Способ получения -мидов-нуклеозид-5-трифосфатов

ф 4 Н Юмлая ио, в:.:а Ы БД Союз СоеетсюаСоЫмалмстическмхРеспублик Оп ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ(43) Опубликовано 25,07.78,Бюллетень27 (45) Дата опубликования описания 20.06.78 Госудврственей комитет Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий(71) Заявитель Новосибирский институт органической химииСибирского отделения АН СССР(АТф) проводят в термостатированнойкювете с погруженными в нее стеклянным и каломельным электродами для измерения рН среды с помощью потенциометра ЛПУ, Реакционная смесь содержит 45 мкмоль АТФ, 380 мг водорастворимого карбодиимида, объем реакоционной смеси 15 мл, температура 11 С.рН 5,6 поддерживают при непрерывномподтитровывании 0,5 н. соляной кислотой,контролируя рН с помощью потенциометраЛПУ, Через 30 мин добавляют 0,5 мланилина.Реакционную смесь наносят на колонку (У 100 мл) с ииэтиламинээтилцеллюлозой (ДЭАЭ-целлюлозой) в бикарбоПредлагается способ получения новых соединений, которые могут найти применение в биологической химии и фармацевтической промьицленн ости.Нуклеозид-трифосфаты обычно применяются в качестве промежуточных веществ в синтезе различных лекарственных препаратов и витаминов 1.Предлагаемые-амиды нуклеозид- -трифосфаты обладают повышенной реакционной способностью.Способ получения-амидов нуклеозид- -5 -грифосфатов, заключается в том, что нуклеозид- трифосфат обрабатывают15-20-кратным избытком водораствори мого карбодиимида в водной среде при рН 5,0-6,0 и температуре 10-15 С с последующей обработкой амином алифатического или ароматического ряда или азидом. 20В качестве аминов алифатического или ароматического ряда или азидов обычно испол ьзуют этилен ди амин, гексамети"1лендиамин, анилин, бензиламин, ( /5 -фенилэтиламин, циклогексилалшн, морфолин, 25 й " твими- аФтамвмиаам и та ав иииа ъ т. С . ,йтанатной форме и хроматографируют в линейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбонатного буфера (рН 7,5),Концентрация буфера в смесителе 0,01 М,в резервуаре - 0,3 М, Объем смесителяи резервуара по 1 л, Скорость элюирования ЗО мл/час, объем фращий 12 мл.фракции пика, соответствующие продукту,собирают и упаривают на ротационном исЮпарителе при ЗО С.Полученный продукт анализируют мето дом хроматографии на бумаге проведением кислотного гидролиэа, снятиемУф-спектров и спектров ЯМР ( Г,П р и м е р 2 Получение ф -бенэиламида гуаноэин-чрифосфата.15Реакцию водоастворимого карбодиимида с гуанозингрифосфатом (ГТФ) проводят в термостатированной кювете с погруженными в нее стеклянным и каломель 2ным электродами для измерения рН средыс помощью потенциометра ЛПУ, Реакционная смесь содержит 45 мкмоль ГТФ,380 мг водорастворимого карбодиимида,объем реакоционной смеси 15 мл, темпе 25ратура 11 С, рН 5,6 поддерживают принепрерывном подтитровывании 0,5 н, соляной кйслотой контролируя рН с помощью потенциометра ЛПУ, Через 30мин добавляют 5 ммоль (0,5 мл) бензиламина.зоРеакционную смесь наносят на колонку (100 мл) с ДЭАЭ-целлюлозой вбикарбонатной форме и хроматографируюв линейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбонатного буфера(рН 7,5). Концентрация буфера в смесителе 0,01 М, в резервуаре 0,3 М, Объемсмесителя и резервуара по 1 л, Скоросгьэлюирования ЗО мл/час, объем фракций1 О2 мл, Фракции пика, соответствующиепродукту, собирают и упаривают на ротаоционном испарителе при ЗО С,Полученный продукт анализируют методом хроматографии на бумаге, прове 45дением кислотного гидролиза, снятиемУф-спектров и спектров ЯМР (2 Р).П р и м е р 3, Получение-амидааденозин- трифосфата 1,Реакцию водоаств оримого карбодиимида с аденоэин- трифосфатом проводят .