Способ определения аллергенных свойств молочного белка

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Союз СоветскихСоциалистическихРеспублик К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(22) заявлено 1903, 81 21) 3288527/28" 13 31) М. Ки.з 0 01 й 1/28А 6 В 10/00 с присоединением заявки Йо(23) Приоритет Государствеиицй комитет СССР по делам изобретеиий и открытий" хГффАл " фИнститут питания АМН СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЛЕРГЕННЫХ СВОЙСТВ МОЛОЧНОГО БЕЛКА Изобретение относится к медицине, а именно к гигиене питания, и может найти применение при подборе диет, снижающих проявление аллергииИзвестен способ определения действия продуктов питания на проявление аллергии путем введения молочно" го белка энтерально животным с последующим воспроизведением анафилактического шока введением разрешающей дозы яичного белка (1 .Однако такой способ требует длительных сроков, из-за отсутствия эта" лона обладает малой точностью, а при энтеральной сенсибилизации энтераль. ное разрешение может быть полностью неэффективным.Цель изобретения - повышение точности способа.Поставленная цель достигается согласно способу определения аллерГЕн- . ных свойств молочного белка путем его энтерального введения животным с последующим воспроизведением анаФилактического шока введением разрешающей дозы яичного белка, при кото" ром молочный белок вводят в течение двух-трех месяцев, далее под кожу лап трехкратно с интервалом в 23-24 ч вводят 2,5-3,0 мг яичного белка, за" тем через 15-20 дней после последне" го введения парентерально вводят разрешающую дозу, при этом ее устанавливают путем парвнтерального введения другой группе животных яичного белка в дозе, вызывающей в 40-,60 их гибель, н по разнице погибших животных в опытной и контрольной .группах определяют аллергенные;свойства мо" лочного белка,На чертеже првдставлена пробит-логарифмическая зависимость частоты смертельного анафилактического шока от разрешающих доз яичного белка (в десятичных логариФмах). Способ осуществляют следующим образом,Животным энтерально вводят молочный белок в течение двух-трех месяцев, далее под кожу лад трехкратнос интервалом в 23-24 ч вводят 2,53 мг яичного белка, затем через 1520 дней после последнего введенияпарентерально вводят разрешающую до"зу, при этом ее устанавливают путемпарентерального введения другой группе животных яичного белка в дозе,вызывающей в 40"60 их гибель, и поразнице погибших животных в опытной(смертель" ный анадилактический шок) Выраженный наблюдаемый эффект Ожидаемые ре"эультаты Разность между наблюдаемйм и ожидае"мым про"центами Дозы яичного бел ка, вводимого через рот, мг/кг Сложение.для хфпробиты пробиты О/16 2,42 0,5 2)79 1,4 0,9 4,46 29,4 4,37 26,3 3,1 0,0058 0,0050 1.6 5717 80 12/18 543 . 66 ф 7 5 к 44 400 67,0 0,3 75,2 2,6 0,0036 7/9 77,8 5,68 600 5,77 П р и м е ч а н и е. Среднее число животных в группе 15, К-число нанесен"ных доз=0,0144х=0,216 и контрольной группах определяют аллергенные свойства молочного белка.П р и м е р 1, Для определения действия сухого творога на проявле" ние аллергии берут две группы морс" ких свинок массой 300"320 г,) 50 жи вотных в опытной и 30 животных в кон,трольной группе,Контрольная группа в течение одного месяца содержится на обычном виварном рационе. В течение этого сро ка опытная группа животных наряду с обычным виварным рационом получает сухой творог, хранившийся при + 4 сС в течение двух месяцев, из расчета 10 г белка в сутки на одного живот ного. После окончания данного срока каждое животное иммуниэируют 2,5-3 мг яичного белка в подушечки лап трех- кратно с интервалом между введениями 23-24 ч. Через 15-20 дней после окон(1 чания иммунизации в контрольной группе животных определяют разрешающую дозу яичного белка, которая вызывает смертельный анафилактический шок у 40-60 животных при введении яичного белка морским. свинкам через рот. Значение разрешающей дозы для 40-603 величины смертельного анафилактического шока определяют расчетным спосо"бом. Для этого берут 60 морских свинок, иммунизируют их 3 мг яичного белка вышеуказанным способом. Через 15 дней после окончания иммунизации животных разделяют на 4 группы и вво" дят им через рот различные разрешающие дозы яичного белка 16 мг/кг мас-Зэ сы животного 16 80 мг/кг 17;400 мг/кг 18 и 600 мг/кг 9 животным.) Результаты по воспроизведению смертельного анафилактического шока в зависимости от разрешающей дозы яично" го белка представлены в табл, 1.