Способ получения протеина

Союз Советских Соцнапнстнческнх Республик(ЗЗ) Япони по делам и и откр(72) Авторы изобретения ИностранцыЯзуси Моринага, Сигеру Яманака, Есио Хирозе (Япония) Иностранная фирм Адзиномото Ко,Инкявите СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТЕИНА с ей го плеое м Изобретение относится к областимикробиологического синтеза и касается техники получения протеина.Известен способ получения протеина путем выращивания продуцирующихего микроорганизмов рода Р(ейуогпопана питательной среде, содержащейисточник углерода, азота и. необходимые минеральные соли в условияхаэрации с последующим отделением целевого продукта 1).Указанный известный способ является наиболее близким решением кописываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату.Недостатком известного спбсобаявляется невысокий выход протеина.Целью изобретения является увеличение выхода протеина.Это достигается тем, что в предлагаемом способе получения протеинав качестве продуцента микроорганизмов из рода Мейотопов используютштамм,Ъейу(отопаб ьр, РВВР( Р.При этом в качестве основного источника углерода используют метан,а в качестве дополнительного источника углерода - дрожжевой экстракт или ЗОпептон,Новый штамм ЯейуЪтюпоь ьр. РЕЯЛРполучен в Исследовательскоминституте ферментации Японии (Гегтеп 1 обап Резеагсп Зп 81 Яисе,Аеису от (.идиМг.а(. 8 сепсе апд ТесЬпооац ог Ьпдоэтг)а( Тгаде,СЬбо, Эороп ) при культивировании вприсутствии метана в качестве, единственного источникат углерода в неорганической жидкой среде при встряхивании и температуре 30 С эа 18 часов,Морфологические признаки.,Одноклеточные палочки 1,0-1,2 х 2,0-3,5,передвигаются с помощью полярногожгутика, граммотрицательные, но.иногда клетки частично положительноокрашены на ранней стадии роста.Иногда образуются разетки. Спорыили кисти не образуются. Культивирование на неоргани ком косом агарев среде, состо из метана в качестве единствен источника углерода эа 24 часа,Палочки, иногда проявляющие морфиэм, размер 1,0-1,2 х 3-6. Кл склеиваются одна с другой вязк веществами р иногда наблюдаютс разветвленной форме.673185 40 45 55 Гранулированные вещества,легко окрашиваемые суданом черным, наблюдаются в клетках, споры и кисти не образуются.Вид агаро-агаровых колоний. Культивируется на чаше с неорганическим агаром в присутствии метана 16 дней диаметр 1,0 мм, круглый, плоский, гладкий, сплошной, маслянистый, цвет, от белого до темно-желтого, непрозрачный, Не образует растворимого пигмента.10 Питательная чаша с агар-агаром. Не развивается.Физиологиеские признаки, Катализа-полижительный, оксидаэа-положи 15 тельный, у молодых, культур -оксидаэная активность, которая легко теряется у более взрослых культур. Нитрат восстанавливается в нитрит. Оптимальная температура роста 35- 37 С, при 40 С роста не наблюдается.ОптималЬный рН роста составляет 6,0-7,5. Аэробныйетанол и этанол не использует.Мформальдегид и ацетальдегид не исполь 25 зует. Метиламин и этиламин не использует. Органические кислоты (в виде солей); форматы, ацетаты, цитраты, сукцинаты, оксалаты или глюконаты карбогидраты не использует. 30П глюкозу, фруктозу, сахарозу,П - рибозу, П -ксилоэу, лактозу,П - галактозу, ( -рамнозу, П - ара- бинозу, 0 - мальтозу и Р - манноэу .не использует. 35 Крахмал, дрожжевой экстракт, пептон, казаминовые кислоты, раствор вымоченного пшена или гидролизаты соевого масла не использует. Дрожжевой экстракт и пептон сти-мулируют рост, -.Способ осуществляют следующим образом.Продуцируюшие протеин микроорга, ниэмы из рода Лейу 1 о жопами 8 р, ГЕЙМРвыращивают на питательнойсреде, содержащей источники углерода,азота, необходимые минеральнйесолив условиях аэрации.Источником азота служат соли аммония, такие как сульфат и хлорид,аммойия, нитрат калия, нитрат аммония,водный раствор аммиака, а также газообразный аммиак, при этом солиаммония используют в количестве0,03-0,2." - В качестве минеральных солейиспользуют фосфаты калия, сульфатмагния, сульфаты железа и меди.