Способ моделирования регенерации печени

ту. )К З.,т К ЦАТЕНТ комитет Российской Федерации ио ттатентам и товарным знакам(71) Горьковский медицинский институт им.С.М.Кирова(УЗ) Максимов Николай Виссарионович(54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ РЕГЕНЕРАЦИИ ПЕЧЕНИ(57) Изобретение относится к медицине. Цель - повышение печени в эксперименте. Дпя эт чень в объеме 65 - 70% массы кожно хорионический гонадо тельно интрагастрапьно - МИГ массы лабораторного животног эксперимент апьнои темпов регенерации ого резецируют пеоргана, вводят подропин и дополни- И - К в дозе 5 мп/кг о, 1 табп.Изобретение относится к области био- сле начала введения указанных препаратовлогии и касается увеличения количества. на тест-площадь препарата печени. окранормальных гепатоцитав крыс, что является шенного гематоксилином с докрашиваниемактуальным, т.к, связано с актуальной про- эозином, обнаружилось 14,0+ 0,5 нормальблемой клеточного размножения; роста и 5 .ныхгепатоцитов, чтооказалосьдостовернодифференцировки клеток, больше(Р меньше 0,01), чем в печени крыс,Предлагаемую модель усиления образо. подвергавшихся только резекции печенивания гепатоцитов достаточно широко мож- (8,5 й 0,60), а также получавших после резекно использовать в экспериментах по ции печени гонадотропин хорионическийбиологии, фармакологии и токсикологии для 10 (1 0,3+ 0,68) или гидролизат из мидий пищеизучения в условиях интенсивного образо. вой (10,7+ 0,39), вводимых в тех же дозах ивания гепатоцитов тем же курсом, как и при одновременномдинамики состояния различных клеточ- введении этих препаратов в комплексе (табных структур(ядра, цитоплазмы, АЗР,.ГЭР, лица).митохондрий и др.); 15 К нормальным гепатоцитам относилидинамики различных биохимических клетки с хорошо структурированным ядром,процессов впеченисинтез белка,фермен- неповрежденной клеточной мембраной. стов, липидов, углеводов и др.), достаточным количеством цитоплазмы.для испытания препаратов на способ- . Гидролиэатиз мидий пищевой(МИДИ-К)ностьихтормозитьилиусиливатьклеточное 20 разрешен в качестве пищевой добавки, чторазмножение; согласовано с Министерством эдравоохрадля изучения токсичности препаратов, в нения СССР (Ь 143-5/169-12 от 15,09,89 г).частности, для изучения их влияния на раэ- Таким образом; изобретение отвечаетличные процессы, связанные с клеточным критериям. "новйзна" и "существенные отразмножением 25 личия", т,к. найдено новое применение раИзвестно влияние резекции печени на нее известного препарата гонадотропинавосстановительныепроцессывпечени(5,П.,: хорионического в комплексе с МИДИ-К,Солопаев, Регенерация нормальной и пато- причем эта новая область использованиялогически измененной печени, Дисс. докт. комплекса этйх препаратов с очевидностьюмед; наук. М., 1962), . 30 не вйтекает из ранее известных свойствНаиболее близким по технической сущ"МИДИ-К и комплекса его с гонадотропиномности является способ увелйчения количе- хорионическим и основано на новом свойстстьа нормальных гепатоцитов йутем ве комплекса этих препаратов.введения хорионического гонадотропииа . Общее количество нормальных гепатопосле резекции печени, (ИМ, Солопаева. 35 цидов(НГ)натест-площадьпрепаратовпе: Хорионический гонадотропин как стимуля- чени. Увеличение 90 х 1,5 х 10.тор регенерации печени и перспективы его В работе использовано 30 самцов белыхиспользования. В кн.: Сб, н. трудов ГМИ . беспородных крыс, которые были разделе"Регенерация, адаптация и гбмеостаз", ны на 4 группы: 1-8 крыс, подвергавшихсяГорький, 1990, с. 16). Количество нормаль только резекции 65-70 массы печени; 2-7 .ных гепатоцитов е печенй через 48 ч увели- крыс, которым после резекции печени вчивается как после резекции печени в этом же объеме вводили через зонд в желуобьеме 65-70 массы органа (6,9+ 0,23), док 2 мл 75 водного раствора МИДИ-К, т,е.так и после введения коммерческого гонадот- . 