Способ определения количества фенотиазина в меде

(19 О 1) Э 50 С 01 К 33/02 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТ 8 ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ(71) Украинский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии(53) 638.162.2:577. 1 (088.8) (56) 1, Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде, ч.Х.М., 1980, с, 133,2. "Пчеловодство". 1980, У 5,с.25.(54) (57) 1. СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА фЕНОТИАЗИНА В МЕДЕ, предУсматривающий экстракцию фенотиазина изводного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан,упаривание экстракта, нанесение егона пластину, воздействие проявляющим реактивом и установление количества фенотиазина по площади и интенсивности окраски пятна, о т л и ч а рщ и й с я тем, что, с целью повышения точности определения путем предотвращения образования загрязнения на1 пятне исследуемого вещества и упрощения анализа, в качестве проявляющего реактива используют 0,1-2 н.раствор соляной кислоты,2. Способ по п,1 о т л и ч а ю щ и й с я тем, что при нанесении экстракта на пластину силуфол в качестве проявляющего реактива исполь" зуют 0,1-0,5 н. раствор соляной кислоты.3. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что при нанесении экстракта на пластину со слоем окись алюминия - гипс в качестве проявляющего реактива используют 1-2 н. раст-ф вор соляной кислоты.Изобретение относится к санитарии и может быть использовано при санитарно-гигиенической оценке меда после обработки пчел фенотиазином.Фенотиазин находит широкое исполь зование для диагностики и лечения варроатоэа и браулеза (вшивости) пчел. Его применяют путем сжигания в виде порошка или специальных таблеток в улье с больными пчелами, ОПри лечении варроатоза пчел фенотиазином остатки его попадают в мед. Широкое применение Фенотиазина в пчеловодстве вызывает необходимость постоянно проводить ветеринарно-санитарную оценку меда в отношении остаточных количеств этого препарата.Известен способ определения Фенотиазина в меде с помощью тонкослойной хроматографии, согласно которо .му экстракцию фенотиазина из меда проводят с помощью 60 мл бензола.Полученный экстракт очищают путем элюирования (вымывания) через колон. ку с силикагелем АСК и окисью алюминия, где в качестве вымывающего раствора также используют бензол (40 мл), Конечное определение Фенотиазина проводят на пластине силуфол обрабатывая (опрыскивая) ее раст вором хлорного железа 1Недостатками этого способа являются использование при анализе больших количеств бенэола, который обладает канцерогенным действием, а так- З 5 же проявление хроматографических пластин раствором хлорного железа, которое выявляет и многие другие вещества, Кроме того, чувствительность метода составляет 3 мкг препарата 40 в пробе, что вынуждает брать навеску меда не менее 30 г, с которой очень неудобно работать.Известен также способ определения количества фенотиазина в меде, пре дусматривающий экстракцию фенотиазина иэ водного раствора меда ацетоном с последующим перераспределением в гексан, упаривайие экстракта, нане,: сение его на пластину,воздействие про являющим реактивом и установление ко" личества фенотиаэина по площади и интенсивности окраски пятна. Для дополнительной очистки экстра к та хроматографическую пластину вначале помещают в боковом положении в камеру с гексаном, а затем в камеру с системой подвижных растворителей гексан-ацетон, Конечное определение препарата проводят на хроматографических пластинах со слоем окись алюминия - гипс, так как при использовании этих пластин требуется не очень тщательная очистка экстракта. В качестве проявляющего реактива применяют 1 Е-ный водный раствор азотно- кислого серебра, Чувствительность метода составляет 1 мкг препарата в пробе меда или 0,1 мг/кг 2Недостаток этого способа - использование в качестве проявляющего реактива азотнокислого серебра, которое является дефицитныМ и дорогостоящим реагентом и относится к особо ядовитым лекарственным средствам списка А ("Яды"),которые необходимо хранить , учитывать и использовать согласно специальным строгим правилам.Кроме того, в качестве хроматографических пластин используют пластины со слоем окись алюминия - гипс, которые исследователь готовит,самостоятельно, После нанесения конечного экотракта на хроматографическую пластину проводят цополнительную очистку экстракта путем помещения пластин в боковом положении в хроматографическую камеру, насыщенную гексаном.