Используя частоты смертельного анафилактического шока от разрешающих доз яичного белка 80 мг/кг, 400 мг/кг и 600 мг/кг, строят пробит- логарифмическую зависимость, представ" ленную на чертеже, из которой видно, что 50 случаев смертельного анафилактического шока возникают от разрешающей дозы яичного белка, логарифм которой равен 1 д=2,26. Разрешающая доза яичного белка, соответствующая найденному логрифму, составляет 182 мг/кг массы морской свинки. Теоретически рассчитанное значение х для числа степеней свободы Й, равно числу доз, нанесенных на гра" Фик, уменьшенному на 2 (в данном случае 2=2) при уровне достоверности Р=0,05, составляет х -5,99. Поскольку вычисленное х=0,216 меньше теоретически рассчитанного значения х= =5,99, то проведенную прямую считают достоверно соответствующей нане" сенным точкам.Далее каждому опытному и контрольному животному через рот вводят1 182 мг яичного белка и определяют частоту смертельного анафилактического шока. Частоты развития смертельного анаФилактического шока в опытной и контрольной, группах животных представлены в табл. 2., 993095 Таблица 2 уппа животйых 56,Группа животны опытная (иэомил п= 30 контрольн Ъ погибши сло погибших Дс:Ю73; составнии критерия стандартны ишера - Рэ кими при Ч 1 Оф Ч 1 ю 4947 ю Чд Оф 92Р=е 48. При сравне верности РЧ 4,48 со ачениями критерия Ф еленными теоретичес и 2 ляет дост ми э опреДостоверную разницу между исследуемыми группами определяют по критерию ФИ- Ч (углового преобразования) фишера. Критерий достоверности Р, .вычисленный нри значениях п=30, и = 50, Ч=1,7052 и Ц 0,6435, состав" ляет Р=21,135.При сравнении критерия достоверйости Р 21,135 со стандартными эна" чениями критерия Фишера " Р 5, определенными теоретически при Ч 1 и Ч=п. +и 2 и равными Р(4, 0-7, 0-11, 9) видно, что разность между исследуе". мыми группами достоверна по третьему порогу вероятности безошибочных прогнозов, т.е. Р0,001.Затем сравнивают,насколько раз" нятся величины смертельного анафилактического шока опытной и контрольной групп животных. Эти величины соответственно равны 10 и 56,7. Делают вывод, что сухой творог снижает проявление аллергии на 46,7 по сравнению с контролем., Н р и м е р 2. Для определения действия изомила на проявление Число погибших, % погибших Достоверную разницу между исследу емыми группами определяют по критерию ФИ - 9 (углового преобразования), Критерий достоверности Р, вычисленный при значениях п 1 26,аллергии берут две группы морскихсвинок массой 300-350 г, 30 животныхв опытной и 26 животных в контрольной группе. Контрольная группа в течение одного месяца содержится наобычном виварном рационе. Опытнаягруппа в течение этого срока нарядус обычным виварным рационом получаетиэомилф,.хранившийся при комнатной температуре в течение трех месяцев, иэ расчета 5 г белка в сутки наопытного животного. После окончанияданного срока каждое животное иммунизируют яичным белком вышеописанным З 0 способом. Через 15 дней после окон"чания иммунизации каждому опытномуи контрольному животному через рот .вводят разрешающую дозу яичного белка 182 мг/кг, которая согласно расЗ 5 четным вызывает 50 случаев смертельного анафилактического шока в контрольной группе животных.Частоты развития смертельного анафилактического шока в опытной и конт рольной группах животных представле"ны в табл. 3.Т а б л и ц а 3/У РФ и Чц=п+п=54 и равными Р =4,0-7,1" 12,1),Ьидно,что разность между исследуемыми группами достоверна по перво" му порогу вероятности безошибочных прогнозов, т.е. Р0,05.Затем сравнивают, насколько раз" нятся величины смертельного анафилактического шока опытной и контрольной групп животных. Эти величины сост" ветственно равны 20 и 46,2. Делают вывод, что продукт детского питания изомил (заменитель коровьего молока) снижает проявление аллергии на 26,2 по сравнению с контролем.Положительный эффект достигнут в связи с изменением технологии при ис. 15 пользовании изобретения и выражает" ся в том, что точность способа повышается за счет введения эталона, вос" производимость анафилактического шока увеличивается за счет применения 20 приема парентеральной иммунизации экс- периментальных животных растворимым пищевым белком.Кроме того, сокращаются сроки исследования. 25формула изобретенияСпособ определения аллергенных свойств молочного белка путем его энтерального введения животным с последующим воспроизведением анафилактического шока введением разрешающейдозы яичного белка, о т л и ч а ющ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, молочный белОкживотным вводят в течение двух-трехмесяцев, далее под кожу лап трехкратно с интервалом 23-24 ч вводят 2,53,0 мг яичного белка, затем через15-20 дней после последнего введенияпарентерально вводят разрешающую дозу, при этом ее устанавливают путемпарентерального, введения другой группе животных яичного белка в дозе,вызывающей в 40-60 их гибель, и поразнице погибших животных в опытнойи контрольной группах определяют аллергенные свойства молочного белка. Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Наг 1 у 6, ТЬе раппеаЬ 111 Су ОЕЬе 9 ая 1 го 1 п 1 гя 11 па 1 вцсояе ой дц 1 пеа родя го сгуя 1 а 111 пе едда 11 цш 1 п.,тоцгпа 1 ой з.пппцпо 1г 1942, Ч. 43,в 4, р, 297-309,НИИПИ Заказ 443/57 ираж 871 Подписное Филиал ППП "Патен 1",г.ужгород, ул.Проектная,