В качестве основного источникауглерода используют метан, а в качестве дополнительного источникауглерода - дрожжевой экстракт илипептон. Подаваемый газ состоит из20 метана и 80 воздуха,После культивирования бактериальные клетки отделяют центрифугированием, промывают и сушат.Выход протеина составляет 65-67(сухого).П р и м е р 1. 20 мл водного раствора питательной среды состава, г/л:.(Бн) Я 00,5, КнРО 0,3 Ма НРОахх 12 Н,О 1,8;МцЯО 7 Н О 0,2,ГеЯО 7 Н,О0,01; СцЯО,;5 Н О 0,001, помещаютв 500 мл колбу при встряхивании истерилизуют.Ла среду:инокулируют штаммЛейу 1 о.щопаз зр. РЕВМ Р. Воздух вколбе заменяют газом, состоящимиз 20 метаном и 80 воздуха, иколбу герметично закрывают. Инокулированную среду поддерживают при 36,54 С25 час при встряхивании.В течение 20 час штамм растет соскоростью, примерно, 0,17 час .Затем клетки отделяют центрифугированием, промывают и сушат, получая сухой клеточный материал 0,6 г/л.Содержание азота в сухой клетке 10,4,а сухого протеина, примерно 65.П р и м е р 2. 400 мл воднойпитательной. среды, имеющей тот жесостав, как описано в примере 1, атакже содержащей дополнительно дрожжевой экстракт 0,5 г/л, помещают в1 л стеклянный сосуд для ферментации и стерилизуют.На среду инокулируют 20 мл семенной культуры Яе Я у 1 отопар Р00,полученнойпо примеру 1, и культивируют при 36,5 С 48 час при перемешивании со скоростью 1200 об/мин.Через среду весь период культивиро-,вания барботируют газообразный метансо скоростью 30 мл/мин и воздух160 мл/мин, рН поддеоживают б,б газообразным аммиаком.В течение 36 чаб штамм растет логарифмически с удельной скоростью роста 0,2 час 1. Концентрация бактериальных клеток через 36 час составляет8,2 г/л.Бактериальные клетки отделяют,получая 16,8 г/л сухого клеточногоматериала.П р и м е р 3. Питательную средуполучают и культивируют, как в примере 2. оЧерез 30 час культуральную жидкость с содержанием 4,8 г/л бактериальных клеток (вес сухих клеток)постепенно разбавляют свежей средойсо скоростью 0,15 час . Через 18час после начала разбавления культуральная жидкость содержит 4,3 г/л(считая на вес сухой клетки) бактериальных клеток,Выход составляет 66 на основепоглощенного метанаСравнительная характеристика свойств штамма Ме 1 Б уояопа 5 5 Р, РВЯМРи известнйх приведены в таблицах 1 и 2,673185 ологнческиенаки Недоразвитаякисть типаАгоЬас 1 егКиста типа аметного плеомизма не наблюается РеФ Л Ч 1 олюл Палоч 1 Ла 1 о басите Пал Наблюдается подбие разновидностям, образующимкрупную клетку АгоЬас 1 ег Мейц 1 оп 1 ола В5. РБЙИ ридкой среде наблюдается фологического изменения, однако, плеоморфизм наблю-. дается в агаровой е распознано Палоч В жнемор с л ст ст м йlфф 1 ей 1 уГо 1 полаз 5 Р РЕДУТ РБелый до темножелтого+ От белогодо коричневогоОт белогодо коричневого последующим продукта, тем, что, с протеина, в микроорганипаЛ исполь Э.НРМ Рор пи родамм Ме фбрмула изобретения1. Способ получения протеинаащивания продуцирующих его мианиэмов рода Ме 1 Ь 1 отола 8ательной среде, содержащей иуглерода, азота и необходимыальные соли в условиях аэрац путемкронаточе мин с ТаблиЦа 2 отделе т л и целью качест мов иэ уют шт О. ием целевого ч а ю щ и й с я овьзаения выхода е продуцирующихМе йа 1 олюЮу 1 оеопа 5673185 ч а ю- основ- зуют ч а ю- допол 2. Способ по и. 1, о т л и щ и й с я тем, что в качестве ного источника углерода испольметан,3. Способ по п. 1, о т л и щ и й с я тем, что в качественительного источника углерода используют дрожжевой экстракт или пептон,Источники информации, принятые во внимание при экспертизе1. Патент Франции 9 2175199, кл. С 12 О 13/06, 1973.Составитель А. БражниковаРеаактор Б. оииркгииате е Б. Блфероаако иктор О, БилакЗаказ 3736/56 Тираж 525 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035 Москва Ж"35 Ра шская наб. , 4 5филиал ППП РПатент, г, Ужгород, ул.Проектная, 4