Принцип этой очистки заключается в том, что гексан не двигает остаточные количества фенотиазина на пластине, но сдвигает коэкстрактивные вещества, покрывающие фенотиазин на пластине. После прохождения фронта растворителя через всю пластину ее вынимают из камеры и оставляют на воздухе до исчезновения запаха гексана. Затем эту пластину помещаютв камеру со смесью подвижных растворителей гексан - ацетон в соотношении 24:6, повернув ее на 90 по отоношению к первоначальной раэгонке.После подъема Фронта растворителей на высоту 10 см пластину вынимают из камеры и через 10 с опрыскивают 17.-ным водным раствором азотнокислого серебра,После обработки пластины проявляющим реактивом (нитратом серебра) обнаружены темно-зеленые пятна фенотиаэина в пробе меда и стандартном растворе фенотиазина. Коэкстрактивные вещества из пробы меда проявляются рядом с пятном Фенотиазина, прикрывая его только с одной правойстороны, что позволяет определить количество фенотиазина в сравнении с пятном стандартного раствора исследуемого препарата. Сравнивая площадь и интенсивность окраски пятна 5 из пробы с пятном стандартного раствора фенотиазина, количество фенотиазина в пробе меда определяют по формуле10АБХБ Р где Х - общее количество фенотиазина в меде, мг/кг;А вколичество фенотиазина встандартном ацетоновом растворе, нанесенном на пластину рядом с опытной пробой,мкгЯ - площадь пятна стандартного 201раствора фенотиазина, нанесенного на пластину, мм;Я - площадь пятна пробы, ммЪР - масса пробы меда, взятогодля анализа, г. 25Кроме того, при определении фенотиазина известным способом на пластинах силуфол не удается получить удовлетворительные результаты из-за проявления аэотнокислым серебром 30 коэкстрактивных веществ меда воск, пигменты), которые закрывают собой пятно фенотиазина, т,е. наблюдается четкая зависимость результата анализа от степени загрязнения меда З 5 коэкстрактивными веществами. При искусственном внесении фенотиазина в пробы меда и особенно при анализе свежеоткачанного меда после лечения пчелиныхсемей фенотиазином нередко 40 не удается выявить остатки фенотиаэина на пластине силуфол, а на пластинах со слоем окись алюминия - гипс препарат в этих пробах определяется.Цель изобретения - повышение точ ности определения путем предотвращения образования загрязнения на пятне исследуемого вещества и упрощение анализа,Поставленная цель достигается тем,50что согласно способу определения количества фенотиазина в меде, включающему экстракцию фенотиазина изводного раствора меда ацетоном с пос. ледующим перераспределением в гексан 55упаривание экстракта, нанесение егона пластину, воздействие проявляющим реактивом и установление количества фенотиаэина по площади и интенсивности окраски пятна, в качестве проявляющего реактива используют 0,1-2 н. раствор соляной кислоты.При нанесении экстракта на плас" тину силуфол в качестве проявляющего реактива: используют 0,1-0,5 н, раствор соляной кислоты, а на пластину со слоем окись алюминия - гипс 1-2 н. раствор соляной кислоты.Сущность изобретения заключается в том, что при обработке пластины силуфол или со слоем окись алюминия- гипс раствором соляной кислоты фенотиазин проявляется на пластине в виде розовых пятен на белом фоне.Коэкстрактивные вещества меда при этом не проявляются и не мешают выделению пятен фенотиазина, что не требует проведения не только тщательной основной, но и даже дополнительной очистки экстрактов путем помещения пластин в камеру с гексаном.П р и м е р 1. Навеску меда (10 г), содержащего фенотиазин в количестве 0,18 мг/кг, растворяют в О мл дистиллированной воды, переносят в делительную воронку и фенотиаэин экстрагируют 30 мл ацетона, встряхивая воронку 3 мин. Слоям дают разделиться и нижний слой отбрасывают, а верхний (ацетоновый экстракт) переносят в чистую делительную воронку, добавляют 60 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют 10 мл гексана, встряхивая воронку 2 мин. Реэкстракцию фенотиазина в гексан повторяют дважды. Затем гексановые экстракты объединяют, 10 г безводного сернокислого натрия сушат в течение 15 мин, упаривают до небольшого объема (0,2 мл) и наносят на пластину силуфол, Рядом с опытной пробой наносят известные количества фенотиаэина в ацетоне и пластину помещают в хроматографическую камеру со смесью гексан - ацетон в соотношении 24:6. После подъема фронта растворителей на высоту 1 О см пластину вынимают из камеры и обрабатывают О, н. раствором соляной кислоты,фенотиазин проявляется через 60 с после начала опрыскивания в виде четких,пятен розового цвета. Коэкстрактивные вещества из пробы меда не проявляются на пластине при обработке ее раствором соляной кислоты и не мешают проявлению розовых пятен фенотиазина. И препарата 0,45.