1,5 мл МИДИ-К на животное; 3-9 оперированропина после резекции печени 9,8 ч 0,31), но 45 ных крыс, получавших сразу после резекцииэто увеличение нормальных гепатоцитов печени гонадотройин хорионический под коменьше, чем при использовании предлагае. жу один раз в день в течение 2 дней в дозе отмого способа моделирования увеличения 75 до 85 ЕД на 100,0 массы тела; 4 - 6 крыс,образования нормальных гепатоцитов. получавших после резекции печени гонадотЦелью изобретения является увеличе ропин хорионический и одновременно миние количества нормальных гепатоцитов в дийный гидролизат в тех же дозах и. тем жепечени на тест-площадь препарата. курсом, как и животные 2 и 3 групп. ГибелиПоставленная цельдостигается приме- животных после введения препаратов ненением гонадотропина хорионического было,отечественного препарата хорионического 55 Гонадотропин хорионический вводят 21 онадотропина) в комплексе с гидролизатом дня подряд под кожу один раз в день в дозеиз мидий пищевым (МИДИ-КК) сразу после 75-85 ЕД на 100,0 массы тела. Такая дозарезекции 65-707 ь массы органа у самцов гормона была выбрана потому, что дает бибелых беспородных крыс, Через два дня по- ологический эффект. Однократное ежеднее Ю 03339ное введение препарата производили потому, что введенный в организм этот гормон распадается и выводится из организма в течение 24 часов. Введение гонадотропина хорионического в течение двух дней подряд обусловлено тем, что этот гормон в укаэанных дозах эа этот срок обеспечивает деление большинства готовых к делению гепатоцитов (Н,Л, Иванова, Действие хорионического гонадотропина человека на печень крыс с хроническим токсическим гепатитом. Дисс. канд, биол, наук. М., 1983),Резекцию печени делали для того, чтобы стимулировать регенерационный процесс в печени, который использовали как эталон регенерации, на фоне которого можно достоверно выявить действие веществ, способствующих увеличению или уменьшение количества нормальных гепатоцитов, Резекцию печени делали у животных всех групп для того, чтобы исследование проходило в равных условиях для всех групп, кроме воздействия исследуемых препаратов,Способ моделирования увеличения количества нормальных гепатоцитов с помощью комплекса гонадотропина хорионического с МИДИ-К осуществляется следующим образом,Животным делают резекцию печени в обьеме 65-700, массы органа, Сразу после операции и на следующий день после нее (всего два дня) крысам один раз в день вводят подкожно гонадотропин хорионический в дозе от 75 до 85 ЕД на 100,0 массы тела, и в желудок через зонд вводят по 2 мл 757, водного раствора МИДИ-К, т,е. по 1,5 мл гидролиэата на крысу,Через 48 ч после начала введения гидролизата и гормона у животных берут для исследования печень, Кусочки печени Фиксируют в 107. формалине, после чего готовят парафиновые срезы печени толщиной 5 - 6 мкм и окрашивают их гематоксилином с докрашиванием эозином. При увеличении светового микроскопа 90 х 1.5 х 10 на тест-площадь препарата подсчитывают количество нормальнь 1 х одноадерных и двухъядерных нормальных гепатоцитов с заданной степенью достоверности при Р=0,05 с использованием таблиц Стрелкова (Р.Б, Стрелков, Метод вычисления стандартной ошибки и доверительных интервалов средних арифметических величин с помощью таблицы, Сухуми, Алашари, 1966). Статистическую обработку полученных данных делали по Стьюденту (Л,С. Каминский, Статистическая обработка лабораторных и клинических данных. Медицина. Ленинградское отделение, 1964), тест-площадь препарата печени подсчитывали количество одноядерных и двухъядеоных гепатоцитов, сумма которых составляла общее количество нормальных гепатоцитов на тест-площадь препарата, которая у крысы Гч. 24 оказалась равной 9,2+ 0,90,П р и м е р 4. Крысе М. 29 делали резек. цию печени в объеме 65 - 70 массы органасразу после операции и на следующий день после нее вводили гонадотропин хорионический под кожу один раз в день в дозе 75 ЕД на 100,0 массы тела и 2 мл 75 водного раствора МИДИ-К в желудок через зонд.