306637

ОП ИСАНИ ЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Вова Советских Социалистических РеспубликЗависимый от патентаЗаявлено 31 Х 1.1967 ( 1176749/28-13)Приоритет 08 Х 111,1966,51664/66, ЯпонияОпубликовано 11.71.1971, Бюллетень19Дата опубликования описания 19 Х 11.1971 МПК С 12 с 1 13/06 Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССРАвторизобретеци Иностранец Кииоши Накаяма(Япония) Иностранная фирма Киова Хакко Когио Компани Лима явите тед ПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНИНОВЫХ СОЕДИНЕНИИ разработка 25 ифосфата и брожения в им выходом,Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения аденозиндифосфата и аденозинтрифосфата, которые используются как биохимические реагецты, медикаменты, а также принимают у )а стие в синтезе ацетилкофермента А, активного сульфата и холестирица.Известен способ получения адениновых соединений путем выращивания их продуцеыгов, например СогупеЬас 1 ег 1 цгп, ВгелЬас 1 ег 1 цп ца 10 питательной среде, содержащей источники углерода, например глюкозу, фруктозу, сахарозу, крахмал, мелассу, глицерин и органические кислоты. В питательной среде имеются также источники азота, например мочевина, 15 аммониевые соли, гидролизат казеина, дрожжевой экстракт. Процесс идет в присутствии неорганических веществ, необходимых для роста продуцентов, например сульфата аммония, фосфата натрия, и адецина или его производ ных при температуре 20 - 40 С и рН среды 5,0 - 9,0 с последующим выделением аденицовых соединений из культуральной жидкости. Целью изобретения являетспроцесса получения аденозинаденозинтрифосфата методомпромышленном масштабе с высо Для этого в качестве штаммов с высокой сг особцостью продуцировация адецозцндцфосфата или аденозинтрифосфата применяют специальные виды СогупеЬас 1 ег 1 цш, Вгел.;ас 1 егшгп, Аг 1 пгоЬас 1 ег и М 1 сгососсцв.Микроорганизмы, использованные в изобретении, отличаются тем, что оци продуцируют аденозиндифосфат и аденозицтрифосфат в питательной среде в том случае, если выравнивание этих микроорганизмов производится в присутствии аденица. Питательная среда содержит определенное количество неорганических фосфатов, а также источники азота, неорганические соединения и т п используемые микроорганизмами. По предлагаемому способу применяют питательную среду, в которой содержание углеводов как основного источника углерода составляет около 5 - 20% . В качестве углеводов можно использовать, например, глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу, крахмал, гцдролизат его, мелассу и т. п., а также другис источники углерода, в частности глицерин, манцит, сорбит, органические кислогы, углеводороды и т. д. При этом можно использовать один вид какого-либо углевода, либо смесь двух или более, 30663750 55 60 65 Неорганические фосфаты, которые вводят по изобретению, содержатся в количестве около 0,4 - 3% в виде РО 4. Подходящими неорганическими фосфатами, которые могут найти эффективное применение, являются тринатрийфосфат, моцонатрийфосфат, динатрийфосфат, трикалийосфат, монокалийфосат, днкалийфосфат и другие аналогичные цеор ациче. ские фосфаты. Наилучшими можно считать моно- и дикалийфосфат. В питательную среду аденин или его производные можно вводить на любой стадии процесса выращивания, причем их количество для оптимального наполнения аденозиндифосфата или аденозинтрифосфата должно быть около 1 - 10 мг/мл. Лденин можно использовать в форме инертных солей, например хлоргидрата или сульфата, либо в виде производных, например, аденозина, которые легко превращаются В адециц В результате специфических свойств, использованных штаммов микроорганизмов. Можно назвать следующие производные адецица: аденинрибозид и адецицриботид, включая такке естественные вещества, содержащие адснин.