Способ определения количества белка в молоке

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскикСоциалистическихРеспублик н 930118(23) Приоритет а 01 И 33/04 Государственный комитет ССС Р по делам. изобретений и открытийОпубликовано 2305,82. Бюллетень М 9 19 Дата опубликования описания 23.05. 82 В.В.Вайткус, В.Б.Сайкаускене и Л.П.Барздай ене(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА БЕЛКА В МОЛОКЕИзобретение относится к молочнойпромышленности, а именно к методамтехнохимического контроля молока,и может найти применейие на молочныхфермах, пунктах по приемке молока,и в научно-исследовательских лабораториях.Известен способ онредепения количества белка в молоке, предусматривающий подготовку раствора реактиваиз красителя, Оранж Ж и лимоннойкислоты, смешивание его с исследуемой пробой, выдержку, удаление осадка с последующим измерением оптической плотности и определением количества белка по калибровочному графику (11.Однако известный способ не достаточно точен и требует больших затратвремени.,Цель изобретения - повышение точточности и сокращение времени определения..Указанная цель лостигается тем,что при осуществлении способа определения количества белка в молоке, предусматривающего подготовку растворареактива иэ красителя Оранж Ж и лимонной кислоты, смешивание его с исследуемой пробой, выдержку и удаление осадка с последующим измерением оптической плотности и определением количества белка по калибровочному графику, дополнительно исследуемую пробу разбавляют водой в 6-24 раза перед смешиванием с раствором реактива, а при подготовке последнего краситель Оранж Ж берут в количестве 0,20-0,25 г/л.Кроме того, смесь исследуемой пробы с раствором реактива выдерживают 20 мин, а удаление осадка осуществляют путем центрифугирования.На чертеже показана зависимость количества связанного красителя от концентрации белка. Анализ данных, приведенных в таблице показывает, что использование реактива красителя с меньшей концен, трацией, чем 0,2 г/л приводит к не.пропорциональному связыванию красителя количеству добавленного молока. Ввиду меньшего связывания красителя молоко можно разбавлять водой в соотношении 1:2. Увеличение концентрации красителя более, чем 0,25 г/л также не имеет сусла, поскольку при увеличении концентрации красителя его связывание не улучшается.930118 исследования определяют по примеру 1.Способ обладает следующими преимуществами,При смешивании реактива красителяОранж Ж, содержащего уменьшеннуюконцентрацию красителя, но не измененную концентрацию лимонной кислоты,с разбавленным молоком образуется .(легко отделимюйосадок, при этом нетнеобходимости разбавления Ьупернатанта, что ускоряет анализ; сокращаетсяв 4 раза расход красителя, результаты определяются как при 485 нм, таки при 475 нм, уменьшается количествотребуемой посуды и рабочей площадидля проведения анализа; уменьшаетсявлияние периода лактации, кормления,сезона года и,породы животных на показатепи анализа. Анализ ускоряетсяеще на 5-10 мин заменой фильтрования центрифугирования. При этомзначительно повышается точность анализа в связи с исключением небелкового .связывания красителя адсоорбциейего на фильтрах, а также получаетсяпрямолинейная зависимость количествасвязанного красителя от концентрациибелка, идущая через начало координат. Концентрация Разбавление молокакрасителя, дистиллированнойг/л водой в соотнсыении 476 0,15 0,019 0,021 О., 045 0,101 О, 1800,303 1 з 23 1 й 11 0,039 1:7 1:5 1:3,8 0,485 1:3 0,014 0,022 0,040 0,055 0,070 О, 100 1 з 23 0,20 1:7 1:5 1:3,8 1:3 0,25 О, 01.7 123 0,028 0,040 0,052 0,068.1:7 1:5 1:3,8 Способ осуществляют следующим образом,П р и м е р 1. Приготовляют ре-актив .красителя Оранж Ж (0,20 г красителя и 21 г лимонной кислоты растворяют в 1 л дистиллированной воды),.10 мп раствора красителя смешиваютс 0,6 мп молока разбавленного дистиллированной водой в соотнсыении1:23 выдерживают 20 мин, измеряютоптическую плотность на спектрофотометре Сф 26 при длине волны 475 нм.Далее по оезультатам оптической плот-.ности по калибровочному графику,построенному с помощью метода Къепьдаля, определяют содержание белка в 15данном образце молока.П р и м е р 2. Приготовляют реактив красителя Оранж Ж (0,25 г красителя и 21 г лимонной кислоты .растворяют в .1 л дистиллированной воды). 2010 мп раствора красителя смешиваютс 0,6 мп молока разбавленного дистиллированной водой в соотношении 1.:5,выдерживают 20 мин, центрифугируют10 мин, измеряют оптическую плотность на спектрофотометре Сфпридлине волны 485 нм, Далее результаты Оптическая плотность4 ВБ 0,0840,1500,2620,4400,01250,0210,0380,0530,0680,0910,01650,0260,0380,0500,065:Продолжение таблиц Разбавление молокадистиллированнойводой в соотношении Концентрациякрасителя,г/л д 4 Й0,083 0,097 0,455 О, 080 0,090 0,404 1 з 3 1:2 10 01: 23 0,013 О, 015 0,027 О, 040 0,30 1:7 0,048 1:5 0,065 0,075 1 й 3,8 1:3 Формула изобретений 1. Способ определения количества 30 белка в молоке, предусматривающий подготовку раствора реактива из красителя Оранж Ж и лимонной кислоты, смешивание его с исследуемой пробой, Выдержку, удаление осадка с последующим измерением оптической плотности и определением количества белка по калибровочному графику, о т л и .ч аю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и сокращения време ни определения, исследуемую пробу разбавляют дистиллированной водой В 6-24 раза перед смешиванием с растОптическая плотность устойчивая суспензия 0,025 0,037 0,047 .0,062 0,073 вором реактива, а при подготовке.в количестве 0,20-0,25 г/л,2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем; что смесь исследуемой пробы с раствором реактива выдерживают 20 мин, а удаление осадка осуществляют путем центрнфугнрования.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Капланас Р. Определение количества белков в молоке с помощьюспектрофотометра по связыванию красителя Оранж Ж. - "Труды Литовскогофилиала ВНИИМСа, Вильнюс, изд-воМИНТИС, 1973, т.у 111, 207-210.930118 4 ц Ч мк 1 И раза раюда 1 ленняе мовенаСоставитель Н.АрцыбашеваРедактор Т.Киселева Техред М. Рейвес . Корректор О.Билак Заказ 3456/55 Тираж 883. Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4