Способ количественного определения солей нуклеозидфосфорных кислот

Союз СоветскихСфцеалистнчесюаРеспублик ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТВЛЬСТВУ(51) М Кл601 Н 3 рнсо и йсудорстооииый коСовота Мииистроооо долам изооротои открытию 23) Приоритет43) Опубликоваио 2 бюллетень 3 ДК 543. 24 88.8) 4 Ь) Йата опубл писания 22.11.7 овани, Веверис и У, Я 71) Заявите 1 ОГОБ КОЛИЧЕСТВЕННОЮ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОЛЕ НУКЛЕОЗИДФОСФОРНЫХ КИСЛОТй не астя к количест нуклеозидфос ислоты являютс одными еи ооктав цуСоли н зидяются в медицине ских исслед способ определения солейсфорных кислот методом хрома- бумаге, пропитанной ацетатным ом 11 ется сонцируюшнхетилсулъфокНедостатком способа является его невысокая точность и длительность (3-16 час),Известен способ количественного определения солей нуклеозидфосфорцых кислотпутем обработки пробы вешества избыткомхлорной кислоты с последуюпчпм титрованиемполучен.лй смеси основным титрантом в среде метилэтилкетоца2,Недостатком известного способа является ограниченность применения, так как спосв ид растворяются солилот н сильные оснокси де - нуклеотидытитровання. В смеетилсульфоксид растллоз ол В метилцуклеозидфания, в диуклеозидьи метилцелл ных к тилсул про озольвИзобретение отцоситс ному определению солей кислот (нуклеозидов),Н уклеозидфосфорные к полифункцибнальными при ниями, которые входят в вых кислот и коферменто фосфорных кислот примен биохимических и биологи ниях. Известен цуклеозидфо тографии насоб не применим для анализа соле, рворимых в метилэтилкетоне,Целью изобретения является расширейиеобласти примененИя способа,,Пля этого пробу анализируемого вешестВва обрабатывают избытком хлорной кислотыс последующим титрованием полученной смеси основным титрантом в среде смеси метилцеллозольва и диметилсульфоксида, взятых в соотношении 1;2-10,ООтличительной особенностью предлагаемого способа является использование органического растворителя - смеси метилцеллозольв - диметилсульфоксид в соотношениях1:2-10 по объему,Положительный эффект достигачетанием растворяющих и диффереойств метилцеллозольва и димворение достигается без нагревания и расецепления нуклеоти дов,Растворение и дифференцирование обеспечиваются только в следующих соотношениях- метилцеллозольвГ диметилсульфокси и, равное 1;2-10 по объему. Гри более низких соотноц 1 ениях не достигается полное растворение определяемого образца и продуктов титрования. Разложение полностью при более высоких соотношениях не проводится и не обеспечивается дифференцирование.Способ заключается в следуюецем, Навеску определяемого образца (0,01-0,03 г) в ячейке титрования обрабатывают с 1-2 дфл хлорной кислоты в метилцеллозольве и 2 мл диметилсульфоксида. Раствор перемешивают до полного растворения навески, Затем в раствор добавляют еше 2-8 мл дцметилсульфоксида, погружают в раствор пару элек тродов (например, стеклянный -каломельнь 1 й) и проводят потенциометрическое титровацце стандартным раствором сильного основания, например гидроокисью калия, гидроокисью тетраэтйпаммония в спирте. На кривых потенциометрического титрования появляются 3-4 скачка потенциала, Первый скачок всег да соответствует сгтитровани э остатка хлорной кислоты, а последуюц 1 ие - дифференцированному титрованию кислотных групп нуклеозидфосфорных кислот, Ошибка + 2-3 р,.П р и м е р 1, Определение смеси дикалиевой соли аденозин-"монофосфорнои кислоты с аденозцн-монофосфорной кислотой.Навеску образца величиной 0,02075 г обрабатывают точно 1,00 мл 0,1233 к,хлор ной кислоты в метилцеллозольве, добавляют 2 мл диметилсульфоксида ("х ч") и раствор перемешивают в течение 5-7 мин до полного растворейия навески. Затем добавляют еше 5 мл диметилсульфоксида и раствор потенциометрически титруют 0,1507 н,раствором гидроокиси калия в этаноле, На кривой титрования появляются 3 скачки потенциала, Первый соответствует оттцтрованию непрореагировавшего остатка хлорной кислоты. По сривой находят, что при этом израсходовано 0,45 мл титранта. По формуле Х= - 0,45)1 0 1233 что 0,37 мл титранта соответствуют определению динатриевой соли нуклеотида (мол,в, 423), т.