Иммунодепрессант

(в) йЯЦ 5 Комитет Российской Федерации по патентам и тонарным знакам ПАТЕНТУ(54) ИММУНОД л. Мо 43-44нической иммунологии СО АМН Л.Е; Колесникова О.П,; Козлов ВЛнической иммунологии СО РАМНЕПРЕССАНТ(57) Изобретение относится к медидине я цен ,. ти к фармакологии и иммунологии Ц пя - созд,1 ние иммунодулирующего средства рачи;еп ног происхождения, Дпя этого предлагасо исг 1 пьзовдть препараты на основе корня солодки гопой, ко торые могут найти применение для и я ния путо иммунных, в том числе аллергических и лимфо 1 ролиферативных заболеваний 5 табл.3 2003340 Результаты исследований приведены в табл, 1,Как видно из табл. 1, введение глицирама мышам линии СВА и С 57 В 1 обнаруживает его отчетливое иммунодепрессивное действие на гуморальный иммунный ответ данным является усиление функциональных свойств мононуклеарных фагоцитов. Для проверки данной посылки изучено влияние глицирама на фагоцитарную активность спленоцитов из прилипающей фракции клеток селезенки мышей линии С 57 В 1. Одно 15 временно определено количество клеток, несущих Ес рецепторы (Ес ),Для определения экспрессии рецепторов к Ес фрагментам дО использовали метод ЕА-розеткообразования, Определение фагоцитарной активности прилипающей фракции спленоцитов проводили по поглощению индикаторных ЕА-комплексов (егуйгосуе-аптЬобу комплекс), Прилипаю 20 25 щую фракцию снленоцитов интактных и обработанных глицирамом мышей получали жащей 16% инактивированной сыворотки крупного рогатого скота, После инкубации покровные стекла тщательно промывали в культуральной среде для удаления неприлипших клеток. Индикаторные ЕА частицы готовили путем обработки эритроцитов барана сывороткой, содержащей д 6 антитела к данным эритроцитам, в субагглютинирующем разведении, После сенсибилизации эритроцитов антителами в течение 30 мин 37 ОС, ЕА-комплексы отмывают 3 раза и го 40 товят 0.5 взвесь индикаторных частиц,Взвесь индикаторных ЕА-частиц наслаивали на покровные стекла с прилипающей фракцией спленоцитов, инкубировали в течение 1 ч при 37 ОС,Для определения количества Ес клеток покровные стекла тщательно отмывали куль 45 50 розе 10 мг/кг, СВА - глицирам по той же схеме и густой экстракт корня солодки в дозе 5 мг/кг. Контрольным животным вводили 0,5 мл дистиллированной воды, Через 2 ч после последнего введения препарата животных иммунизировали внутривенно 2 х 10" ЭБ в обьеме 0,5 мл. На 4-е сутки после иммунизации животных забивали и опреде туральной средой для удаления не связавшихся с Ес рецепторами ЕА частиц, клетки фиксировали, окрашивали по РомановскогоГимза и подсчитывали процент розеткообразующих клеток. Годсчитывали в среднем 500 клеток,Для. определения фагоцитарной активности покровные стекла также тщательно ляли количество антитвлообразующих клеток по числу гемолитических бляшек (БОК) модифицированным методом локального отмывали культуральной средой и дополниемолизз в полужидкой среде. тельно лизировали ЭБ. клетки 1 иксировали,Изобретение относится к медицине и может быть использовано для профилактики и лечению заболеваний, связанных с нарушением системы иммунитета.Известно использование ряда препаратов из корня солодки голой (ОуггЫга даЬга),Известно использование фармакопейного препарата "глицирам". в качестве противовоспалительного и антиаллергического средства. Препарат используют в дозах 0,05-0,1 г 3-4 раза в день в течение до 1 месяца.Экстракт солодки также является основой таких фармакопейных препаратов как ликуразид и ликвиритон, которые рекомендованы при язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки.Однако иммуномодулирующие свойства препаратов корня солодки голой до сих пор не исследованы и эти препараты не используются как иммуномодуляторы.Целью изобретения является расширение области применения препаратов на основе корня солодки, а также расширение арсенала иммуномодулирующих средств.