в термостатированной кювете с погруженными в нее стеклянным и каломельнымэлектродами для измерения рН среды спомощью потенциометра ЛПУ, Реакционная смесь содержит 45 мкмоль АТФ,. 380 мг водорастворимого карбодиимида,объем реащионной смеси 15 мл, тем, пература 11 С, рН 5,6 поддерживаютпри непрерывном подтггровывании 0,5 и,соляной кислотой, контролируя рН с помощью потенциометра ЛПУ,Через 30 мин добавляют 5 ммоль(1,17 г) основания 1,10-диамино,8,9,10-тетраги дронафталина,Реакционную смесь наносят на колонку(1 Г 100 мл) с ДЭАЭ-целлюлозой в бикарбонатной форме и хроматографируют влинейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбонатного буфера (рН 7,5)Концентрация буфера в смесителе 0,01 М,резервуара О,ЗМ. Объем смесителя и резервуара по 1 л. Скорость элюирования30 мл/час, объем фращии 12 мл. Фракции пика, соответствующие продукту, собирают и упаривают на ротационном исопарителе при 30 С,Полученный продукт анализируют методом хроматографии на бумаге, проведением кислотного гидролиза, снятием Уф-спектров,П р и м е р 4. Получение- (и-азидо) анилида аденозин-трифосфата).Реащию водорастворимого карбодиимида с аденозин 5 -трифосфатом проводят в термостатированной кювете с погруженными в нее стеклянным и каломельным электро дами для йзмерения рН среды с помощью потенциометра ЛПУ, Реакционная смесь содержит 45 мкмоль АТФ, 380 мг водорастворимого карбодиимида, объем реаокционной смеси 15 мл, температура 11 С, рН 5,6 поддерживают при непрерывном подтитровывании 0,5 н, соляной кислотой, контролируя рН с помощью потенциометра ЛПУ, Через ЗО мин добавляют 5 ммоль (0,67 г) и -аэиданилина.Реакционную смесь наносят на колонку ( У 100 мл) с ДЭАЭ-целлюлозой вбикарбонатной форме и хроматографируютв линейном градиенте концентрации триэтиламмонийбикарбонатного буфера (рН 7,5)Концентрация буфера в смесителе 0,01 М,в резервуаре 0,3 М, Объем смесителяи резервуара по 1 л, Скорость элюирования 30 мл/час, объем фракций 12 мл.фракции пика, соответствую 1 цие продукту,собирают и упараают на ротационном испарителе при 30 С,Полученный продукт анализируют методом хроматографии на бумаге, прове- ДЕНИЕМ КИСЛОТНОГО ГИПРОЛЦ;И, Сцлтяа 4 Уф-спектров,Реакция идет по следуя:. гой схеме:ОН ОК ОН ОИПрименяли следующне амины (,в схеЙг Мйднленднамнн (Н,К СН СН 2 М Щ,ксаметиленднамин 1 НфСН(СЩ 4 СНЯ НД(О) 6-Р- феннлетнл О- иикиагекеииамии (ЯО О1 И 2 морфолнн (О -феннлен днами т 1, 10-днамино,8, 9, 10 афталинаЗИ 2 ИС 1 ор аг формулы45 и данил ими 2 К етени форму ла к О5 О - Р - Ой я -амИго-Г тличаю ид 5-тр ифосфаIшают 15-20- творимого кар е при рН 5,006 С О ОфРРРА + ЗМ С =%ВфО 1ОР тфО А НОВ ОИдезоксиаденоэин-ггрнфосфат формулы ОИ ОИ ОКйВ .ОНгуаноэннтрифосфат формулы М СК 20 У-О -Р-О - РО 2ОИОИ 0 Н дезоксигуаноз он-трнф г О О ОО М 20-Т-О-Т-О-Т - ОВК, В ОЗ ОИ ОВВ 06 цяти дингрифосфат формулы 1, Способ получени эид 5 -трйфосфатов,я тем, что нуклеоз ледовательно обрабат ым избытком водорас иимида в водной сре клещ нй- по- крат- о616265 Составитель В, ЖестковРедактор О. Кузнецова Техред А, Богдан Корректор Л, Мельниченко Заказ 4016/25 Тираж 559 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Рауновская нлбд. 4/5 Филиал ППП Патент", г, ужгород, ул. Проектная, 4 ои температуре 10-15 С и амином алифатического или ароматического ряда или ази дом.2. Способ по п, 1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве аминов алифатического или ароматического ряда или азидов используют этилендиамин, гексаметилен, анилин, бенэиламин,3 -енилэтиламцц, ццклогексцламцц, морфолин, й -фецилендцамцн, хлоргидрат1, 10-диамино,8,9, 10-тетрагцпроцафталина, Ц -аз иданилцн, ими даэол,Источники информации, принятые во5внимание при экспертизе:1, Кочетков Н, К, и ир. Химия углеводов, М"Химияф, 1967,