Способ получения полиеновых жирных кислот

)5 А 61 К 37/22, 35/4 ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕВЕДОМСТВО СССР(ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ К АВТ КОМУ СВИДЕТЕЛЬС и меОВ инской но для ратов. шение ности. сырья их мле(21) 4887036/14(71) Владивостокский государственндицинский институт(56) Авторское свидетельство СССРМ 463450, кл. А 61 К 31/045, 1974,Авторское свидетельство СССРВ 641963, кл. А 61 К 31/34, 1979,(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИЕНЖИРНЫХ КИСЛОТ(57) Изобретение относится к медицбиотехнологии и может быть применеполучения лекарственных препаЦелью изобретения является повывыхода целевого продукта и экономичСущность изобретения; в качествеиспользуют внутренние органы морск Изобретение относится к медицинской биотехнологии и может быть применено для получения лекарственных препаратов.Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и экономичности выделения.Поставленная цель достигается тем, что в качестве сырья для получения полиеновых жирных кислот используют внутренние органы морских млекопитающих, например; моржа (печень), экстракцию липидов проводят хлороформно-этанольной смесью, этерификацию проводят соляно-кислым метанолом, а выделение метиловых эфиров полиеновых жирных кислот осуществляют посредством адсорбции на анионите "ВА-,копитающих, экстракцию проводят этанольно-хлороформной смесью, этерификацию. - метанолизом, а выделение полиеновых жирных кислот проводят путем адсорбции на анионите "ЩА - 400" с последующими элюированием гексаном и упариванием в вакууме при 30 С, Положительный эффект: способ обеспечивает эффективность и экономичность за счет использования в качестве сырья неутилизируемых пищевой промышленностью внутренних органов морских млекопитающих. Кроме того, способ позволяет исключить применение токсичных растворителей (толуол, метанол), поэтому является более экологичным. Обогащение жирных полиеновых кислот за счет Я применения анионита позволяет увеличить выход в 2,5 раза в сравнении со способомпрототипом с одновременным снижениемтрудоемкости процесса, Способ при этомявляется экономичным,ъф 400" с последующим злюированием гексаном и упариванием в вакууме при температуре +30 С.Анализ источников информации показал, что предлагаемый способ обладает рядом существенных отличий от прототипа, Вчастности, использование в качестве сырьяполиеновых жирных кислот неутилизируе- дмых внутренних органов морских млекопитающих, например, серых китов, моржей,белух, тюленей, приводит к увеличению выхода целевого продукта и сокращению трудоемкости его получения,Кроме того, предлагаемый способ позволяет исключить применение токсическихрастворителей (толуола, метанола) и поэтому является более экологичным. Для повышения выхода целевого продукта применяют ионнообменную смолу "1 ВА" вкачестве адсорбента полиеновых жирныхкислот. Это позволяет существенно увеличить выход целевого продукта, Использование ионнообменной смолы упрощаетпроцедуру выделения полиеновых жирныхкислот в сравнении со способом-прототипом, значительно уменьшая время получения целевого продукта, за счет удаления изсхемы получения трудоемких процедурмногократной низкотемпературной кристаллизации, вакуумной перегонки и хроматографирования на колонке.Способ осуществляется следующим образом.П р и м е р 1. Свежие внутренностиморских млекопитающих, например, печень, измельчают и гомогенизируют традиционным способом, затем трехкратнозкстрагируют при постоянном перемешивании, смесью хлороформ-этанол (2:1, Ч//).Экстракт промывают традиционно 1 ораствором хлорида калия для удаления белковых примесей и упаривают в вакууме притемпературе+30 С, традиционной температуре. Метиловые эфиры получают солянокислым метанолизом. Адсорбцию полиеновыхжирных кислот ведут на ионно-обменнойсмоле "ЯА". Элюирование метиловых эфиров полиеновых жирных кислотосуществляют гексаном при стандартнойтемпературе. Для отделения примесейнасыщенных жирных кислот осуществляютоднократную перекристаллизацию в ацетоне.Экстракты упаривают в вакууме при+30 С и хранят в морозильной камере при-10 С. Антиоксидэнты не добавляют. Массаочищенных полиеновых жирных кислот составила 3,12 г или 86 от суммы жирныхкислот массой 3,62 г, Результаты сравнительного анализа выхода целевого продукта, полученного по способу-прототипу изаявляемому способу помещены в табл. 1.Из результатов, приведенных в табл. 1,обработанных стэгистически значимо с ис пользованием критерия Стюдента, следует,что печень морских млекопитающих содержит липидов больше, чем органы крупногорогатого скота.По содержанию полиеновых жирныхкислот, полученных по способу-прототипу изаявляемому способу до этапа применениясорбирующей ионнообменной смолы, органы крупного рогатого скота меньше морскихмлекопитающих почти в три раза,Использование ионнообменной смолыпозволяет получить концентрат полиеновых5 10 15 20 25 жирных кислот до 86, в то время как в способе-прототипе 30-35 6. Для доказательства липидной природы концентрата был проведен жирнокислотный анализ.Результаты жирнокислотного анализа концентрата полиеновых жирных кислот до обогащения помещены в табл. 2.