Через 48 ч осле операции и начала введения гормона и МИДИ-К у животного 5 10 15 20 25 ЗО 35 40 П ри м е р 1, Крысе % 5 делали резекцию печени в объеме 65 - 70, массы органа, Через 48 ч после операции у животного брали кусочек печени для приготовления парафи. новых срезов голщиной 5-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином с докраской эозином. На световом микроскопе при увеличении 90 х 1,5 х 10 на тест-площадь препарата подсчитывали количество одноядерных и двухъядерных нормальных гепатоцитов, сумма которых составила общее количество гепатоцитов, которая у крысы М 5 равнялась 7,2. 0,72,П-р и м е р 2. Крысе И. 15 делали резекцию печени в объеме 65-70 массы органа и сразу после операции и на следующий день после нее вводили в желудок через зонд 2 мл 757 ь водного раствора МИДИ-К один раз в день,Через 48 ч после операции и начала введения МИДИ-К у животного брали кусочек печени для приготовления парафиновых срезов толщиной 5 - 6 мкм, которые окрашивали гематоксилином и докрашивали эозином. На световом микроскопе при увеличении 90 х 1,5 х 10 на тест-площадь препарата печени подсчитывали количество одноядерных и двухъядерных гепатоцитов, сумма которых составила общее количество нормальных гепатоцитов, которая у крысы М. 15 равнялась 9,8 0,98.П р и м е р 3. Крысе М 24 делали резекцию печени в обьеме 65 - 70массы тела и сразу после операции и на следующий день вводили гонадотропин хорионический под кожу один раз в день в дозе 75 ЕД на 100,0 массы тела,Через 48 ч после операции и начала сведения гормона у животного брали кусочек печени для приготовления парафиновых срезов толщиной 5-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином с последующим до крашиванием зозином. На световом микроскопе при увеличении 90 х 1,5 х 10 на2003339 достоверное по сравнению с другими воздействиями (резекция печени, введение мидийного гидролиэата или гонадотропина хорионического раздельно) увеличение количества нормальных гепатоцитов в печени, что можно испольэовать как модель увеличения .количества нормальных гепатоцитов для изучения различных вопросов, связанных с интенсивным процессом образования гепатоцитов, а также различных вопросов в области фармакологии и токсикологии, связанных с процессами образования гепатоцитов. 056) Солопаева И,М. В кн, Регенерация,адаптация и гомеостаз, Горький, 1990, С. 16. 15 Общее количество нормалцых гепатоцитов ф НГ) на тестплощадь препаратов печени, Увеличение 90 х 1,5 х 10, ЬИФ к ыс ХНГ Г ппык ыс 10,7-0,39 1819202122. 2324 брали кусочек печени для приготовления парафиновых срезов толщиной 5-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином с докрашиванием зозином, На световом микроскопе при увеличении 90 х 1,5 х 10 на тест- ,площадь препарата печени подсчитывали количество одноядерных и двухьядерных гепатоцитов, сумма которых составляла об.- щее количество нормальных гепатоцитов, которая у крысы М 29 была равна 14,7. 1,16,Таким образом, полученные результаты доказывают, что через 48 ч после одновременного введения гонадотропина хорионического и мидийного гидролизата в указанных дозах и указанным курсом животным после резекции печени достигается Крысы после резекции печени (РП); Крысы, получавшие после РП гид. ролиэат иэ мидийКрысы, получавшие после РП гонадропин хорионический,01 ,0 надотропина. отличающийся те целью повышения темпов реге дополнительно осуществляют и ральное введение МИГИ-К в доз массм лабораторного животного. Составитель И. СолопаеваТехред М,Моргентал: Корректор. В. Петраш Редактор Т пенко акаэ 3291 Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента113035, Москва, Ж-Зб, Раушскаа наб., 4 й Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Уж ул. Гагарина, 101 имечание: Р между 1 и 4 группамиРмвжду 2 и 4 группами Р междуЗ и 4 группами. Формула изобретен СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ Р АЦИИ ПЕЧЕНИ, включающий ечени в обьеме 65- 703 от масс подкожное введейие хорионичес Е ГЕН.Ерезекцию . органа кого го м,что, снерации,нтрагасте Б мл/кг