Способ количественного определения хлорхолинхлорида

ОЙ-И СА Н И Е ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз Советскик Социалистических Республик(22) Заявлено 14,0678 (21) 2627548/23-04сприсо динением заявки Но 6 01 й 31/08 Государственный комитет СССР ио делам изобретений и открытий: Дата опубликования описания 300980(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРХОЛИНХЛОРИДА 1 1Изобретение относится к области, аналитической химии, а именно, к способам количественного определения хлорхолинхлорида (ХХХ).- .Известен способ количественного определения хлорхолинхлорида, заключающийся в обработке анализируемой пробы органическим растворителем, хроматографировании органического слоя и отделении ХХХ с последующей обработкой реактивом Драгендорфа и фотоколориметрирования полученного окрашенного продукта 1 .Недостатком способа является низкая точность и чувствительность .определения 0,2 мг/кг.Известеи также наиболее близкий к изобретению по технической сущности и достигаемому результату"способ количественного определения хлорхолинхлорида, заключающийся в обработке анализируемой пробы этанолом, упаривании растворителя и пропускания остатка через колонку с окисью алюминия с последующим элюированием хлорхолинхлорида, обработкой элюата дипикриламином спектрофотометрированием окрашенного .раствора 21 .Недостатком способа являетоя его длительность - 5-6 рабочих дней и 2низкая точность, не достигается полное отделение хлорхолинхлорида, чтоприводит к завышению результатовопределения.5 Цель изобретения - сокращениевремени и повышение точности определения.Поставленная цель достигаетсяописываемым способом количественно- О го определения хлорхолинхлорида,заключающимся в обработке анализируемой пробы этанолом, упариваниирастворителя и пропускании остаткачерез колонку с окисью алюминия с 15 элюированием хлорхолинхлорида выпаривании элюата, растворении сухогоостатка в воде и хроматографировайиив тонком слое катионита с последующей обработкой полученной хромато граммы 21-25-ным раствором серной или 3-5-ным раствором солянойкислоты и последовательной обработкевысушенной хроматограммы 10-12-нымраствором фосфорномолибденовой кис лоты и 0,8-1,2-ным раствором двухлористого олова и просветлении полученной хроматограммы 65-75-ным раствором иммерсионного масла в гексанеили петролейном эфире и спектрофоЗ 0 тометрировании хроматограммы.7676 3Сйособ осуществляют следующим образом.Навеску измельченного образца заливаюг этанолом. Выпаренный до 1-2 мл этанольный экстракт пропускают однократно через колонку с окисью алюминия с последующим элюированием хлорхолинхлорида раствором этанола в ацетоне. Полученный элюат выпаривают досуха, а сухой остаток растворяют в 0,5 мл воды и 0,05 мл с помощью микропипетки наносят напрозрачную хроматографическую пластийку с тонким слоем катионита. Через пластинку пропускают восхОдящий ток 23-ной серной кислоты или 4-ной соляной кислоты ее обрабаты вают 11-ным водным раствором фосФормолибденовой кислоты. Затем пластинку промывают проточной водой в течение 30 мин, обрабатывают 1-ным водным раствором двухлористогоолова,.;щ ополаскивают в водопроводной воде,сушат до воздушно-сухого состояния под Феном, просветляют 70-ным иммерсионным маслом в гексане или петролейном эфире, измеряют оптическую плотность полученной хроматограммы в проходящем свете при 73010 нм на спектрофотометре (например, СФ) и по калиброввочному графику определяют количество хлорхолинхлорида на пластинке и затем в анализируемом образ- ЗО це.П р и м е р. 100 г измельченного образца экстрагируют 300 мл 80-ным этанола в течение 3 ч. Экстракцию повторяют трижды. Суммарный объем 35. экстракта выпаривают до 1-2 мл на ротационном испарителе и остаток количественно переносят в колонку с окисью алюминия (диаметр 12 мм, . высота набивки 250 мл), Через колон- р ку пропускают 20-ный этанол в ацетоне со скоростью 2-3 мл/мин. Первые 20 мл элюата отбрасывают,а затем собирают 100 мл элюата, который выпаривают досуха на ротационном испарите= ле. Сухой остаток растворяют в дистил-флирбванной воде.