Как свидетельствуют результаты, помещенные в табл. 2, органы морских млекопитающих являются хорошими источниками ненасыщенных жирных кислот, в том числе и полиеновых, что позволило нам предположить их в качестве сырьевой базы,Для обогащения концентрата ненасыщенных жирных кислот было проведено сорбирование полиеновых жирных кислот на анионите "1 ВА", заряженном в ОН форме и имеющей в качестве поверхностно-активных групп остатки тримвтилазотэ й(СНз)з,Нами был отобран для обогащенияименно анионт "1 ВА", так как он содержал поверхностно-активные группы электрофильного характера, способные связываться с к-электронной плотностью двойных связей полиеновых жирных кислот с образованием нестойких ж-электронных комплексов,которые элюировались в дальнейшем гексаном. Характеристики смолы помещены втабл, 3,Как видно из табл, 3 анионит содержитнеобходимые для адсорбции ненасыщенных полиеновых жирных кислот активныегруппы М(СНз)з, имеет высокую обменнуюемкость, невысокую насыпную массу, что35 свидетельствует об эффективности его использования для адсорбции,Для доказательства концентрированияполиеновых жирных кислот с помощью анионита был сделан жирнокислотный анализ40 элюированной гексэном фракции,Результаты помещены в табл. 4,Как свидетельствуют результаты табл. 4,применение ионнообменной смолы "ЯА"увеличивает выход полиеновых жирных45 кислот в сравнении со способом-прототипом в 2.5 раза, что статистически значимо.Для повышения экологичности предлагаемого способа была проведена заменарастворителей для экстракции. Так, толуол50 (способ-прототип) был заменен на смесьэтэнола и хлороформа. Традиционный способ выделения липидов по Фолчу, (1959),предлагает в качестве экстрэгентэ болеетоксичный метанол, который в нашем спосо 55 бе заменен нэ этэнол. Некоторые физическиесвойства растворителей, их токсичность помещены в табл. 5, 6.Как видно из табл. 5. 6 использование. экстрэкционной смеси этэнола более эколо1803121 ность двойных связей полиеновых жирных кислот с образованием нестойких комплексов, уменьшает длительность голучения продукта и способствует достижению цели изобретения. Таблица 1 Результаты сравнительного анализа выхода целевого продукта при использовании способа-прототипа и заявляемого способасоб Способ в ототип Показания 0,80 - 1,32 в % от массы органа 10,3 - 24,2 оот суммы жирных кислот 30,0-32,1% от суммы жирных кислот 84,2 - 86,1 оот суммы жирных кислотЛипиды печень) в 5,7 л раствора - 400 г 8. - 10% от суммы жирных к - тПНЖК в органе до обогащенияПНЖК в присутствии "ЯА -400"ПНЖК в результате однократной низкотемпературной кристаллизации ацетоном 30 - 35% от суммы ЖК Таблица 2 Жирнокислотный состав липидов печени морских млекопитающих О от об ей с ммы жи ных кислот Код кислотыбелуха морж ларга кит 1,1+0,05 0,3+0,01 0,3 +0,01.15:015;1 я 516:016:1 ф 7.17:018:О. 4,0+0,050,6+.0,010,3+0,010,3 40,0120,3+0,0019,1+0,0010,9-ф 0,056,7+0,01 гично,так какего ПДКр.з. в 200 раз большечем у ранее предлагаемого метанола применьшем классе опасности, Ацетон имеетПДК 200 мг/м, что тоже позволяет говорить, зо снижении экологичности среды при его использовании,Таким образом. предлагаемый способобеспечивает эффективность и экономичность технического решения за счет использования в качестве источника полиеновых 10жирных кислот неутилиэируемых пищевой ифармацевтической промышленностьювнутренних органов морских млекопитающих, например, серых китов, моржей, белух,тюленей, Кроме того, предлагаемый способ 15позволяет исключить применение токсических экстрагирующих растворителей (толуол, метанол) и поэтому является болееэкологичным. Адсорбция полиеновых жирных кислот на ионнообменной смоле "ИА400" позволяет увеличить выход целевогопродукта в 2,5 раза, Снижение трудоемкости выделения целевого продукта за счет применения ионнообменной смолы "ВА",содержащей специфические поверхностные 25группы, связывающие электронную плотФормула изобретения Способ получения полиеновых жирных кислот путем экстракции липидов из животного сырья органическим растворителем, упаривания полученного экстракта, адсорбирования полиеновых жирных кислот и последующего выделения целевого продукта, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и экономичности выделения, в качестве сырья используют печень морских животных, . экстрагирование проводят хлороформ-этанольной смесью при соотношении растворителей соответственно, равном 2;1, полученный экстракт упаривают при 1 30 С после его обработки хлоридом калия. затем адсорбируют полиеновые жирные кислоты на анионите "ЯА", перекристаллизовывают и элюируют целевой продукт гексаном с последующим упариванием его в вакууме,1803121 8 Продолжение табл, 2 б от общим Суммы жиоиы и лар 23,5 +0,001 13,8+ 10,3+О;001 10,8+О 1,3 0+ 4,4+ 2 0 22 е 3 2 рактеристики анионита "ВАТаблица став жирных кислот липидов печени тюленя-ларги, выделенньния на анионите утем концент10 1803121 Продолжение табл, 4 Таблица екоторые свойства растворителей, применяемых для экстракции липидов 6 Т,а орителей ипидов еняемых для экстра оксичность Составитель Г. АвхутскаТехред М.Моргентал ректор Л. Редактор Т. Иванова оизводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 1 Заказ 1018. Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5