Способ обработки спермы птиц

Ффг: ЯВ тфЬ МЯ 5 Сфвз Советских Социалистических Республик(51)М, Кл,2 А 61 Р 7/02 с присоединением заявки Мо(23) Приоритет Государственный комитет СССР но делам изобретений и открытий(088.8) Опубликовано 15,10,79, Бюллетень Мо 38 Дата опубликования описания 18,10,79(54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ СПЕРМЫ ПТИЦ ной степени вакуумирования (до 30- 50 мм.рт.ст.), н связи с чем н нем остается значительное количество растворенных газов; после вакуумирования пространство над поверхностью семени заполняют углекислым или инертными газами, которые при последующем глубоком замораживании сжижаются и оказывают отрицательное влияние на сохранение жизнеспособности спермиен;семя разбавляют в дна приема, что трудоемко; кроме тогоохлаждение семени птиц в течение 5 ч в атмосФере углекислого и инертных газов вызывает гибель 20 спермиев (еще до замораживания); процент сохранения жизнеспособности спермиен птиц после размораживания низок (0,5-1,5 балла).Целью изобретения является повышение биологической активности спермиев,Поставленная цель достигается тем, что в способе. включающем разбавление спермы, накуумиронание, хранение н анаэробных условиях, оксигенацию, хранение в замороженном состоянии, анаэробные условия создают путем накуумирования пространства над разбавленной спермой до 13-20 мч рт,ст. Изобретение относится к областиискусственного осеменения сельскохозяйственных животных.В современном животноводстве широко используются способы обработкиспермы производителей, включающиеразбавление спермы, охлаждение до0-4 С, вакуумирование, оксигенацию, эквилибрацию, замораживание до 10(-196) - (-200) С, хранение взамороженном состоянии, размораживание (оттаивание), активирование спермиев перед осеменением.Наиболее близким к предлагаемомУпо технической сущности является способ обработки семени животных, который состоит в том, что оксигЗнациюсемени производят разбавителем, предварительно насыщенным кислородом, ианаэробные условия в семени создаютпутем откачивания из него кислородас последующим растворением в средеуглекислого и инертных газон. Послеэтого семя эквилибрируют в течение5 ч добавляют оставшуюся дозу разба)вителя, насыщенную кислородом, рас. фасовывают и замораживают (11.Недостатком этого способа является то, что семя подвергают недостаточ(71) Заявитель украинский научно-исследовательский институт птицеводства69)132 вают,отсоединяют от вакуумного шланга,После этого сосуд со спермой помещают в тающий лед или холодильник, создающий температуру 0 С на 10-20 мин,затем в устройство, охлаждающее 5 сперму от 0 С (-15) в (-20) С в течение5 мин, далае - в жидкий азот, в котором сперма в течение 30 с охлаждается от (-15) в (-20) С до -19 бфС. Сосуд с замороженной спермой помещают 1 О для хранения в стационарное спермохранилище КВ 6202 или сосуды Дьюара;Сперму в замороженном состоянии хранят под вакуумом при 13-20 мм рт,ст. Таблица 1 2-6 0-1 4,2 0,5 6,5 Гусаки 70 4-3 Петухи 0-3 6,5 1,5 9,0 45 3-7 0-1,5 0,8 5,3 8,5 Селезни 7Индюки 12 0-2 1,0 3-8 6,1 9,0 После технологической обработки спермы предлагаемым способом в среднем 64,6 спермиев гусака, 72,2 - петуха, 62,4 - селезня, 67,8 - индюка сохраняют жизнеспособность и 55 структурную целостность, В сперме гусаков, петухов, селезней и индюков, обработанной известным способом, количество сперяиев, сохранившихжизнеспособность и структурную целлост- О ность составляет в среднем лишь в течение 20-30 мин и затем производят охлаждение в течение 10-20 мин до 0 С, после этого - от ОфС до (-15) в (-20) С в течение 3-5 мин и до -196 С в течение 30-60 с, хранят при -196 С под вакуумом, при этом окосигенацию проводят после оттаивания спермы в кислородной атмосфере в течение 1-3 мин при давлении 1-2 атмосферы.П р и м е р. Полученную от самца сперму оценивают по активности и концентрации спермиев, разбавляют синтетической средой, состоящей из сахаров и криопротектора, подогретой до 30-35 С.Степень разбавления спермы гусаков, селезней, петухов 1:1, индюков 1:3. Разбавленную сперму помещают в сосуд, герметично закрывают пробкой, в которую вмонтирован вакуумный кран. Вакуумный кран соединяют с насосом, например Камовского, вакуумным шлангом и создают над поверхностью спермы в сосуде пониженное атмосйелное давление до 13-20 мм рт.