Способ диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 20969 19 1 В 10 00 Н А. В. Карасьедицинский педиатрекомендации Бакностика стафилококент, 1978, с. 15. е вопросы патоГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕН АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИИ СТАФИЛОКОККОВОЙ ПНЕВМОНИИ У ДЕТЕй РАННЕГО ВОЗРАСТА путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения сроков диагностики, исследуют лимфоциты, выведенные из крови больного в реакции розеткообразования, которые сенсибилизируют стафилококковым ос-токсином в разведении 1:15 в 1:20 в течение 25 - 30 мин при 37 - 38 С и по увеличению количества розеткообразующих лимфоцитов диагностируют стафилококковую пневмонию.20969 111Изобретение относится к медицине, аименно к диагностике стафилококковойпиевмонии у детей раннего возраста.Известен способ диагностики стафилококковой пневмонии, например бактериологической, заключающийся в выявлении стафилококков из биологических материалов(крови, мокроты и т.д,) с последующим определением их токсигенности 1.Однако широкое применение лекарственных средств (в основном антибиотиков)привело к резкому снижению диагностической ценности этого способа.Известен серологи ческий способ исследования стафилококковой инфекции, заключающийся в реакции антиген-антителов присутствии эритроцитов кролика, постепени гемолиза которых судят о наличииантител 21,Однако такой способ недостаточно точениз-за наличия первичного и вторичного иммунодефицитов у детей раннего возраста изанимает много времени при его осуществлении,Цель изобретения - повышение точностии сокращение сроков диагностики.Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возрастапутем исследования крови, исследуют лимфоциты, выделенные из крови больного Вреакции розеткообразования, которые сенсибилизируют стафилококковым сс-токсиномв разведении 1:15 - 1:20 в течение 25 - 30мин при 3738 С, и по увелицению количества розеткообразующих лимфоцитовдиагностируют стафилококковую пневмонию,Способ осуществляется следующим Образом.Сенсибилизация лимфоцитов. Берут 3,0 мл крови больного из локтевой вены в пробирку с гепарином в разведении с физиологическим раствором 1:25 из расчета 0,1 мл на 1 мл крови. На градиенте плотности (1,077) верографин-фиколл Выделяют лимфоциты из полученной крсви, их трех- кратно отмывают фосфатным буфером (рН - 7,2). Из лимфоцитов готовя 1 4 пробы по 0,1 мл (2 сравниваемые и 2 основные) с одинаковой концентрацией лимфоцитов 2 х 10 клеток/мл.Одновременно готовят рабоцую взвесь эритроцитов барана для определения Т- лимфоцитов. Для этого эритроциты барана трехкратно отмывают фосфатным буфером (рН - 7,2) путем центрифугирования (при 1000 об/мин) и из полученного плотного осадка готовят 0,3/и-ную рабочую взвесь эритроцитов.Для определения В-лимфоцитов готовят рабочую взвесь зимозана путем добавления к 1,0 мл О,1/о-ного зимозана 1 мл комплемента морской свинки в разведении 1:5. 5 О 5 2 О 25 О 45 50 Полученную смесь выдерживают в термостате нри 37"С в течение 30 мин. Затем дважды промывают физиологическим растворомпо 5 мин центрифугированием при 1000 об/мин. После добавления к осадку 1 О мл фосфатного буфера (рН - 7,2) получают рабочую взвесь зимозана для определения Влимфоцитов.В двух сравниваемых пробирках известным способом определяют количества Т- иВ-лимфоцитов 3.К двум основным пробиркам, содержащим по 0,1 мл взвеси лимфоцитов добавляют по 0,1 мл стафилококкового сс-токсинав разведении 1:15 - 1:20 в зависимости отгемолитической активности.Короткая сенсибилизация лимфоцитовосугцествляется инкубирова нием смеси втермостате при 37 - 38 С в течение 25 -30 мин,После инкубации обе смеси трехкратноотмывают фосфатным буфером (рН - 7,2)и далее проводят обычную реакцию поопределению количества Т- и В-лимфоцитов,Реакция положительная, так как количество Т-лимфоцитов увеличилось не менеечем на 10 розеткообразукщих клеток присопоставлении с сравниваемым Опытом,Пример (. Больной К., б мес ист.бол.1044, поступил в тяжелом состоянии свыраженной одышкой (до б 0 раз в мин),цианозом носогубного треуольника в покое,капглем влажного характера, хрипами икрепи;ацнямк в легких, увеличенными размерами гецени. Неоднократные посевы кровироста ссафилококка не дали.1 а первые сутки проведено определениеТ- и В-лимфоцитов до к после инкубациив течение 27 мин с 1:20-кратно разведеннымстафилококковым токсином и Взвесью лимфоцитов. В результате цего количестворозеткообразую:цих Т-лимфоцитов увеличилось на 13 клеток. Количество розеткоооразуюцих В-лимфоцитов осталось безизменения.К сснцу второй недели болезни выявленоувеличение уровня альфа-а;.и итоксина ьсыворотке крови больного от 0,25 ЛГ до1,0 АЕ.