Истоником азота могут служить различныс неорганические и органические соли нли такие соединения, как мочевина или аммоццевые соли (например, хлорид, сульфат, нитрат, фосфат и т. д.), либо одна или несколько аминокислот, либо другие естественные вещества с содержанием азота, как жидкость от замочки кукурузы, дрожжевой экстракт, мясной экстракт, рыбная мука, пептон, бульон, гид. ролизат казеица, растворимые составные части рыбы, экстракт рисовых отрубей и т. д. Эти вещества также можно использовать в отдельности, либо в комбинации из двух или более веществ. Иногда может оказаться необходимым также введение в культуральцую среду некоторых специфических обязательных питательных веществ, природа которых зависит от взятого микроорганизма. Как пример можно привести различные аминокислоты, как-то: аспарагиновую кислоту, треоцин, метионин и т. д., и/или витамины, как биотнн,тиамин, кобаламин и др,Брошение проводится в аэробных условиях, например, при аэробном всряхивании культуры или при перемешивании погру жной культуры цри температуре около 20 - 40 С и рН около 5 - 9.После окончания брожения адецозицдифосфат и аденозинтрифосфат можно выделить из культураной жидкости известными способами, например с помощью ионнообмснных смол, путем осаждения металическими солями, экстракцией, обычной адсорбцией, хроматографией и т, д.П р и м е р 1. Используют СогупеЬас 1 епцгп зр383 АТСС 21084. Ее выращивают при 30 С в течение 24 час в культуральной среде, состоящей из 2% глюкозы, 1% пептона, 1% дрожжевого эстракта, 0,3% хлористого натрия и 30 мкг/л биотица,5 10 15 20 25 30 35 40 45 Среда брожения имеет следующий сосл ав (в г): 120 глюкозы, 12 КНРО 12 КН 2 РО 4, 12 МдЬО 7 Н,О, 6 мочевины, 10 дрожжезого экстракта и 30 мкг биотина на 1 л культу- ральной среды.Из указанных соединений мочевину стерилизуют отдельно в виде 12%-цого раствора и цриливакгг к 19 мл остальной части фермсцтационцой среды, которую стерилизуют в автоклаве при давлении 1 кг/см 2 в течение 10 мин, Выбранной культурой инокулиру 1 от 20 мл ферментационной среды, причем количество инокулума равно 10 об, %. Брожение проводят при аэробном встряхивании культуры при температуре 30 С. После выращивания культуры в течение 72 час добавляют аденин к ферментационной среде в таком количестве, чтобы концентрация его составила 2 мг/ил. Еще через 48 час аденозиндифосфат и аденозинтрифосфат накапливаются в ферментациоцной жидкости в количестве 1,1 и 4,2 мг/мл соответственно.Фильтрат, полученный путем фильтрования ферментационной жидкости от клеток, пропускают через колонку с сильцоосцовной ациоцообменцой смолой типа дауэкс 1 (Х 2) в хлористой форме. Каждую фракцию адецозицдифосфата и аденозинтрифосфата, которую получают путем элюирования соляной кислотой, нейтрализуют едким натром и затем обрабатывают углеродистым порошком, после чего ее концентрируют и охлаждают. Получают кристаллы натриевых солей аденозиндифосфата и адецозинтрифосфата,П р и м е р 2. Используют Аг(йгоЬас 1 ег3486 ЛТСС 21085. Условия выравнивания те же, что и в примере 1. В ферментациоцной жидкости накапливается 2,1 мг адецозицдцфосфата и 3,8 мг аденозинтрифосфата на 1 мл,П р и м ер 3. Используют М 1 егососсцз зос 1 опепз 1 в АТСС 15932, Условия выращивания те же, что и в примере 1. Количество адецозиндифосфата и аденозинтрифосфата в фермецтациоццой жидкости составляет 0,6 и 1,7 мг ца 1,ил соответственно. Предмет изобретения Способ получения адениновых соединений путем выращивания их продуцентов, например СогупеЬас(епцт, ВгеиЬас 1 епцгп, на питательной среде, содержащей исто ники углерода, например глюкозу, фруктозу, сахарозу, крахмал, мелассу, глицерин, органические кислоты, источники азота, например мочевину, аммониевые соли, гидролизат казеица, дрожжевой экстракт, в присутствии неорганических веществ, необходимых для роста продуцентов, например сульфата аммония, фос. фата натрия, и аденина или его производных при температуре 20 - 40 С и рН среды, равном 5,0 - 9,0, с последующим выделением адениновых соединений из культуральной жидкости, отличаюиийся ем, что, с целью получе.306637 Составитель С, МогилевскийТекрсд Л, Я. Левина Корректор Л. Б. Бадылама Редактор Л. К. Ушакова Заказ 20288 Изд. М 859 Тираж 43 ПодписноеЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытый прп Совете Министров СССРМосква, Ж, Раушская наб., д, 45 Типография, пр. Сапунова, 2 ния аденозиндифосфата и аденозинтрифосфата на данной питательной среде, в качестве продуцентов микроорганизмов используют один из штаммов СогупеЬас 1 ег 1 нгп вр 3483 ОТСС 21084, Лг 111 гоЬас 1 ег вр 3486 АТСС 21085, М 1 сгососсцв зос 1 опеп 518 АТСС 15932.