е. содержание нуклеотида в смеси 5 . Последукндие два скачка соответствуют последовательному оттитрованию двух фосфорнокислых групп, причем на титрование обеих израсходуются одинаковые объемы титранта - по 0,39 мл, Ис. :1 ользуя объем, прошедший на титрованиелия, определяют, что на титрование каждой фосфоркэкц"лой группы израсходуются0,17 мл титрацта. По известной формуле(мол.в. 347), цайдено, что содержаниеаденозцн- монофосфорцой кислоты в сд 1 еси составляет 42,7%,П р и м е р 2. Определение смеси динатриевой соли цитидин, 3 -монофосфорной кислоты с гидроокисью натрия.Навеску образца величиной 0,02241 г 10 обрабатывают 2,00 мл 0,0995 ц,хлорнойкислоты в метилцеллозольве, добавляют2 мл диметилсульфоксида и передфецфиваклраствор в течение 5-7 миц до полногорастворения. Затем в раствор погружаютпару электродов,дэбавлшот ешэ 4 мл лцметилсульфоксида ц тцтэ"ют Оу 1.й 25 ц,ростворам гидроокцсц тетраэтилад.моция в цзо -пропаколе. На конвой тцтровацця 11 ояцлянутся 3 скачка потенциала, Пэ Втэоэд 1 и третьему скачкам. которые соответствуют этт 11 трОВани 10 фэсфэонэкислых ерупп, эцредоляеог эдццаковый расход гцтрацта - .0,2 д1Исход% цз этого объема 11 о известкой формуле, вьфцисляюг сэцержаццо оиределяемой р 5 сэ;и: цуклеотциа - 83,7",р 1 сцол 1 -уц эб-.,емтцтранга, пошедший ка тцтроезанце остаткахлоэ 11 эй кислоты (0,07 дц 1) и Объо,фы цзрасхэ;1 эвац 1 еь е ца гцтрва 1:цо бэ,х Фэ фэр-.ргркцрльх групп ко формуле Х --- р - ,. - 30 .О, 08 -О, 28 2, опэедсляют, цтэ а э 11 ре дело 1311 е гцдэоэкцс Натрия расхэдуеотс0,45 д 1 л тцтрацта., По цзвестцой фэрд 1 улеифчцсляеот сэдержанце гидроокцси катэця всекес ц - 14,6,.35П р и м е р 3. Оцределекце сдфеси мэцо 1натРиевэй сОли "уэцдцн, 3 -пцклэрлэср 11 эдцэй 1 кислоты и дц 1.атрц вой соли уэцдиех - э - 11 эцэфэсфэрнэй кислоты,40 Навеску образца 0,02563 г обрабатывают100 мл 0,211 н и раствоэа хлоркой кислоты в метилцеллуолозольве и 2 мл 1 диметилсулу фоксида (хч), Перемеецивакут (5-10 д цн) до полного растворения образца, зате 1, добав ляют еше 8 мл диметилсульфоксцда, погружаеэт электроды и осупеству 1 чот потецццомет рцческое титрованце 0,1825 ц.раствором гцдроокисц тетоаметиламмэкця в цзэцропаколе, На кривой тцтрэвация появляются 3 ска 1- 50 ка потенциала: первый соотве гствует эттцтрованию остатка хлорной кислоты и сэотве 1 - ствует 0,53 мл, второй соответствует титрованию сильных фосфорных гоупп обоих нуклеотидов и составляет 0,40 мл, третцй 55 совместному титрованцю одной фосфоэкокцс.лой группы мокэфосфоркой кислоты и кислотных групп пиримидинового гетероцикла обоих цуклеотцдов и составляет 0,64 мл, 11 э раз-.носги объемов титранта, израсходэвацць.х 60 к второй и третий скачкц цэтекццала, .клпа577459 0,23 мл находят, что на титрование другойсоли нуклеотида расходуется 0,17 мл титранта, Вычисляют содержание натриевой соли уридин,3 -циклофосфорной кислоты всмеси - 3 9,6%. Результаты определения смесей превгтавлены в таблице,14,35 10,28 14,15 10,35-1,4 -1,8 25,46 1;2 7,13 Г- Мф пинатриевая соль +-1,6 -З.О 26,73 5,44 5,28 1:7 22,26 10,63 А-ТФ тетранатриеваясол ь+а денозин 1:8 Примечание: А-Мф -апенозин-монофосфорная кислота А,3 - ЦФ - апенозин,3-циклофосфорная кислота, У-Мф-уродинмонофосфорная кислота,1 г l)У,3 -Цф-урипин, 3-циклофосфорная кислота, Т(3)-Мф тимидин(3) - монофосфорная кислота, Г-Мф-гуанозин-монофосфорная кислота,/ А- Тф-апенозин-трифосфорная кислота, Формула изобретения ботки пробы анализируемого вешества избытком хлорной кислоты с последующим титрованием полученной смеси основным титрантом в среде органического растворителя. дено, что на титрование Юшатриевой соли урипиц-монофосфорной кислоты израсхо(повано 0,23 мл титрацта, содержание этой соли вычисляют по известной формуле и составляет 60,2",о, 11 о разности обьемов 0,40А-Мф динатриеваясоль+АМФ Способ количественного опрепеления солей нуклеозипфосфорных кислот путем ьбра 11,28 18,95 22,02 10,95Заказ 3675/33 Тираж 1101 Подписное ЦНИИГ 1 И Государктвенного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий 113036, Москва, Ж, Раушская набд, 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 7о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью расширения области применения способа, в качестве органического растворителя используют смесь метилцеллозольва и диметилсуль фоксида взятых в соотношении 1:2-10,Источники информации, принятые во внимание при икспертизе; 8 1, Губен-Иейль, Методы органическ",ч химии, М., "Химия", 1967, с, 910-911