На основании клиники и увеличенияспецифически сенсибилизированных Т-лимфоцИТОВ На 13 КЛЕТОК ужЕ В ПЕРВЫЕ СУТКИустановлен диагноз: стафилококковая пневмония.НаРастание УРОВКЯ стафилококкОВОГОальфа-антитоксина гг 0,25 АЕ до 1,0 ЛЕ,а также эффект от проведения специфической антистафилококковой терапии подтвердил достоверность псставленного диагноза.При,с 1 ер 2. Больная Д., 5 мес., ист.бол.2199, поступила В стационар с клиническими проявлениями дыхательной недостаточности, сипертермической реакциидо 39,2, интокснкании, характерными везиной установлен диагноз: стафилококковая пневмония, что в последующем (на 5 сут - 2 бактериологическим, к концу второй недели 3кальными данными (хрипами и крепитациями) в легких.На первый день пребывания больной в стационаре проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лимфоцитов в течение 25 мин с 1:13, 1:14 и 1:15- кратно разведенным стафилококковым токсином. При этом в разведениях 1:13 и 1:14 из-за полного и частичного гемолиза эритроцитов не получены результаты анализа.В разведении 1:15 количество розеткообразующих Т-лимфоцитов увеличилось после инкубации до 11 клеток. Количество В-лимфоцитов как до инкубации так и после нее оставалось на одинаковых цифрах.На 5 сут получены результаты посева крови, проведенного в день поступления,где выявлен патогенный гемолитическийстафилококк.К концу второй недели болезни выявлено нарастание уровня стгфилококкового альфа-антитоксина от 0,25 АЕ до 1,0 АЕ. На основании клиники и предлагаемого способа диагностики в первый день поступления больболезни - серологическим) подтвердило правомерность установленного диагноза. Поставленная цель при разведении стафилококкового токсина 1:13 и 1:14 не достигнута, а достигнута при проведении реакции в разведенном стафилококковом токсине 1:15.Пример 3. Больной 36 мес., ист. бол.1803, поступил в стационар с клиническими проявлениями дыхательной недостаточности, интоксикации, гипертермической реакции, характерных везикальных данных со стороны легких (хрипы и крепитации).На первый день поступления в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после 25 мин инкубации взвеси лимфоцитов больного с 1:20, 1:21, и 1:22-кратно разведенным стафилококковым токсином.При этом увеличение розеткообразующих Т-лимфоцитов произошло на 17 клеток при инкубации, взвеси лимфоцитов с 1:20- кратно разведенным стафилококковым токсином. При инкубации взвеси лимфоцитов с 1:21 и 1:22-кратноразведенным стафилококковым токсином не обнаруживается увеличение розеткообразующих Т-лимфоцитов. Количество В-лимфоцитов остается без изменения после инкубации при всех указанных разведениях стафилококкового токсина.На 6 день пребывания больного в стационаре получен положительный результат посева, проведенного в день поступления, где выявлен патогенный гемолитический стафилококк. 30 35 40 45 50 55 К концу второй недели болезни выявлено нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина в сыворотке крови от 0,25 ае до 1,0 АЕ.На основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики на первый день болезни установлен диагноз: стафилококковая пневмония. В последствии на 6 день пребывания в стационаре и к концу второй недели болезни бактериологически и серологически подтверждена достоверность установленного диагноза. Цель достигнута при применении разведенного стафилококкового токсина 1:20.Разведение стафилококкового токсина 1:21 и 1:22 и более не дает положительного эффекта увеличения количества розеткообразующих Т-лимфоцитов.Пример 4. Больной Д., 2 г. 6 мес., ист. бол.287, поступил на стационарное лечение в тяжелом состоянии с выраженной одышкой, цианозом носогубного треугольника, акроцианозом, кашлем влажного характера, температурной реакцией до 39,4, участием вспомогательных мышц в акте дыхания, характерными везикальными данными (хрип и крепитациями) со стороны легких.На первый день поступления в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лимфоцитов с 1:15-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов после инкубации со стафилококковым токсином на 19 клеток. Увеличения В-лимфоцитов не выявлено,На 6 и 8 дни пребывания больного в стационаре получены результаты посева крови больного. При этом выявлен гемолитический стафилококк одного фаговара,К концу второй недели болезни выявлено нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина в сыворотке крови от 0,25 АЕ до 1,0 АЕ. Однако уже в течение первых суток пребывания больного в стационаре на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая пневмония. В последствии на 6 и 8 сут и к концу второй недели болезни подтверждена правомерность установленного диагноза.Пример 5. Больная Бг 4 мес., ист. бол.2134, поступила в тяжелом состоянии с выраженными проявлениями дыхательной недостаточности, гипертермической реакции, интоксикации, кашлем влажного характера, характерными изменениями со стороны легких (хрипами и крепитациями).