоя, на котором состоящий иэ высушенн держащей реагенты пол вой дисперсии. На эти вают нейлоновую сетку плавящегося клеящего лиамида наклеивают вы адывают полоску ги, гидрофобиаслом. Затем поликарбонат- находится слой, й водной, со-, винилпропионослои накладыи с помощью ещества иэ поИзобретение относится к медицине,а именно к испытательным средствам,предназначенным для установки компонентов в жидкой пробе,5Цель изобретения - повышение точности определения.Цель достигается за счет использования сетки, фиксированной на носителе и закрывающей индикаторный слой,19при этом сетка выполнена из нитейтолщиной 20-200 мкм, а величина открытой поверхности индикаторного слоясоставляет 40-807 от его общей поверхности, 5П р и м е р 1, Изготовление испытательной пленки, чувствительной кглюкозе.20 КУ оксидазы глюкозы, 80КЦ пероксидазы, 5 мл 1 М порошка 20цитрата (рН 5), 0,13 г алгината Ма,13 г дисперсии поливинилпропината(503-ная), 0,375 г тетраметилбензидина (3, 3, 5, 5), 0,1 г 1-фенилсемикарбацида, 1 г диоктилнатриума 25сульфоянтарной кислоты, 5 мп метоксиэтанола, 10 г геля кремния, 12 мл воды обрабатывают до гомогенной массыи через зазор шириной 0,1 мм наносятна поликарбонатную пленку толщиной00 мк, Полученную таким образомпленку разрезают на полоски шириной6 мм, каждую полоску обклеивают с помощью двусторонней клеящей лентывблизи одной продольной кромки полоской шириной 6 см из поливинилхлоридной пленки толщиной около 0,5 мм.Затеи разрезают поперек к обклееннойполосе на куски шириной 6 мм,Если полученные таким образом испытательные полоски на короткое времяпогружаю-, в содержащую глюкозу мочу, то после реакции, длящейся 1 мин, получается зависящее от концентрации глюкозы ступенчатое, от зеленого до сине-зеленого, окрашивание, Несмотря на тщательное снятие испытательных полосок с края сосуда для проб испытательная площадка окрашивается неравномерно иэ-эа неравномерной толщины отстающей пленки жидкости, причем из-за предотвращения доступа воздуха к местам, в которых находится утолщенная пленка жидкости, реакция идет более слабо, После 5 мин, в течение которых жидкостная пленка полностью55 высушивается, эти места иэ-за более высокой концентрации, напротив, окрашиваются более интенсивно. Равномерное окрашивание можетбыть достигнуто тогда, когда испытательную полоску погружают в испытуемый раствор на 30-60 с, а затем послеизвлечения тщательно сушат путем обтирания мягкой ватой и считывают реакцию через одну минуту.П р и м е р 2, Изготовление гидрофобного слоя.Фильтрующая бумага пропитываетсяраствором, содержащим 50 мл силиконовой смолы ИК 15 а (Чассег), 5 мл отвердителя (10 Е алюмоацетилацетонатав толуоле), 1 л бутилэфируксуснойкислоты, и высушивается при 130 .Полученная таким образом гидрофобная бумага режется аналогичнопримеру 1 на полоски шириной 6 мм инаклеивается на поливинилхлориднуюпленку. Другой липкой лентой индикаторная пленка согласно примеру 1 закрепляется на гидрофобной бумаге иснова режется поперек к этим лентамна полосы шириной 6 мм.Если полученные таким образомполосы погрузить в содержащую глюкозу мочу, то можно наблюдать, чтомостик мочи, находящийся рядом с контролирующим участком, быстро отсасывается через гидрофобную бумагу иудаляется, в то время как возможнаянеравномерная пленка жидкости наиспытательной пленке, как в примере1, отстает и медленно высыхает. Реакции с различными концентрациями глюкозы и неравномерное окрашивание полностью соответствуют наблюдениям согласно примеру 1.П р и м е р 3. Изготовление средства для контроля глюкозы,На полоску из поливинилхлоридатолщиной 0,5 мм и шириной 6 см (первый носитель) накладывают согласнопримеру 1, отступив от продольнойкромки на 3 мм, полоску шириной 6 мми толщиной 0,5 мм, выполненную иэфильтрующей бумаги, гидрофобированной силиконовым маслом согласно примеру 2 (второй всасывающий слой) ина нее накладывают также шириной 6 ммполоску из поликарбонатного слоя толщиной 100 мк (не пропускающий третийжидкость слой), на котором находитсяслой, состоящий иэ высушенной водной,содержащей реагенты поливинилпропионовой дисперсии толщиной 0,1 мм согласно примеру 1 (индикаторный слой).