На прозрачной пластинке размером100 х 70 мм с закрепленным тонким слоем катионита проводят мягким карандашом стартовую линию вдоль одной Ииз меньших сторон и на расстоянии15 мм "6 т йее. На стартовой линии отмечают зоны нанесения шириной 5 мми интервалами 10 мм (4 зоны). В намеченные зоны микропипеткой наносят 55по 0,05 мм полученного водного раствора сухого остатка в двухкратнойповторности (по 2 образца- на"пластйн-,ку),": .Несколько хроматографических плас-,Отинок с нанесенными экстрактами ставятребром, вдоль которого проведена фартоваялиния, на дно стеклянно-го сосуда, в который предварительнойалит 21-ный раствор серной кислоты 39 или 3-ный раствор соляной кислоты слоем 5-8 мм и закрывают крышкой. После того, как фронт растворителя поднимется на высоту 80 мм от старто" вой линии, пластинки вынимают, сушат в течение 1-2 мин под феном и проявляют.Проявление проводят путем опускания в 10-ный водный раствор фосФорномолибденовой кислоты на 2-3 с, последующего выдерживания на воздухе в течение 1-1,5 мин для стекания избытка реагента, промывки в проточной воде в течение 30 мин, просушку нод феном в течение 2-4 мин, опуска- ния в 0,8-ный водный раствор двухлористого олова (аналогично первой операции), ополаскивания в водопроводной воде и просушки под феном до воздушно-сухого состояния. На светло-голубом Фоне проявляются темно- синие пятна Фосфорномолибденового комплекса хлорхолинхлорида на расстоянии 14-15 мм от стартовой линии и еще выше на 7-8 мм ХХХ,а над ним хлоргидрата триметиламина.Проявление хроматограммы просветляют 65-ным иммерсионным маслом в гексане или петролейном эфире и измеряют оптическую плотность участков, содержащих пятна хлорхолинхлорида, Относительно соответствующих участков пластинки под пятнами при длине волны 730+10 нм на спектрофотометре (СФ). Полученную величину оптической плотности переводят в количество мкг ХХХ по калибровочному графику, предварительно построенному по результатам Фотоколориметрирования хроматограмм стандартных растворов чистогоХФ.Градуировочный (калибровочный) график строят следующим образом.На аналитических весах взвешивают 1 г хлорхолинхлорида с точностью до 0,01 г. Навеску переносят в мерную колбу на 200 мл и растворяют в 1-ной соляной. кислоте. Объем доводят до метки. С помощью бюретки переносят в 4 мерные колбы на 100 мл соответственно 1, 4, 7 и 10 мл полученного стандартного раствора ХХХ и разбавляют до 100 мл дистиллированной водой.50 г катионитовой смолы типа Ку-8 разматывают на шаровой мельнице и просеивают через сито с отверстиями 0,1 мм, 40 г измельченной смолы переносят в коническую колбу на 250 мл,заливают 100 мл О, 1 н. МаОН и взбалтывают 1 ч. Затем суспензию переносят на бумажный фильтр в воронке Бюхнера и промывают дистиллированной водой до нейтральной рН. Заваривают 1 г крахмала или .поливинилового спирта в 15-20 мл дистиллированной воды, охлаждают, разбавляют дистиллированной водой до 110 мл; засыпают катионообменную смолу, переведенную в Ма -форму, и перемешивают, Полученную однородную массу наносят слоем толщиной 0,20-0,25 мм на стеклянные (1-1,5 ьм) или полистироловые . (0,20 мм) пластинки, предварительно нарезанные размером 70 х 100 мм и сушат на воздухе 12-14 ч.На приготовленнйх таким образом тонкослойных катионитовых пластинах поверхкатионита параллельно одной из меньших сторон и на расстоянии 15 мм от нее мягким карандашом проводят стартовую линию, на которой размечают зоны нанесения стандартных растворов шириной 5 мм и интервалами 10 мм (4 зоны). С помощью микропипеток на размеченные зоны на носят разбавленные стандартные растворы по 0,01 мл в порядке увеличения концентрации, что составит градацию количества ХХХ по зонам соответственно 0,5:2,0; 3,5 и 5,0 мкг, Нанесение 20 осуществляют путем многократного касания конца микропипетки с катионитом вдоль стартовой линии в границах размеченной зоны, с промежуточным высушиванием под феном. 25В хроматографическую камеру наливают 23-ную серную (или 4-ную соляную) кислоту слоем 5-7 мм и ставят в нее хроматографические пластинки на ребро, вдоль которого нанесен ЗО хлорхолинхлорид. После продвижения фронта раствора кислоты на высоту 80 мм от стартовой линии пластинки вынимают из камеры, обтирают Фильтровальной бумагой капли раствора кис лоты и сушат под феном в течение 10-20 с.