А Я 35 40 45 50 55 Количество фенотиаэина в исследуемой пробе меда устанавливают путем сравнения интенсивности окраски и площади пятна из анапиэируемого образца и известного количества фенотиаэина в ацетоне (стандартный раствор), нанесенного рядом с опытной пробой на пластинке до помещения ее в хроматографическую камеру,Общее количество фенотиаэина в ме де определяют по формуле где Х - общее количество фенотиаэинав меде,мг/кг;А - количество фенотиаэина встандартном растворе, нанесенном на пластину, мкг;Я - площадь пятна стандартногораствора, мм 2;Б - площадь пятна исследуемойпробы, ммР - масса исследуемой пробы меда, г.Подставив полученные показатели в формулу 2 32Х 0 2 мг/кг,32 10У устанавливают, что количество фенотиаэина в меде 0,2 мг/кг.И р и м е р 2. Анализ пробы меда проводят аналогично , примеру 1, эа исключением того, что экстракт наносят на пластину силуфол и опрыскивают 0,5 н. раствором соляной кислоты. В результате этого розовые пятна фенотиаэина проявляются через 10 с после начала .опрыскивания и имеют более интенсивную окраску.Коэкстрактивные; вещества иэ пробы меда не проявляются на пластине и не загрязняют собой пятна фенотнаэина. Количество фенатиаэина в пробе меда 0,2 мг/кг.П р и м е р 3, Анализ меда проводят по примеру 1, однако гексановый экстракт, упаренный до объема 0,2 мл, наносят на пластину со слоем окись алюминия - гипс. После развития хроматограммы в камере со смесью подвюкных растворителей гексан - ацетон в соотношении 24:6 пластину вынимают иэ камеры и обрабатывают 1 н, раствором соляной кислоты. В резуль. тате остатки фенотиаэина проявляют 5 1 О 15 20 25 30 ся непосредственно после опрыскивания в виде четких пятен розового цвета, которые через 30 мин приобретают зеленую окраску. КЙ препарата 0,50. Коэкстрактивные вещества не проявляются на пластине и не перекрывают собой пятен фенотиазина, а также не нарушают их конфигурации, Количество фенотиазина в пробе меда 0,22 мг/кг.И р и м е р 4. Анализ меда проводят по примерам 1 и 2, однако пластину со слоем окись алюминия - гипс опрыскивают 2 н, раствором соляной кислоты. В результате фенотиаэин проявляется в виде четких пятен розового цвета с более интенсивной окраской. Через 30 мин пятна приобретают зеленую окраску, Коэкстрактнвные вещества на пластине не выявляются и не мешают проявлению розовых пятен фенотиаэина,Количество фенотиаэина в исследуемой пробе меда 0,22 мг/кг.Таким образом, остатки фенотиазина, обнаруженные в исследуемом меде предлагаемым способом, составляют 0,2 и 0,22 мг/кг (примеры 1-4), а известным - 0,18 мг/кг. Это объясняется тем, что при анализе меда известным способом коэкстрактивные вещества на пластинах со слоем окись алюминия - гипс. мешают проявлению пятен фенотиаэина и снижают полноту его определения,С целью установления чувствительности метода и полноты определения фенотиазина в пробы меда вносят известные количества препарата н проводят анализ предлагаемым способом. Результаты исследований представлены в табл,. Данные табл. 1 показывают, что чувствительность предлагаемого способа составляет 0,5 мкг в пробе меда (О г) или 0,05 мг/кг, полнота определения 70-80 /.Предлагаемый способ определения количества фенотиаэина в меде по сравнению с известным обладает површенной точностью определения и позволяет устранить зависимость результата анализа от присутствия в меде коэкстрактивных веществ. При этом способ дает воэможность проводить конечное определение фенотиаэина на пластинах силуфол беэ проведения трудоемких ме120237 ТаблицаЮ Определено фенотиаПроцент определения способомоличество исследозина,мкг способом даа мкг способом ваний Предлагаемымна пластине иэвестпредлагаемымна пластине иэвест предла гаемым известным силу(3) (2)(2) 0,5 0,5 3,0 0,7 83,0 76,0 80,0 2,0 2,0 1,62 1,7 5,0 4,3 5,0 Таблица 2 Показатели Способ предлагаемый известный 2 руб.88 коп. 0,03-0,59 коп. 29,6 коп. 0,03-0,59 коп. Итого: 3 руб.17,6 коп. Составитель Н.АрцыбааеваТехред ТЯаточка Корректор, А. Зимокосовг Редактор Л.Коэориэ Заказ 7732/32 Тирав 822 ВНИИП 33 Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 3035, Москва, Е, Раушская наб., д,4/5Подписное Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 тодов очистки экстракта иэ меда.Кроме того, способ более экономичен(табл.2) и не требует для проведения Внесено фенотиаэина в пробу ме(из расчета на 100 анализов) Затраты на дополнительнуюочистку экстрактов Затраты на проявляющие реактивы анализа опасных и дефицитных реактивов, что делает его перспективным,для использования. со слоем.окись алюминия -гипс (1). 0,36 0,4 - 72,0 80,0 0,7 0,82 70,0 70,0 82,0 4, 4,25 86,0 82 85