В первый день поступления больной в стационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитовдо и после инкубации взвеси лимфоцитов с 1:15-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразных Т-лимфоцитов после инкубации со стафилококковым токсином на 17 клеток, Увеличения В-лимфоцитов не выявлено.Неоднократные посевы крови больной на выявление стафилококка не дали положительного результата.К концу второй недели болезни в сыворотке крови больной выявлено нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина с 0,25 АЕ до 1,0 АЕ. Однако уже в течение первый суток установлен диагноз: стафилококковая пневмония на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики.Нарастание уровня стафилококкового альфа-антитоксина к концу второй недели болезни и эффект от проведенной специцической антистафилококковой терапии подтвердили правомерность установленного диагноза.Показана возможность выявления стафилококковой этиологии пневмонии предлагаемым способом при условии отрицательного бактериологического ответа,Пример 6. Больной 3 2 мес., ист, бол.1888, поступил на стационарное лечение в тяжелом состоянии с проявлениями дыхательной недостаточности, влажным кашлем, гипертермической реакцией, судорога ми тонико-клонического характера, характерными изменениями (хрипами и крепитациями) со стороны легких.В первый день пребывания больного в стационаре проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации лимфоцитов с 1:20-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин, При этом выявлено увеличение количества Т-лимфоцитов после короткой инкубации со стафилококковым токсином на 11 клеток. Увеличение количества В-лимфоцитов не выявлено. На 5 и 6 день пребывания больного в стационаре высеяны из крови гемолитические стафилококки одного фаговара, В динамике заболевания не удалось выявить нарастания стафилококкового альфа-анти- токсина в сыворотке крови больного,Однако уже в первый день пребывания больного в стационаре на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая пневмония,Правомерность установленного диагноза была подтверждена на 6 день пребывания больного в стационаре бактериологическим способом исследования и эффективностью антистафилококковой терапии, Показана возможность диагностики при условии отрицательного ответа серологического способа выявления этиологии пневмонии.Пример 7. Больная К., 5 мес., ист., бол.11846, поступила в тяжелом состоянии на стационарное лечение. При поступлении отмечались выраженные проявления дыхательной недостаточности, гипертермической реакции, кашель влажного характера, хрипы и крепитации в легких.В первый день поступления больной встационар проведено определение количества розеткообразующих Т- и В-лимфоцитов до и после инкубации взвеси лимфоцитов с 1:20-кратно разведенным стафилококковым токсином в течение 25 мин. При этом выявлено увеличение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов после короткой инкубации со стафилококковым токсином на 21 клетку. Увеличение В-лимфо цитов не выявлено.Повторное бактериологическое обследование крови больной не выявило роста стафилококков.Определение уровня стафилококковогоальфа-антитоксина также не выявило его нарастания в динамике болезни.В первый же день поступления больной в стационар на основании клиники и применения предлагаемого способа диагностики установлен диагноз: стафилококковая Зо пневмония, Эффект от проведенной специфической антистафилококковой терапии подтвердил достоверность установленного диагноза. Показана возможность ранней диагностики стафилококковой этиологии пневмонии при условии отрицательных от ветов бактериологического и серологического способов диагностики.В таблице представлена сравнительнаяоценка точности диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста 4 О при способе-прототипе и предлагаемом способе.Как видно из представленных данныхувеличение количества розеткообразующих Т-лимфоцитов более чем на 10 клеток достоверно для диагностики стафилококко вой этиологии пневмонии у детей раннеговозраста. При этом увеличение В-лимфоцитов не происходит и не является информативным тестом диагностики этой нозологической единицы.Таким образом, использование предлагаемого способа диагностики стафилококковой пневмонии у детей раннего возраста обеспечивает по сравнению с известными способами - бактериологическим и серо- логическим сокращение сроков обследо вания (на 10 - 12 дней), повышение точности диагностики (приблизительно в 4 раза).3г,687од, у раж жгор ниипи илиал П Заказ 760 П Патен о Р М Р 1 М Р Р о Г о х Ц О о Р х х хх е о о но Э Р е х х х а, а нР Р Х О Р В о ъ одписное Проектная