Для проявления хроматограмм пластинки опускают на 2/3 высоты в 11- ный раствор фосфорномолибденовой кис лоты, который предварительно готовят в химическом стакане на 400 мл в количестве 300 мл. Выдержав 2-3 с в проявителе, пластинки вынимают, дают стечь избытку раствора и промывают в пяти порциях водопроводной воды 45 по 5 мин и затем 5 мин - в дистиллированной воде. Дают стечь свободной воде, поставив пластинки вертикально на фильтровальную бумагу на 3/4 мин, и обрабатывают 1-ным раствором 50 двухлористого олова в 10-ной соляной кислоте аналогично первой процедуре. Ополаскивают проявленные пластины в водопроводной воде и сушат под феном до воздушно-сухого 55 состояния, предварительно дав стечьсвободной воде.На светло-голубом фоне образуютсятемно-синие пятна комплекса хлорхолинхлорида с фосфорномолибденовой кислотой на расстоянии 14-15 мм от стартовой линии ( В = 0,20 + 0,01), Другиесоли аминов - холинхлорид и хлоргидрат триметиламина не мешают определению (их Бравны О, 340, 01 и О, 36+10,01 соответственно), а бетаин приэтом способе не проявляется. Проявление хроматограммы просветляют посредством мазков мягкой кисточкой,смеченной в 70-ном иммерсионноммасле, не менее, чем за 1 ч до измерения их оптической плотности. Одновременно с этой операцией включаютспектрофотометр на прогрев,Для измерения оптической плотности хроматограмм в держатель плоскихтвердых образцов (имеющийся в комплек-се спектрофотометров) вставляют диафрагму из тонкого картона, проссшпана,фольгиили других непрозрачных мате-риалов, окрашенных в черный цвет.Содержание хлорхолинхлорида в анализируемом образце вычисляют по формулеА= - 1Б ГВ Г 2где А - содержание хлорхолинхлорида,мг/кг или мг/л;Б - количество хлорхолинхлоридана хроматограмме, вычисленное по измеренной оптической.плотности и коэФфициенту пропорциональности, полученногоиз градуировочного графика,мкг;В - масса анализируемого образца, г, или объем, например,воды, л;Г - объем раствора сухого остатка элюата, мл;Г - объем раствора, нанесенный,ана пластинку, мл.В таблице приведены результаты определения ХХХ.По известному споообу не достигается полной очистки хлорхолинхлорида от холинхлорида. Поэтому результаты анализов получаются завышенными вследствие присутствия холинхлорида в. фотометрируемом растворе.Время определения сокращается до 2-3 суток.767639 Результаты определений количества хлорхолинхлорида (ХХХ) в различных образцах по известному и предлагаемому способам Определено ХХХ, мг/кг ФР Образцы по известному по предлагаемому способу 2,25 + 0,69 1,71 + 0,33 ДополнительТоматыТо же 1,95 + 0,61 1,27 + 0,29 но обнаружеФ0,74 + 0,21 но содержа 1,04 + 0,32 1,64 + 0,55 0,11 + 0,41 3. 4,0,00 ние холинКартофель 5. 0,00 хлорида (от То.же 0,9 до9,8 мг/кг) Формула изобретения Составитель Л.СоломенцеваРедактор И.Грузова Техред А.Ач Корректор М.Вигула Эаказ 7185/40 Тираж 1019 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Способ количестйеййого ойределения хлорхолинхлорида путем обработкианализируемой пробы этанолом, упа" ривания растворителяи пропусканияостатка через колонку с окисью алюмиййяспоследующим элюированием хлорхолинхлорида, включающий спектрофотометрирование, о т л и ч а ю щ и й с ятем что, с целью сокращения времени -и"повышения точности определения,элюат выпаривают, сухой остаток растворяют в воде и хроматографируют в-тренком-слое катионита с последующейобработкой полученной хроматограммы21-25-ным раствором серной кислотыили 3-5-ным раствором соляной кислоты и последовательной обработкойхроматограммы 10-12-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты и 0,81,2-ным раствором двухлористогоолова и просветлением полученной хро матограммы 65-75-ным раствором иммерсионного масла в гексане или петролейном эфире и спектрофотометрированием хроматограммы.Источники информации, 30 принятые во внимание при экспертизе1. Бляим К. Колориметрическиймикрометод определения остатковССС (хлорхолинхлорида) в зерне гпаеницы.-Прикладная биохимия и микро биологияф, 1970, Р 1, с. 230. 2. Временные методические указанияпо применению и зональному производственному использованию препарата тур4 О на землянике, МСХ, СССР,1976 (прототип) .