Иммуномодулирующий эффект изучали на мышах линий СВА и С 57 В 1 по способности влиять на:дМ внтителообразование в селезенке п чЬо (АОК);гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ);количество полипотентных стволовых кроветворных клеток (ПСКК) (эндогенное колониеобразование),Определение количества АОК к эритроцитам барана (ЭБ) в селезенке мышей (линии СВА и С 5781 соответственно высоко- и низкоотвечающих дМ антителообразованием на ЭБ) проводили с препаратом глицирам и густым экстрактом корня солодки голой (ГЭ КС). В работе использованы самцы линий СВА и С 5781 6-8 недельного возраста, полученные из питомника "Светлые горы". Контрольные и опытные группы составили из 10 мышей. Мышам линии С 57 В 1 вводили глицирам в максимальной на тимус-зависимый антиген - ЭБ, Аналогичный иммунодепрессивный эффект проявляет густой экстракт корня солодки голой.10 Одним иэ механизмов подавления первичного гуморального ответа по литературным путем инкубации суспензии клеток селезен ки на покровных стеклах в течение 60 минпри 37 С. Суспензия клеток селезенки приготовлена на культуральной среде, содер2003340 Таблица 1 Влияния глицирама и экстракта. корня солодки на первичный гуморальный имунный ответ на ЗБ у мышей линии СВА и С 5781еноцЛо 10 окрашивали и подсчитывали процент клеток, поглотивших ЕА частицы.Результаты исследований приведены в табл. 2.Как видно из данных, глицирам увеличивает фагоцитарную активность, что подтверждаетнаши результаты о связи подавления гуморального иммунного ответа с усилением функциональных свойств фагоцитирующих клеток.Данные о влияние глицирама на гиперчувствительность замедленного типа представлены в табл. 3,В опыте использовали мышей самцов линии СВА и С 57 В 1 6-8 недельного возраста, полученные из питомника "Светлые горы". Контрольные и опытные группы состояли из 10 мышей, Глицирам вводили в дозе 1 и 10 мг/кг. Контрольным животным вводили 0.5 мл дистиллированной воды, через 2 ч после последнего введения мышам вводили внутрибрюшинно сенсибилизирующую дозу Э Б - 0,25 - 0,5 мл, На 4-й день - под апоневроз задней стопы вводили разрешающую дозу ЭБ - 50 -0,05 мл, в противоположную лапку - 0,05 мл физиологического раствора. Через 1 сут производили учет реакции по отечности стопы в мм.Как видно из данных, глицирам оказывает депрессивное влияние на клеточные реакции иммунитета,Эндогенное колониеобразование проводили с препаратом глицирам и густым экстрактом корня солодки голой по 1 5 1, Глицирам 10 мышам СВА вводили в дозе 1,0 мг/кг и .10 животным - в дозе 10,0 мг/кг по описанной схеме. Экстракт корня солодки - 9 мышам в дозе 0,5 мл раствора из расчета 0,1 мг экстракта на мышь, 11 мышам - в дозе 1 мг/мышь, Мышей облучали в дозе 500 й. Учет результатов эндогенного колониеобразования проводили на 9-е сутки. Результатыопыта представлены в табл. 4.Как видно из данных, представленных втабл,4, глицирам в дозе 1 и 10 мг/кг и ГЭКС5 в дозе 5 мг/кг вызывают отчетливое сниже.ние количества стволовых полипотентныхклеток, т.е. препараты обнаруживают депрессивный эффект, ГЭКС также проявляетдепрессивный эффект на количество ство 10 ловых клеток. Эффект ГЭ КС зависит от дозыпрепарата, ГЭКС в дозе 5 мг/кг достоверноснижает эндогенное колониеобразование, вдозе 50 мг/кг - депрессивный эффект несколько слабее,15 Наши экспериментальные данные обусилении функциональных свойств фагоцитирующих клеток под влиянием глицирамаподтверждаются результатами клиническихисследований при лечении больных диффуз 20 ным нейродермитом препаратами из корнясолодки. В комплексе 10 лечебных процедуру больных применяли пенистые ванны с экстрактом корня солодки, кислородный интрагастральный коктейль с 15 раствором25 глицирама, микроклизмы с 0,150 раствором глицирамаУ всех больных отмеченоклиническое улучшение, Результаты по определению фагоцитарной активности до ипосле лечения приведены в табл. 5,30 На основании изложенного можно сделать вывод об иммунодепрессивных свойствах препаратов корня солодки голой,Следовательно, эти препараты могут найтиприменение при лечении аутоиммунных (в35 том числе аутоаллергических) и лимфопролиферативных заболеваний, что значительно расширяет область применения этихпрепаратов. 40 (56) Машковский М,Д. Лекарственные средства. М., 1985, ч, 2, стр. 175-176.2003340 Продолжение табл. 1 блица Влийние глиц спленоцито.онтрол аблиц Влилние глицирама на гиперчувствительность зам нного гипа к ЗБ у мышей линии СВА и С 5 В ил опыта С 57 В Усл 3 котра г корнл сКонтроль1 Глициоа3 1 ,-/10 мг рама на фагоцитарную активность и экспрессию Гс рецепторовприлипающей фракции клеток селезенки мышей линии С 5781 1,24=-0,15 01+0 10 0,88 ф ОЯ 810 2003340 Таблица 4 Таблица 5 Формула иаобРетенмяПрименение препаратов на основе коря солодки. голой в качестве иммунодег 1. рессанта. таеитель О, Колесниковаред М.Моргентал Корректор В. Пе Редактор Т, Пилипенко Тираж Подписн НПО "Поиск" Роспатента13035, Москва, Ж.35, Рэушская на 54/5 Заказ 3291 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгоро агарина, 101 Количество зндогенных колоний а селезенке мывей СВА после введения глицирама и экстракта корня солодки и сублетального облучения животных в дозе 500 й.