На эти слои накладывают нейлоновуюсетку шириной 12 мм (с толщиной нитей 60 мк и площадью отверстий 457,) (пятый сетчатый слой) и с помощью плавящегося клеящего вещества иэ полиамида, температура плавления которого5 50 С, наклеивают выступающие за пределы слоев зоны сетчатого слоя на носитель 1 прокатыванием нагретого доО90 С стального валка, имеющего диаметр 20 см. После этого полоску делят поперек на отдельные куски шириной 6 мм.Если полученные таким образом полоски опустить на 1 с в мочу и стряхнуть их легко о край сосуда с пробой, то можно установить, что находящиеся рядом с контролирующим участком мостики жидкости быстро отсасываются, и поверхность устройства, которая была вначале блестящей из-за пленки жидкости, находящейся между ячейками сетки, через 2-5 с становится матовой, так как излишки жидкости отсасываются с контролирующей поверхности через 25 гидрофобную бумагу. В отличие от испытаний по примерам 1 и 2 вся поверхность пленки окрашена (в зависимости от концентрации глюкозы) более или менее сильно, однако равномерно.П р и м е р 4. Изготовление предлагаемого средства.Согласно примеру 1 на полихлорвиниловую пленку с одной стороны наносится слой плавкого клеящего вещества, на который поочередно слоями укладываются полоса гидрофобной бумаги (согласно примеру 2), полоса пленки, используемой для проведения глюкоэных испытаний (согласно примеру 1) и сетка шириной 12 мм (с толщиной нитей 20 мкм и открытой поверхностью индикаторного слоя, составляющей 807). С помощью нагретого валика, имеющего в месте расположения испытательной пленки выемку глубиной 2 мм, нейлоновая сетка прижимается с обеих сторон к испытательной пленке и закрепляется посредством плавкого клеящего слоя, После этого средство разреза- ется на полоски шириной 6 мм.П р и м е р 5, Изготовление предлагаемого средства.Согласно примеру 1 на полихлорвиниловую пленку с одной стороны наносится слой плавкого клеящего вещества, на коорый поочередно слоями укладываются полоса гидрофобной бумаги (согласно примеру 2), полоса пленки, используемой для проведенияглюкоэных испытаний (согласно примеру 1), и виниловая сетка шириной12 мм (с толщиной нитей 200 мкм иоткрытой поверхностью индикаторногослоя, составляющей 407,), С помощьюнагретого валика, имеющего в местерасположения испытательной пленкивыемку глубиной 2 мм, нейлоновая сетка прижимается с обеих сторон к испытательной пленке и закрепляется посредством плавкого клеящего слоя,После этого средство разрезается наполоски шириной 6 мм,Средства, изготовленные по примерам 4 и 5 приобретают при их погружении в глюкоэосодержащую мочу равномерную окраску, соответствующую окраске средств, полученных по примеру 3.П р и м е р 6. Исследование продуктов на реакцию с водными растворами глюкозы.1. Стандартные испытательные полосы для глюкозы изготовленные по из)вестному способу. Эти полосы состоятиэ пластмассовых полос шириной 5 мм,длиной 8 см, на нижний конец которыхнаклеена испытательная эона 5 х 5 мм.Она состоит из двойной липкой лентыдля фиксации гидрофобной бумаги, второй двойной липкой ленты для связывания и реактивной бумаги.2. Испытательная для глюкозы полоса, в которой реактивная пленка(6 х 6 мм) согласно примеру 1 с помощью двойной липкой ленты приклеенана пластмассовую полосу.3. Испытательная,для глюкозы полоса, которая изготовлена согласно примеру 3,Испытательные полосы (до 10) погружают в водные растворы глюкозы указанных концентраций и путем обрывания кромки на краю пробирки освобождаются от избыточного субстратаЧерез 1 мин измеряется обесцвечивание с помощью ремиссионного фотометра в виде 7. ремиссии при 500 нм. Хотя в качестве области измерения измеряется круговой сектор испытательного участка диаметром примерно 4 мм, показано, что наблюдаемые визуально пятна в полосахи 2 приводят к сильному разбросу значений измерений, т.е. низкой точности. Предлагаемая полоса равномерно окрашена и даетнезначительный разброс измеренных значений,П р и м е р 7, Для изготовления пленки для определения холестерина в сыворотке приготавливают дисперсию со следующим составом:Целлюлоза, г 5Поливинилпропионатдисперсия (503 в10воде), г 3Двуокись титанапорошок, г 2Метилгидроксипропилцеллюлоза, гХолестеринэстераза, ОХолестериноксидаза, 0ПероксидазаГалловая кислота, гРаствор 0,2 г 3,3 ,5,5тетраметилбензидинаи 0,17 г диоктилнатрийсульфосукцината в0,74 мг ацетона, мг 1Фосфорнокислый калий, г 0,049 25Фосфорнокислый натрий, г 0,167(динатрийгидрогенфосфатдигидрат)Дистиллированная вода, мл 9,5Смесь наносят на пленку поликарбоната, образуя на ней слой толщиной 300 Р, который затем высушивают теплым воздухом и согласно примерам 1-3 перерабатывают в испытательные полосы, Полученный таким образом реактивный слой (испытательная полоска) дает с содержащими холестерин сыворотками (в зависимости от концентрации холестерина) хорошее по ступеням окрашивание в голубой цвет.