ст.в течение 20-30 мин.При этом следует не допускать вспенивания спермы, Затем вакуумный кран перекрыПеред оттаиванием сосуд со спермой соединяют посредством шланга через распределитель с кислородным баллоном и заполняют пространства над поверхностью спермы газообразным кислородом под избыточным давлением до 2 атмосфер на 1-3 мин.Олчовпеменно проводят оттаивание спермы при 40 С.После этого сперму оценивают по активности спермиев и используют по назначению.В табл.1 приведена активность спермы в баллах. 9,4 и 11,1 соответ 7,7, 16,7ственно,Примеры конкретного выполнения способа награничные и оптимальные значения параметров представлены в табл.1 2 3.В табл,2 представлены результаты влияния условий технологической обработки на начальном этапе замораживания на активность замороженно-оттаянных спермиев гусаков ..1 .и иа сч осм О с о х Ох Х Ю Г"лсо оФ .1Л Осс м о + о и (Ч м ю м счс о о 1 -Н ю а с м м ьс овхох цнс.О цофХф Ясо на х 2 х й (б н о о х 9 М о а о й о о ьЕь 6 х М Ц о Ц о а х о сс сч м м сес с о ю о ю о Н .Н НН а о а о Ос с о счсч м Ю Г- М л Гл .л м сч с с с о о о о о-1 Н Н - М о о а ю о а а с сс сч сьо о, 04.0, 15 5 4,0 фО 4.0, 32 3,80,0 2,7-0,2 5 4, О+О,4,0+О,5 ф 0,19 3,0+0,2 ф 0 ф 0,37 ф 0,43 7+О 2,3.0,38 Представленные данные свидетельствуют о том, что лучшая жизнеспособностьспермиев наблюдается при охлаждении спермы от ОфС до ("15)-(-20) С в течение 5 .мин, Вместе с тем, допустимо охлаждение спермиев до укаэанной температуры в течение 3-5 мин. При более быстром охлаждении (в течение 1-2 мин) спермии подвергаются температурному шоку, о чем свидетельствует существенное снижение их активности после оттаивания, Более медленное охлаждение спермы (в течение 6-15 мин) ведет к образованию крупных кристаллов воды в момент ее замерзания, кристаллизации и перекристаллизации, которые повреждают цитоплазматические мембраны спермиев. замораживание спермы до (-15)-(-20) С в течение 3-5 мин способствует развитию при замораживании на втором этапе от (-15) в (-20) С до -196 С явления витрификации.Приведенное теоретическое объяснение применимо и к данным, представленним в табл,2,Гпермии,находясь в замороженном состоянии, чувствительны к температурному шоку до температуры охлаждения (-110) -(120) С. Далее от (-110) в (-120) С до -196 фС скорость охлаждения существенного влияния на активность спермиев после оттаивания не оказывает,Ниже приведены данные активности замороженно-оттаянных спермиев гусаков в зависимости от времени охлаждения спермы от (-15)-(-20) С до -196 С.Время охлажления, с Представленные данные свидетель ствуют о том, что на втором этапезамораживания сперму лучше всегоохлаждать от (-15)-(-20)ОС до 196 Св течение 30 с, допустимо увеличениевремени охлаждения до 60 с.30В табл.З представлены результатывлияния повышенного давления кислородной атмосферы при оттаивании спермы на активность спермиев гусаков.691132 Формула изобретения Составитель А,МакаровРедактор Г.Моэжечкова Техред М.Келемеш Корректор И,Михеева Заказ 6086/1 Тираж 672 Поцписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб,д.4/5Филиал ППП фПатент, г.ужгород, ул.Проектная,4 Как видно из табл.3, допустимбвыдержку спермы осуществлять в течение1-3 мин при давлении кислорода 1-2атмосферы,Использование предлагаемого способа обработки спермы птиц по сравнениюс существующим способом существенноповышает биологическую полноценность,структурную целостность и жизнеспособность спермиев; снижает время обработки спермы до замораживания на 4 ч. Способ обработки спермы птиц, включающий разбавление спермы, хранение в анаэробных условиях, оксигенацию и последующее замораживание, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения биологической активности спермиев, аназробные условиясоздают, путем вакуумирования пространства над разбавленной спермойдо 13-20 мм рт.ст в течение 20-30 мин,после чего проводят замораживаниеспермы, охлаждают вначале до О Св течение. 10-20 мин, затем от Офдо-196 С в течение 30-60 с и в дальнейшем хранят при указанной температурепод вакуумом, а оксигенацию проводятпосле оттаивания спермы в кислородной атмосфере в течение 1-4 минпри давлении 1-2 атмосферы,15 Источники информации,принятые во вйимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР Р 435819, кл.А 61 0 7/02, 1973.