П р и м е р 8. Пленка для определения нитрита в моче была получена следующим способом. 0,0421200800260000,003220 В раствор (а) вводили при помешивании 10 г целлюлозы, отфильтровывали и высушивали теплым воздухом.Раствор а;З-Гидрокси,2,3,4-тетрагидробензо-( )-хинолин, г 0,392Сульфаниламид, г 0,344 501-винная кислота, г 5,00Метанол р.А., мл 200Из пропитанной таким образом целлюлозой была получена следующая масса для покрытия: 55Пропитанная целлюлоза, г 10,00Метилгидроксипропилцеллюлоза, г 0,0915 Поливинилпропионатдисперсия (507 вводе), г 5107.-ный раствор диоктилнатрийсульфосукцинатав ацетоне, мл 3Дистиллированная вода, г 35На пленку из сложного полиэфирананосили слой этой массы толшиной400 р , а затем высушивали теплымвоздухом и согласно примерам перерабатывали в испытательную пленку. Водонерастворимая пленка при взаимодействии с содержащими нитриты жидкостями, например с мочой или жесточнымижидкостями, имела красное окрашивание.П р и м е р 9. Для определениягемоглобина в крови была изготовленапленка из следующей смеси:Целлюлоза, г 20Поливинилпропионатдисперсия (507 вводе), гДиоктилнатриисульфосукцинат, г 0,30,5 моль РО -буфера,рН 7, мл 75Смесь наносили на пленку сложногополиэфира слоем толщиной 200 Р, азатем высушивали теплым воздухом иперерабатывали в испытательную полоску,Если воздействовать в течение1 мин одной каплей из ряда разведенийкрови с различным содержанием в нейгемоглобина, то без смывания капливатой получают гамму окрашивания.Названные в примерах материалыможно охарактеризовать следующим образом.Несущей пленкой является поливинилхлоридная пленка толщиной 0,5 мм.В качестве непроницаемого для жидкости слоя является поликарбонатнаяпленка толщиной 100 мк. Материаломвсасывающего слоя в примере 2 является фильтрующая бумага, пропитаннаясиликоновой смолой, В качестве индикаторного слоя в примере 1 - поливинилпропионатная дисперсия, Покрывающий слой сетки в примере 3 представляет собой нейлоновую сетку - поликонденсационный продукт из гександиамида и адипиновой кислоты, Двусторонней клейкой лентой может быть тезафикс, представляющий собой полиэфирные пленки, покрытые с двух сторон клеящим веществом. В качестве1391506 Концентрация, мг глюкозы 100 Показатели 250 500 1000 12 26 45 Сравнение 14 22 45 43 10 28 14 49 31 4 44 28 13 (пятнистая) 27 26 49 48 14 31 37 12 53 38 49 12 Среднее значение/1 с. 46,3/4,2 29,4/5,0 12,6/2,0 Пленка наклеена нафольгу (пример 1) 33 36 20 8 20 37 34 40 18 32 14 (сильно пятнис тая) 34 26 34 45 клейкого вещества в примере 3 используют полиамидную смолу, которая размягчается при 45-50 С. 5Формула изобретения 1. Средство для определения метаболитов в биологической жидкости, состоящее иэ отдельных, закрепленных между собой слоев, расположенных в следующей последовательности: носитель, слой, замедленно впитывающий жидкую фазу, слой, непроницаемый для жидкой фазы, индикаторный слой, о тл и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью повыщения точности определения,индикаторный слой выполнен из полимера, над ним расположена сетка, фиксированная на носителе и охватывающаявсе слои средства, при этом сетка выполнена из нитей толщиной 20-200 мкм,а величина открытой поверхности индикаторного слоя равна 40-807 от егообщей поверхности. 2. Средство по п. 1, о т л и ч аю 1 ц е е с я тем, что слой, замедленно впитывающий жидкую фазу, выполнен иэ гидрофобной бумаги.3. Средство по и. 1, о т л и ч аю щ е е с я тем, что сетка выполнена иэ полимера или целлюлозы.10 1391506 Продолжение таблицыКонцентрация, мг глюкозы 100 Показатели 250 500 1000 34 31 16 29 32 13 31 25 34 21 11 Среднее значение/ 1 с 34,4/5,6 28,2/6,5 12,1/5,0 Пленка на фольге ссеткой (пример 3) 10 28 34 34 28 10 10 27 36 26 36 10 (равномерно) 27 35 1 О 36 27 28 10 36 26 1 О 38 10 27 37 28 36 Среднее значение/1 с 35,8/1,5 27,2/0,8 9,8/0,4 Составитель А, АгуреевРедактор Г. Гербер Техред М.Дндык Корректор И.Муска Заказ 1788/58 Тираж 847 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий . 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 т